Struktury krystaliczne pełnej długości ludzkiego eukariotycznego czynnika inicjacji (eIF) 4E skompleksowanego z dwoma analogami czapeczki mRNA [7-metyloguanozyną 5'-trifosforanem (m(7)GTP) i P(1)-7-metyloguanozyno-P(3)-adenozyno-5',5'-trifosforan (m(7)GpppA)] zostały w rozdzielczości 2,0 A (gdzie 1 A=0,1 nm). Elastyczność C-końcowego regionu pętli eIF4E skompleksowanego z m(7)GTP była znacznie zmniejszona po skompleksowaniu z m(7)GpppA, co sugeruje znaczenie drugiego nukleotydu nukleotydu w strukturze czapeczki mRNA dla biologicznej funkcji eIF4E, zwłaszcza utrwalenia i orientacji C-końcowego regionu pętli, w tym pozostałości fosforylacji eIF4E. Obecne wyniki dostarczają strukturalnych podstawę dla biologicznej funkcji zarówno N-, jak i C-końcowych ruchomych regionów eIF4E w inicjacji translacji, w szczególności funkcji regulacyjnej poprzez włączanie/wyłączanie fosforylacji białka wiążącego eIF4E-eIF4E. --- Komórkowe eukariotyczne mRNA są zakończone na końcach 5' nukleotydem 7-metyloguanozyny. nukleotydem, cechą strukturalną, która, jak wykazano, jest ważna dla stabilności mRNA, stymulowania biogenezy mRNA (splicing, poli(A) dodawanie, transport nukleocytoplazmatyczny) i zwiększanie wydajności translacji. Podczas gdy mRNA drożdży nie ma dodatkowych modyfikacji czapeczki, zwanej cap0, wyższe eukarionty są metylowane na 2'-O-rybozie pierwszego lub pierwszego i drugiego transkrybowanego nukleotydu. i drugiego transkrybowanego nukleotydu, zwanych odpowiednio cap1 i cap2. W W niniejszym badaniu zidentyfikowaliśmy metylotransferazę odpowiedzialną za tworzenie cap1 w ludzkich komórkach, którą nazwaliśmy hMTr1 (znaną również jako FTSJD2 i ISG95). Pokazujemy in in vitro, że hMTr1 katalizuje specyficzną metylację 2'-O-rybozy pierwszego nukleotydu zamkniętego transkryptu RNA. Stosując knockdown hMTr1 za pośrednictwem siRNA w komórkach HeLa w komórkach HeLa, wykazujemy, że hMTr1 jest odpowiedzialny za tworzenie kap1 in vivo. --- Ekspresja genów eukariotycznych jest zależna od modyfikacji pierwszego transkrybowanego nukleotydu pre-mRNA przez dodanie czapeczki 7-metyloguanozyny. Czapeczka chroni transkrypty przed egzonukleazami i rekrutuje kompleksy, które które pośredniczą w wydłużaniu transkrypcji, przetwarzaniu i inicjacji translacji. Czapeczka jest syntetyzowana przez serię reakcji, które łączą 7-metyloguanozynę z pierwszym transkrybowanym nukleotydem. pierwszego transkrybowanego nukleotydu poprzez mostek trifosforanowy 5' do 5'. U ssaków synteza kap jest katalizowana przez sekwencyjne działanie RNGTT (RNA guanylotransferazy i 5'-fosfatazy) i RNMT (RNA guanine-7 metylotransferazy), enzymów rekrutowanych do RNA pol II (polimerazy II) podczas wczesnych etapów transkrypcji. wczesnych etapów transkrypcji. Niedawno odkryliśmy, że metylotransferaza kap jest heterodimerem składającym się z RNMT i aktywującej RNMT podjednostki RAM (ang. podjednostki RAM (mini-białko aktywujące RNMT). RAM aktywuje i stabilizuje RNMT a tym samym ma kluczowe znaczenie dla metylacji czapeczki komórkowej i żywotności komórek. W W niniejszym badaniu donosimy, że RNMT oddziałuje z N-końcowymi 45 aminokwasami RAM, domeną niezbędną i wystarczającą do maksymalnej aktywacji RNMT. W