Chromatografia cieczowa z interakcją hydrofilową (HILIC) jest szeroko stosowaną techniką do analizy małych cząsteczek polarnych i oferuje przewagę ulepszonej czułości w spektrometrii mas. Chociaż HILIC jest obecnie często stosowany jako jako ortogonalna metoda frakcjonowania peptydów podczas fazy odkrywania proteomów. proteomicznych, nadal rzadko jest brana pod uwagę do kwantyfikacji. W niniejszym badaniu wydajności pod względem pojemności piku i czułości 3 kolumn HILIC zostały porównano z tradycyjną kolumną z fazą odwróconą C(18) w kontekście ukierunkowanej kwantyfikacji peptydów proteotypowych przy użyciu wybranego trybu monitorowania reakcji (SRM). reakcji (SRM). Wyniki wykazały, że maksymalną czułość w chromatografii HILIC w chromatografii HILIC została osiągnięta przy użyciu kolumny amidowej bez buforu solnego i że sygnał wzrósł w porównaniu do klasycznej chromatografii z fazą odwróconą. Jednak poprawa intensywności jest dość niska w porównaniu do tej uzyskanej dla małych cząsteczek. małych cząsteczek. Wynika to z jednej strony z wyższego efektu matrycy w HILIC i z drugiej strony zmianą stanu naładowania peptydów w rozpuszczalniku organicznym (podwójnie naładowane do monocharge). Podwójnie naładowane jony mogą być łatwiej zdysocjowane niż pojedynczo naładowane jony, co czyni je idealnymi do kwantyfikacji peptydów SRM. kwantyfikacji peptydów SRM. W rezultacie odczynniki "doładowujące" są dodawane do fazy ruchomej do fazy ruchomej, aby przejść od dominujących pojedynczo naładowanych jonów do bardziej korzystnych podwójnie naładowanych gatunków. podwójnie naładowanych. Korzystając z takich zoptymalizowanych warunków, sygnał peptydu jest poprawiony o od dwóch do dziesięciu razy dla 88% peptydów z 81 badanych peptydów. badanych peptydów. --- TŁO: W bioanalizie fosfolipidy mogą wpływać na precyzję i dokładność metod LC-MS/MS i obniżać jakość wyników, zwłaszcza gdy próbki w złożonych biomatrycach są ekstrahowane technikami wytrącania białek techniki wytrącania białek. WYNIKI: Stwierdzono, że zachowanie retencyjne zarówno popularnych farmaceutyków i fizjologicznie istotnych fosfolipidów pod gołą krzemionką hydrofilowej (HILIC) jest bardziej przewidywalne niż w warunkach fazy odwróconej. warunkach. W szczególności, czas retencji fosfolipidów nie był znacząco znacząco wpływać przez zmianę soli i modyfikatorów kwasu w fazach ruchomych. w fazach ruchomych, ale powszechnie stosowane farmaceutyki można odsunąć od tych fosfolipidów fosfolipidów za pomocą modyfikatorów fazy ruchomej. Zastosowano kilka technik spektrometrii masowej spektrometrycznych w celu potwierdzenia tego odkrycia. WNIOSEK: Chromatografia HILIC jest cenionym narzędziem w opracowywaniu solidnych bioanalitycznych z minimalnymi i przewidywalnymi zakłóceniami fosfolipidowymi. Ponadto, dodanie niewielkiej ilości dodatków parujących jony może niezawodnie niezawodnie przenosić związki farmaceutyczne z dala od tych obszarów supresyjnych. --- Opracowano metodę chromatografii cieczowej z interakcją hydrofilową i tandemową spektrometrią mas (HILIC LC-MS/MS) została opracowana i zwalidowana w celu jednoczesnego ilościowego oznaczania sześciu wodnych związków związanych z choliną i ośmiu głównych klas fosfolipidów w pojedynczym przebiegu. Chromatografię HILIC sprzężono ze spektrometrią mas z elektrorozpylaniem jonów dodatnich. spektrometrią mas z rozpylaniem jonów dodatnich. Połączenie wielu trybów skanowania, w tym skanowania jonów prekursorowych, skanowanie strat neutralnych i monitorowanie wielu reakcji zostało zoptymalizowane dla oznaczania każdego związku lub klasy w pojedynczym przebiegu LC/MS. W ramach tej pracy opracowano uproszczony schemat ekstrakcji, w którym zarówno wolna cholina, jak i pokrewne związki wraz z fosfolipidami ekstrahowano do homogenizowanej fazy przy użyciu chloroformu/metanolu/wody (1:2:0,8) i rozcieńczono w metanolu do analizy