Zmiany ekspresji genów w limfocytach T CD4 + Vbeta8 + pobudzonych przez ekspozycję in vivo na superantygen bakteryjny na superantygen bakteryjny enterotoksyny gronkowcowej B (SEB) w porównaniu do CD4 + Vbeta8 + nieenergetycznymi komórkami T oceniano za pomocą mikromacierzy DNA zawierających 5184 mysich komplementarnych DNA. Anergię w śledzionowych limfocytach T myszy BALB/c immunizowanych SEB została zweryfikowana przez dramatycznie zmniejszoną zdolność proliferacyjną i 8 x mRNA GRAIL w komórkach T CD4 + Vbeta8 + pobranych od myszy 7 dni po wstrzyknięciu. po wstrzyknięciu. Przy progu testu asocjacyjnego t wynoszącym P<0,0005, 96 genów było nadekspresji lub wykryte tylko w anergicznych komórkach T, podczas gdy 256 genów było stłumione lub nie wykryto ich w anergicznych limfocytach T. Sześć z ośmiu różnicowych ekspresji testowanych przy użyciu ilościowego PCR w czasie rzeczywistym zostało potwierdzonych. Komunikat dla B-Raf wykryto tylko w komórkach nieanergicznych, podczas gdy ekspresja modulatora sygnalizacji TCR Slap (białko adaptorowe podobne do Src) i fosfatazy specyficznej dla łańcucha zeta TCR fosfatazy Ptpn3. Modulacja wielu genów sugeruje regulację w dół sygnalizacji Wnt/beta-kateniny i wzmocnioną sygnalizację Notch w komórkach anergicznych. komórkach anergicznych. Zgodnie z wcześniejszymi doniesieniami w nie-superantygenowym modelu in vivo modelu anergii, mRNA dla CD18 i czynnika transkrypcyjnego Satb1 (specjalne białko wiążące białko wiążące bogate w AT 1) było zwiększone w komórkach T pobudzonych przez SEB. Jest to pierwsze doniesienie o globalnych zmianach transkrypcyjnych w limfocytach T CD4+, które stały się anergiczne przez ekspozycję na superantygen. ekspozycję na superantygen. --- Modulacja chromatyny w różnych elementach cis jest krytyczna dla rekombinacji V(D)J podczas rozwoju komórek T i B. MARbeta, region związany z macierzą region (MAR) zlokalizowany przed enhancerem receptora komórek T beta (TCRbeta) (Ebeta), odgrywa kluczową rolę w wyciszaniu aktywacji TCR za pośrednictwem Ebeta. Przez Testy nadwrażliwości na DNaseI, pokazujemy tutaj, że nadekspresja MAR SMAR1 i Cux/CDP moduluje strukturę chromatyny w MARbeta. Ponadto wykazaliśmy, że w funkcji wyciszającej MARbeta pośredniczą niezależnie przez SMAR1 i Cux/CDP, jak oceniono na podstawie ich zdolności do tłumienia ekspresji genów reporterowych zależnych od Ebeta. Co więcej, aktywność represora SMAR1 jest silnie zwiększona w obecności Cux/CDP. Te dwa białka fizycznie oddziałują ze sobą i kolokalizują w regionie okołojądrowym poprzez domenę SMAR1 wymaganą do represji. Domena represyjna SMAR1 jest oddzielona od domeny wiążącej MARbeta i zawiera sygnał lokalizacji jądrowej sygnał i domenę bogatą w argininę-serynę (RS), charakterystyczną dla regulatorów splicingu pre-mRNA regulatorów splicingu. Nasze dane sugerują, że na podwójnie dodatnim etapie rozwoju komórek T działające cis elementy MARbeta rekrutują silne negatywne regulatory Cux i SMAR1. regulatory Cux i SMAR1 do kontrolowania rekombinacji i transkrypcji za pośrednictwem Ebeta. transkrypcję. --- Regulacyjne limfocyty T (komórki T(reg)) są niezbędne dla autotolerancji i homeostazy immunologicznej. homeostazy immunologicznej. Brak funkcji efektorowych limfocytów T (T(eff) cell) i wzrost aktywności supresyjnej komórek T(reg) supresyjnej przez komórki T(reg) są zależne od programu transkrypcyjnego indukowanego przez Foxp3. programu transkrypcyjnego indukowanego przez Foxp3. Tutaj donosimy, że represja SATB1, organizatora genomu organizatora genomu, który reguluje strukturę chromatyny i ekspresję genów, była kluczowa dla fenotypu i funkcji komórek T(reg). Foxp3, działając jako represor transkrypcyjny, bezpośrednio tłumił locus SATB1 i pośrednio tłumił go poprzez indukcję mikroRNA, które wiązały SATB1 3' untranslated region. Uwolnienie SATB1 spod kontroli Foxp3 w komórkach T(reg) spowodowało utratę funkcji supresyjnej, ustanowienie programów transkrypcyjnych komórek T(eff) i indukcję cytokin komórek T(eff). Nasze dane potwierdzają że hamowanie modulacji globalnej przebudowy chromatyny, w której pośredniczy SATB1 ma kluczowe znaczenie dla utrzymania funkcjonalności komórek T(reg).
Który typ genów jest modulowany przez SATB1?
Brak funkcji efektorowych komórek T (T(eff)) i wzrost aktywności supresyjnej przez komórki T(reg) są zależne od programu transkrypcyjnego indukowanego przez Foxp3. Tutaj donosimy, że represja SATB1, organizatora genomu, który reguluje strukturę chromatyny i ekspresję genów, była kluczowa dla fenotypu i funkcji komórek T(reg). Uwolnienie SATB1 spod kontroli Foxp3 w komórkach T(reg) spowodowało utratę funkcji supresyjnej, ustanowienie programów transkrypcyjnych komórek T(eff) i indukcję cytokin komórek T(eff). Przy progu testu asocjacyjnego t wynoszącym P