przeciwieństwie do tego Natomiast mniejsze składniki tej domeny RAM są wystarczające do stabilizacji RNMT. RAM funkcjonuje w jądrze i donosimy, że import jądrowy RAM jest zależny od sygnałów lokalizacji jądrowej PY i białka transportu jądrowego Kapβ2 (karioferyna β2). białka transportowego. --- Końcówki 5' wielu wirusowych i komórkowych mRNA zawierają sekwencje typu m7G(5")pppNm. Metylotransferaza RNA (guaniny-7-), która specyficznie metyluje 5'-końcową resztę guanozyny RNA zakończoną dinukleozydem trifosforanem dinukleozydu G(5')pppN- została oczyszczona z cytoplazmy komórek HeLa. Około dwie trzecie aktywności metylotransferazy wykrytej w teście wykorzystującym umetylowany mRNA wirusa krowianki jako akceptor, znajdowała się w cytoplazmie, gdy komórki zostały przerwane przez homogenizację Dounce'a; 30% aktywności cytoplazmatycznej aktywności cytoplazmatycznej było związane z rybosomami, ale zostało usunięte przez przemywanie 0,5 M KCl. Enzym został oczyszczony 165-krotnie z cytoplazmy poprzez usunięcie kwas nukleinowy przez podział fazowy, a następnie wytrącanie siarczanem amonu i chromatografię kolumnową na DEAE-celulozie, denaturowanej DNA-agarozie i CM-Sephadex. Częściowo oczyszczony preparat enzymatyczny metylował heterologiczne tRNA, jak również jak i mRNA krowianki, ale metylotransferazy tRNA można było oddzielić od aktywności mRNA przez sedymentację w gradiencie sacharozy i filtrację żelową na Sephadex G-200. Produktem częściowo oczyszczonego enzymu wykorzystującego mRNA krowianki jako substrat była wyłącznie 7-metyloguanozyna zlokalizowana w końcowym dinukleozydzie trifosforanu. Oprócz RNA i syntetycznych polirybonukleotydów zakończonych w trifosforanie dinukleozydu, wolny G(5')pppG może być metylowany, ale GTP, GDP, i G(5')pppG nie. Enzym metyluje również difosforan dinukleozydu G(5')pppG, ale znacznie mniej wydajnie niż G(5')pppG. S20, W 3,8, promień Stokesa 3,6 nm i masie cząsteczkowej 56 000 uzyskano z sedymentacji w gradiencie sacharozy i S i chromatografii kolumnowej Sephadex G-200. --- Nadrodzina białkowych fosfataz tyrozynowych (PTP) obejmuje co najmniej jeden enzym z substratem RNA. Niedawno wykazaliśmy, że domena trifosfatazy RNA enzymu zamykającego mRNA Caenorhabditis elegans jest związana z rodziną enzymów PTP poprzez podobieństwo sekwencji i mechanizmu działania. PTP najbardziej podobny w sekwencji sekwencji do trifosfatazy enzymu zamykającego jest BVP, PTP o podwójnej specyficzności kodowany przez wirus poliedrozy jądrowej Autographa californica. Chociaż BVP wcześniej wykazano, że ma umiarkowaną aktywność fosfatazy tyrozynowej i serynowo-treoninowej. aktywność fosfatazy tyrozynowej i serynowo-treoninowej, okazuje się, że jest ona znacznie silniejsza jako RNA 5'-fosfataza. BVP sekwencyjnie usuwa fosforany gamma i beta z 5' RNA zakończonego trifosforanem, pozostawiając koniec 5'-monofosforanowy. Aktywność była specyficzna dla polinukleotydów; trifosforany nukleotydów nie były hydrolizowane. Zmutowane białko, w którym cysteina w miejscu aktywnym została zastąpiona seryną, było nieaktywne. nieaktywne. Trzy inne PTP o podwójnej specyficzności (VH1, VHR i Cdc14) nie wykazywały wykrywalnej aktywności fosfatazy RNA. Dlatego enzym