związków docelowych w różnych matrycach próbek. Odzysk analitu został oceniano przez wzbogacanie tkanek i próbek żywności dwoma znakowanymi izotopami wzorcami wewnętrznymi izotopami, PC-d(3) i Cho-d(3). Uzyskano odzyski na poziomie od 90% do 115%. uzyskano przez wzbogacenie szeregu matryc próbek autentycznymi wzorcami zawierającymi wszystkie 14 docelowych analitów. Precyzja analizy wahała się od 1,6% do 13%. Dokładność i precyzja były porównywalne do tych uzyskanych przez kwantyfikacji wybranych klas fosfolipidów przy użyciu (31)P NMR. Różnorodność matryce próbek, w tym żółtka jaj, diety ludzkie i tkanki zwierzęce były analizowane przy użyciu zwalidowanej metody. Pomiary całkowitej choliny w wybranej żywności okazały się być w dobrej zgodności z wartościami uzyskanymi z bazy danych choliny USDA. --- Kwas moczowy jest produktem końcowym metabolizmu puryn i głównym przeciwutleniaczem u ludzi. u ludzi. Stężenia kwasu moczowego w osoczu i moczu są związane z różnymi chorobami i są rutynowo mierzone w laboratoriach klinicznych i biomedycznych. z różnymi chorobami i jest rutynowo mierzone w laboratoriach klinicznych i biomedycznych przy użyciu konwersji enzymatycznej i pomiaru kolorymetrycznego. W tym badaniu zastosowano metoda chromatografii interakcji hydrofilowej (HILIC) została opracowana dla jednoczesnego oznaczania kwasu moczowego i kreatyniny, biomarkera moczu rozcieńczenia moczu i funkcji nerek w ludzkim moczu. Próbki moczu zostały wstępnie przygotowane przez rozcieńczenie, wytrącenie białka, odwirowanie i filtrację. Kwas moczowy i kreatynina zostały oddzielone od innych składników w próbkach moczu i oznaczone ilościowo przy użyciu chromatografii HILIC. Liniowa zależność między stosunkiem powierzchni piku piku do piku wzorca wewnętrznego i stężeniem wzorców uzyskano zarówno dla kwasu moczowego, jak i kreatyniny. wzorców uzyskano zarówno dla kwasu moczowego, jak i kreatyniny z kwadratem współczynników korelacji >0,999 dla obu analitów. Granice wykrywalności wynosiły 0,04 μg/ml dla kreatyniny i 0,06 μg/ml dla kwasu moczowego. Opisana metoda HILIC okazała się prosta, dokładna, solidna i niezawodna. --- Chromatografia oddziaływań hydrofilowych (HILIC) została uznana za cenną metodę analizy wysoce hydrofilowych i polarnych związków. Chromatografia interakcji hydrofilowych (HILIC) została uznana za cenne podejście do chromatografii cieczowej z odwróconymi fazami (RPLC). Ponadto, zastosowanie faz ruchomych z wysokim procentem rozpuszczalnika organicznego w HILIC jest korzystne dla wykrywania spektrometrycznego (MS), ze względu na wzmocnionej jonizacji, co skutkuje zwiększoną czułością. W niniejszym przeglądzie, opisano różne zastosowania HILIC dla szeregu zanieczyszczeń środowiskowych i i żywności wraz ze szczegółowymi opisami metodologicznymi oraz zaletami i wadami HILIC. zalety lub wady HILIC w porównaniu z innymi metodami LC są krytycznie omówione. W pierwszej części przeglądu przedstawiono przegląd prac które zostały przeprowadzone za pomocą HILIC do analizy farmaceutyków i pestycydów w próbkach środowiskowych. pestycydów w próbkach środowiskowych. HILIC wykazał swoją przydatność dla polarnych polarnych farmaceutyków, takich jak antybiotyki, estrogeny i ich metabolity, leki nadużywane, cytostatyki, metformina i środki kontrastowe. W grupie pestycydów chromatografia HILIC była pomocna w przypadku polarnych pestycydów fenylomocznikowych i fosforoorganicznych. Druga część przeglądu koncentruje się na analizie pozostałości antybiotyków w żywności i paszy za pomocą HILIC, podczas gdy w grupie pestycydów eksperymenty HILIC zostały dla ditiokarbaminianów i czwartorzędowych związków amoniowych. Ostatni rozdział rozdział zawiera przegląd analizy za pomocą HILIC różnych analitów w próbkach w próbkach wody i żywności/pasz.
Jakim rodzajem chromatografii jest HILIC?
Chromatografia oddziaływań hydrofilowych (HILIC)