zamykający i BVP są członkami odrębnej podrodziny podobnej do PTP, która może usuwać fosforany z RNA. --- Ekspresja genów u eukariontów jest zależna od czapeczki metylowej mRNA, która pośredniczy w przetwarzaniu przetwarzanie mRNA i inicjację translacji. Synteza czapeczki metylowej rozpoczyna się od dodania 7-metyloguanozyny do nukleotydu inicjującego transkryptu transkryptów RNA pol II (polimerazy II), co zachodzi głównie podczas transkrypcji, a u ssaków transkrypcji i u ssaków jest katalizowany przez RNGTT (RNA guanylyltransferase and 5') i RNMT (metylotransferaza guaniny-7 RNA). RNMT ma domenę domenę metylotransferazy i domenę N-końcową, której funkcja jest niejasna. jest konserwowana u ssaków, ale nie jest wymagana do aktywności metylotransferazy czapeczki. W W niniejszym badaniu donosimy, że domena N-końcowa jest niezbędna i wystarczająca do rekrutacji RNMT do miejsc inicjacji transkrypcji i że rekrutacja zachodzi w DRB (5,6-dichloro-1-β-D-ribofuranozylobenzimidazol). The Podjednostka aktywująca RNMT, RAM (miniproteina aktywująca RNMT), jest również rekrutowana do miejsc inicjacji transkrypcji poprzez interakcję z RNMT. N-końcowa domena RNMT jest wymagana do ekspresji transkryptu, translacji i proliferacji komórek. proliferacji komórek. --- Białka Myc c-Myc i N-Myc są niezbędne dla rozwoju i homoeostazy tkanek. tkanek. Są one regulowane w górę przez czynniki wzrostu i przekazują sygnał do wzrostu i proliferacji komórek. Białka Myc są również znaczącymi onkogenami w wielu typach nowotworów u ludzi. Białka Myc regulują transkrypcję mRNA mRNA kodującego białko oraz tRNA i rRNA, które pośredniczą w translacji mRNA na białko. na białko. Białka Myc również regulują translację poprzez zwiększenie dodatku 7-metyloguanozyny (czapeczka metylowa) do końca 5' pre-mRNA. Dodanie czapeczki metylowej zwiększa szybkość translacji transkryptów poprzez kierując modyfikacjami RNA i inicjacją translacji. Myc indukuje tworzenie czapeczki metylowej poprzez promowanie fosforylacji polimerazy RNA II, która rekrutuje enzymy do RNA, a także poprzez regulację w górę enzymu SAHH (hydrolazę S-adenozylohomocysteiny), który neutralizuje hamujący produkt uboczny reakcji metylacji. reakcji metylacji. Metylacja czapeczki indukowana przez Myc jest głównym efektem funkcji Myc i jest niezbędna do aktywowanej syntezy białek, proliferacji komórek i transformacji komórek. Zahamowanie metylacji czapeczki jest syntetycznie letalne przy podwyższoną ekspresją białka Myc, co wskazuje na potencjał jako celu terapeutycznego. --- Charakterystyka specyficzności donorowej i akceptorowej mRNA guanylotransferazy i mRNA (guanina-7-)-metylotransferazy wyizolowanych z rdzeni wirusa rdzenia wirusa krowianki pozwoliło nam rozróżnić alternatywne sekwencje reakcji prowadzące do tworzenia prowadzącymi do utworzenia 5'-końcowej struktury m7G(5')pppN. The mRNA guanylylotransferaza katalizuje przeniesienie reszty GMP z GTP na akceptorów, które posiadają 5'-końcowy difosforan. Polirybonukleotyd zakończony difosforanem polirybonukleotyd jest preferowany w stosunku do difosforanu mononukleozydu jako akceptora co sugeruje, że reakcja guanylotransferazy zachodzi po inicjacji syntezy RNA syntezy RNA. Chociaż wszystkie badane homopolirybonukleotydy (pp(A)n, pp(G)n, pp(I)n, pp(U)n i pp(C)n) są akceptorami dla guanylotransferazy mRNA wskazujące na brak ścisłej specyficzności sekwencji, te zawierające puryny są preferowane. Tylko GTP i dGTP są donorami w reakcji; 7-metyloguanozyna (m7G) trifosforan 7-metyloguanozyny (m7G) nie jest donorem, co wskazuje, że guanylacja musi poprzedzać 7-metylację guaniny. Preferowany akceptor mRNA (guaniny-7-)-metylotransferazy jest produkt reakcji guanylotransferazy polirybonukleotyd o 5'-końcowej sekwencji G(5')pppN-. Enzym enzym może również katalizować, ale mniej wydajnie, metylację następujących: trifosforanów dinukleozydów o strukturze G(5')pppN, GTP, dGTP, ITP, GDP, GMP i guanozyny. Enzym nie katalizuje przeniesienia grup metylowych do ATP, XTP, CTP, UTP lub do związków zawierających guanozynę z grupami fosforanowymi grupami fosforanowymi w pozycjach 2' lub 3' lub w wiązaniach fosfodiestrowych 3'-5'. Ta ta ostatnia specyficzność zapewnia wyjaśnienie braku wewnętrznej 7-metyloguanozyny w mRNA. W obecności PPi, guanylotransferaza mRNA katalizuje pirofosforylację trifosforanu dinukleozydu G(5')pppA, ale nie ale nie m7G(5')pppA. Ponieważ PPi jest generowany w procesie wydłużania łańcucha RNA elongacji łańcucha RNA, stabilizacja 5'-końcowych sekwencji mRNA jest zapewniona przez metylację guaniny-7. --- Enzymy Decapping scavenger (DcpS) katalizują rozszczepienie szczątkowej struktury cap po rozpadzie 3' → 5' mRNA. Niektóre wcześniejsze badania sugerowały, że zarówno m(7)GpppG, jak i m(7)GDP były substratami dla hydrolizy DcpS. Tutaj pokazujemy że mononukleozydowe difosforany, m(7)GDP (difosforan 7-metyloguanozyny) i m(3)(2,2,7)GDP (difosforan 2,2,7-trimetyloguanozyny), wynikające z odkapslowania mRNA przez DcppS. przez kompleks Dcp1/2 w procesie rozpadu 5' → 3' mRNA, nie są degradowane przez rekombinowane białka DcpS (ludzkie, nicienia i drożdży). Ponadto, podczas gdy mononukleozydowe difosforany (m(7)GDP i m(3)(2,2,7)GDP) nie są hydrolizowane przez DcpS, trifosforany mononukleozydów (m(7)GTP i m(3)(2,2,7)GTP) są, wykazując znaczenie łańcucha trifosforanowego dla aktywności hydrolitycznej DcpS. m(7)GTP i m(3)(2,2,7)GTP są rozszczepiane wolniej niż odpowiadające im dinukleotydy (m(7)GTP i m(3)(2,2,7)GTP). odpowiadające im dinukleotydy (odpowiednio m(7)GpppG i m(3)(2,2,7)GpppG), wskazując na zaangażowanie drugiego nukleozydu dla wydajnego trawienia za pośrednictwem DcpS trawienie. Chociaż enzymy DcpS nie mogą hydrolizować m(7)GDP, mają wysokie powinowactwo wiązania do m(7)GDP. wysokie powinowactwo wiązania do m(7)GDP, a m(7)GDP silnie hamuje hydrolizę DcpS m(7)GpppG, co sugeruje, że m(7)GDP może funkcjonować jako skuteczny inhibitor DcpS. Nasze dane mają istotne implikacje dla regulacyjnej roli m(7)GDP w szlakach metabolicznych mRNA szlakach metabolicznych mRNA ze względu na jego możliwe interakcje z różnymi białkami wiążącymi czapeczki, takimi jak białka, takie jak DcpS lub eIF4E. --- Funkcja cytoplazmatycznych PABP [białek wiążących poli(A)] w promowaniu translacji mRNA była intensywnie badana. Jednak PABP mają również mniej wyraźnie zdefiniowane funkcje w obrocie mRNA, w tym role w domyślnej deadenylacji, głównym główny etap ograniczający szybkość rozpadu mRNA, a także role w regulacji obrotu mRNA przez obrotu mRNA przez cis-działające elementy kontrolne oraz w wykrywaniu nieprawidłowych transkryptów mRNA. transkryptów mRNA. W niniejszym artykule dokonujemy przeglądu naszego obecnego zrozumienia złożonej roli PABP1 w obrocie mRNA, koncentrując się na ostatnich postępach w badaniach nad ssaków i podkreślając niektóre z głównych pytań, które pozostają do rozwiązania. odpowiedzi. --- Translacja poliadenylowanego i niepoliadenylowanego RNA uzyskanego z gruczołu mlekowego szczura gruczołu mlekowego szczura w okresie laktacji była prawie całkowicie hamowana przez 0,5 mM 7-metyloguanozyno-5'-fosforan w systemie bezkomórkowym zarodków pszenicy. Hamowanie to inhibicja została utrzymana podczas przygotowywania mRNA białka serwatkowego 9S i mRNA kazeiny 12S i 15S. Chemiczne odkapslowanie tych mRNA spowodowało podobną redukcję ich aktywności. podobną redukcję ich aktywności. Chociaż duża frakcja mRNA białek mleka mRNA w mleku nie posiada 3'-poliadenylacji, wyniki te pokazują, że mRNA w gruczole mlekowym zawierają 5'-końcową czapeczkę 7-metyloguanozyny. --- Połączenie kinazy polinukleotydowej T4, fosfatazy alkalicznej Escherichia coli fosfatazy, enzymu zamykającego drożdży Saccharomyces cerevisiae składającego się z alfa (guanylotransferazy RNA) i podjednostki beta (5'-trifosfatazy RNA) oraz jego podjednostki alfa bez podjednostka alfa bez aktywności 5'-fosfatazy RNA została wykorzystana do ustalenia prostej enzymatycznej metody oznaczania gatunków RNA z 5'-hydroksylem, 5'-monofosforanem, 5'-difosforanem lub 5'-trifosforanem. Używając tej metody, stwierdziliśmy, że segmenty wirusowego genomowego RNA (vRNA) zarówno typu A, jak i typu C niosą tri- lub difosforany na swoich końcach 5'. Wniosek został oparty na obserwacjach, że: (i) fosforylacja 5' vRNA przez kinazę polinukleotydową T4 przez kinazę polinukleotydową T4 ma miejsce tylko po traktowaniu fosfatazą; oraz (ii) vRNA można zaobserwować zarówno z nienaruszonym drożdżowym enzymem zamykającym, jak i jego podjednostki alfa pozbawionej aktywności 5'-trifosfatazy RNA; ale (iii) poziom pułapkowania jest wyższy dla poziom pułapkowania jest wyższy dla holoenzymu alfa-beta niż podjednostki alfa chociaż względny poziom różni się w zależności od preparatów RNA. Wyniki wspierają inicjację de novo dla replikacji RNA, chociaż transkrypcja vRNA grypy jest inicjowana przez RNA z komórek gospodarza jako startery. --- Opisujemy syntezę i właściwości pięciu dinukleotydowych fluorescencyjnych analogów kapu znakowanych na rybozie 7-metyloguanozynowej grupy cząsteczkowej za pomocą antraniloilu (Ant) lub N-metyloantraniloilu (Mant), które zostały zaprojektowane do przygotowanie fluorescencyjnych mRNA poprzez transkrypcję in vitro. Dwa z analogi mają modyfikację metylenową w mostku trifosforanowym, zapewniając odporność na enzymy dekapujące Dcp2 lub DcpS. Wszystkie te związki zostały przygotowane przez sprzężenie nukleotydu P-imidazolidu za pośrednictwem ZnCl2 z fluorescencyjnie znakowanym mononukleotydem. Aby ocenić użyteczność tych związków do badania interakcji z białkami wiążącymi czapeczkę i związanymi z czapeczką procesy komórkowe, określono zarówno biologiczne, jak i spektroskopowe cechy tych związków. związków. Wyniki wskazują na akceptowalną wydajność kwantową fluorescencji, niezależność od pH, wrażliwość na środowisko i fotostabilność. Analogi czapeczki są włączane przez polimerazę RNA do transkryptów mRNA, które są wydajnie tłumaczone in vitro. Transkrypty zawierające fluorescencyjne czapeczki, ale niezmodyfikowane w łańcuchu trifosforanowym są hydrolizowane przez Dcp2, podczas gdy te zawierające modyfikację metylenową α-β są odporne. Badania modelowe wykorzystujące wrażliwość Mant na zmiany lokalnego środowiska wykazały użyteczność zsyntetyzowanych związków zsyntetyzowanych związków do badania białek związanych z czapeczką. --- Protoonkogen c-myc reguluje ekspresję od 15% do 20% wszystkich genów, w zależności od typu komórki, a regulacja jest zwykle niewielka (1,5 do 2,0-krotna). Autorzy odkryli, że oprócz regulacji obfitości mRNA, c-Myc reguluje tworzenie czapeczki 7-metyloguanozyny na wielu mRNA, w tym docelowych genów transkrypcyjnych i innych nieaktywowanych transkrypcyjnie aktywowane transkrypcyjnie. Ponieważ czapeczka 7-metyloguanozyny jest wymagana do skutecznej translacji, zwiększone tworzenie czapeczki metylowej prowadzi do zwiększonej produkcji białka z genów reagujących na Myc, która przekracza indukcję transkrypcji. Zwiększona metylacja czapeczki jest związana z zależną od Myc zwiększoną aktywnością 2 krytycznych kinaz, TFIIH i p-TEFb, które fosforylują domenę karboksy-końcową polimerazy RNA II domenę karboksy-końcową (CTD). Fosforylacja CTD rekrutuje RNGTT i RNMT, enzymy zaangażowane w zamykanie mRNA, do powstającego transkryptu. Dowody gromadzą się dowody na to, że zwiększona metylacja czapeczki ma znaczący wkład do zależnej od Myc regulacji genów i produkcji białek. --- Lokalizacja bicoid (bcd) mRNA do przedniej i oskar (osk) mRNA do oocytu Drosophila ma kluczowe znaczenie dla kształtowania się zarodka. Poprzednie badania genetyczne wskazywały na udział exuperantia (exu) w lokalizacji mRNA bcd, ale jej rola w tym procesie nie jest zrozumiała. Wyizolowaliśmy biochemicznie Exu i wykazaliśmy, że jest on częścią dużego kompleksu wrażliwego na RNazę, który zawiera co najmniej siedem innych białek. co najmniej siedem innych białek. Jedno z tych białek zostało zidentyfikowane jako białko szokowe białko wiążące RNA Ypsilon Schachtel (Yps), które, jak pokazujemy, wiąże się bezpośrednio z bezpośrednio z Exu i kolokalizuje się z Exu zarówno w oocycie, jak i komórkach macierzystych komorze jajowej Drosophila. Co zaskakujące, kompleks Exu-Yps zawiera mRNA osk. Ten wynik biochemiczny skłonił nas do ponownego zbadania roli Exu w lokalizacji mRNA osk. mRNA osk. Odkryliśmy, że mutanty exu-null są wadliwe w lokalizacji mRNA osk zarówno w komórkach macierzystych, jak i w oocycie. Co więcej, zarówno cząsteczki Exu/Yps jak i mRNA osk wykazują podobny czasowy wzorzec lokalizacji, w którym w którym przejściowo gromadzą się w przedniej części oocytu, a następnie lokalizują się w tylnym biegunie. Proponujemy, aby Exu był głównym składnikiem dużego kompleksu białkowego zaangażowanego w lokalizację mRNA zarówno w komórkach pielęgniarki, jak i rozwijającego się oocytu. --- 1. Zdekapsułkowany RNA wirusa mozaiki tytoniu (TMV) i mRNA globiny królika przygotowano przez enzymatyczne traktowanie RNA pirofosfatazą nukleotydową oczyszczoną z ziemniaka. Zakres usuwania 5'-końcowego 7-metyloguanozyny 5'-monofosforanu (m7GMP) z RNA TMV wynosił co najmniej 97%, jak oszacowano na podstawie znakowania końców 5' in vitro za pomocą S-adenozylo[metylo-3H]metioniny katalizowanej przez metylotransferazy wirusa vaccinia metylotransferazy. 2. Efekt enzymatycznego odkapslowania porównano z efektem wpływ analogów czapeczki na translację mRNA w króliczym lizacie retikulocytów poddanym działaniu nukleazy lizacie retikulocytów królika i w ekstrakcie z kiełków pszenicy. Kiedy translacja była badana przy niskim stężeniu K+, stwierdzono niewielką lub żadną zależność od 5'-końcowej 7-metyloguanozyny w obu systemach bezkomórkowych. Znaczenie 5'-końcowej czapeczki dla wydajnej translacji RNA TMV i mRNA globiny wzrastało wraz ze wzrostem stężenia stężenie K+ w systemie syntezy białek. W lizacie retikulocytów analogi lizatu i enzymatyczne odkapslowanie miały podobny wpływ na translację. W w ekstrakcie z kiełków pszenicy odkapslowanie mRNA powodowało bardziej wyraźny spadek aktywności mRNA, przypuszczalnie mRNA, prawdopodobnie ze względu na zwiększoną podatność odkapslowanych mRNA na nukleazy obecne w ekstrakcie z kiełków pszenicy. na nukleazy obecne w tym systemie syntezy białek. 3. Wymóg dla 5'-końcowej czapeczki było podobne dla syntezy 130,000-Mr i 165,000-Mr kodowanych przez RNA TMV. Wskazuje to, że oba białka mogą być inicjowane we wspólnym miejscu w pobliżu końca 5'. --- Komunikacyjne RNA (mRNA) komórek ssaków są generowane w jądrze z prekursorowych RNA (pre-mRNA, które często zawierają jeden lub więcej intronów), które są kompleksowane z szeregiem niekompletnie zinwentaryzowanych białek. Podczas ich biogenezy, pre-mRNA i ich pochodne mRNA podlegają rozległym modyfikacjom cis-modyfikacjom. Modyfikacje te promują wiązanie różnych polipeptydów, które pośredniczą w różnorodnych funkcjach potrzebnych do metabolizmu mRNA metabolizmu mRNA, w tym eksportu jądrowego, kontroli przez nonsensowny rozpad jakości mRNA (NMD) (NMD) oraz syntezę kodowanego produktu białkowego. produkt. Remodeling kompleksu rybonukleoproteinowego (RNP) poprzez utratę i przyrost składników białkowych przed i po splicingu pre-mRNA, podczas eksportu mRNA i w cytoplazmie ułatwia NMD, zapewniając integralność transkryptomu. Tutaj dokonujemy przeglądu rearanżacji mRNP, które kończą się wykryciem i eliminacji wadliwych transkryptów przez NMD w komórkach ssaków.
Które enzymy biorą udział w dodawaniu 7-metyloguanozyny do mRNA?
Czapeczka 7-metyloguanozyny dodana do końca 5′ mRNA jest niezbędna dla wydajnej ekspresji genów i żywotności komórek. Metylacja czapeczki guanozyny jest niezbędna do translacji większości komórkowych mRNA we wszystkich organizmach eukariotycznych, w których została zbadana. W niektórych systemach eksperymentalnych wykazano również, że metylacja kapu promuje transkrypcję, splicing, poliadenylację i eksport jądrowy mRNA. W dodawanie 7-metyloguanozyny do mRNA zaangażowane są enzymy polimerazy RNA II, guanylotransferazy RNA i metylotransferazy guaniny-7 RNA.