TŁO: Ludzki szlak dopełniacza lektynowego (LCP) obejmuje krążące kompleksy kompleksy składające się z lektyny wiążącej mannozę (MBL) lub fikolin w połączeniu z proteazami serynowymi o nazwach MASP-1, -2 i -3 oraz nieenzymatycznym białkiem, sMAP. MASP-3 pochodzi z genu MASP1 poprzez różnicowy splicing i niewiele wiadomo o jego właściwościach biologicznych. niewiele wiadomo o jego właściwościach biologicznych. Z tego powodu poddaliśmy ekspresji MASP-3 i wygenerowaliśmy specyficzne przeciwciała monoklonalne w celu ustalenia charakterystyki biochemicznej i określenia poziomów w surowicy, interakcji z cząsteczkami rozpoznającymi LCP i wpływ na aktywację dopełniacza MASP-3. MASP-3. METODY: Wyeksprymowaliśmy rMASP-3 w komórkach CHO-DG44 i wykorzystaliśmy SDS-PAGE i Western blotting do charakterystyki biochemicznej. Wygenerowaliśmy przeciwciała monoklonalne przeciwko MASP-3 i opracowaliśmy ilościowy test MASP-3 w celu ustalenia poziomów w surowicy w surowicy 100 duńskich dawców krwi. Ponadto oceniliśmy poziomy asocjacji między MASP-3 a Ficolin-2, -3 i MBL przy użyciu technik ELISA i technik immunoprecypitacji. Ponadto oceniliśmy wpływ na odkładanie czynnika dopełniacza C4. WYNIKI: Stwierdziliśmy, że średnie stężenie MASP-3 w surowicy wynosiło 6,4 mg/l (zakres: 2-12,9 mg/l) i że MASP-3 w surowicy występuje głównie w kompleksie z Fikoliną-3. W przeciwieństwie do tego, związek MASP-3 z Ficolin-2 i szczególnie z MBL wydaje się być mniej oczywiste. rMASP-3 znacząco hamował odkładanie C4 za pośrednictwem Fikoliny-3, podczas gdy odwrotnie było w przypadku rMASP-1. WNIOSEK: Nasze wyniki pokazują, że MASP-3 jest obecny w stosunkowo wysokich stężeniach w surowicy. stężeniach. Co więcej, Ficolin-3 jest główną cząsteczką akceptorową MASP-3 wśród cząsteczek aktywatora LCP, ale MASP-3 wydaje się obniżać regulację Ficolin-3 za pośrednictwem szlaku lektynowego. --- Fikolina-3 (antygen Hakata lub H-ficolina) jest rozpuszczalną cząsteczką rozpoznającą wzór w lektynowym szlaku dopełniacza. Spekulowaliśmy, czy powszechne genetyczne w genie FCN3 przyczyniają się do niedoboru Fikoliny-3. Gen FCN3 został zsekwencjonowany u 237 zdrowych Duńczyków rasy kaukaskiej. Znaczenie polimorfizmów oceniano za pomocą przeciwciał przeciwko Ficolin-3 w nowym systemie ELISA i przez produkcję rekombinowanych wariantów Ficolin-3. Profile Ficolin-3 w surowicy były analizowano za pomocą SDS-PAGE i western blotting. Stężenie Ficolin-3 w surowicy różniło się 10-krotnie (mediana, 24 mikrog/ml; zakres, 3-54 mikrog/ml). Spośród kilku polimorfizmów jeden FCN3+1637delC powodujący przesunięcie ramki odczytu i zniekształcenie C-końcowego końca cząsteczki z częstością alleli 0,011 był szczególnie interesujący. szczególnie interesująca. U osobników heterozygotycznych dla delecji FCN3+1637delC zaobserwowano obniżone stężenie Fikoliny-3 (P=0,025). SDS-PAGE i western blotting surowicy ujawniły słabe pasmo odpowiadające skróconej cząsteczce oprócz normalnego wzoru Ficolin-3. Charakterystyka rekombinowanej Fikoliny-3 pochodzącej z FCN3+1637delC wykazała, że w sytuacji homozygotycznej sytuacji ten wariant alleliczny prowadziłby do niedoboru Fikoliny-3. Podsumowując Wykryto wariant delecji FCN3+1637delC zakłócający możliwość rozpoznawania wzorców. rozpoznawania wzorców. Charakterystyka rekombinowanego wariantu Ficolin-3 pokazuje, że homozygotyczność dla delecji FCN3+1637delC może prowadzić do niedoboru Ficolin-3 a tym samym może być podstawą nowego stanu niedoboru dopełniacza. --- Fikolina-1 (M), fikolina-2 (L), fikolina-3 (H) i lektyna wiążąca mannan (MBL) aktywują układ dopełniacza i mają aktywność opsoniczną. Specyficzność fikoliny-3 jest słabo scharakteryzowana i obecnie ograniczona tylko do kilku ligandów. Przedstawiamy nowe specyficzne cele dla ludzkiej fikoliny-3, zidentyfikowane wśród lipopolisacharydów (LPS, endotoksyna) Hafnia alvei. Interakcja była ograniczona do LPS czterech szczepów: 23, Polska Kolekcja Mikroorganizmów (PCM) 1200, PCM 1203 i PCM 1205 i ograniczona do ich polisacharydów specyficznych dla O polisacharydów (O-specyficznych PS) składających się z różnej liczby oligosacharydów (OS) powtarzających się jednostek (RU). Co więcej, te kompleksy LPS/ficolina-3 aktywowały lektynową ścieżkę dopełniacza w teście osadzania C4b w sposób zależny od wapnia i magnezu. Neoglikokoniugat frakcji O-specyficznej PS frakcji H. alvei 1200 LPS z albuminą surowicy bydlęcej (BSA) został przygotowany i wykorzystano jako narzędzie do oznaczania stężenia i aktywności fikoliny-3 w surowicy. w surowicy. Aby potwierdzić strukturę O-specyficznego PS 1200 wybranego do przygotowania koniugatu do przygotowania koniugatu, przeprowadzono analizę strukturalną na serii O-specyficznych PS uwalnianych przez łagodną hydrolizę kwasową LPS. Wyizolowane O-specyficzne PS, wykazujące różne rozkłady długości, były pozbawione większej części rdzenia OS i miały disacharyd Hep-Kdo na końcu redukującym. Neoglikokoniugat był wysoce selektywnym narzędziem do określania stężenia i aktywności stężenia i aktywności fikoliny-3 w surowicy (aktywacja szlaku lektynowego w teście odkładania C4b) i nie miał na niego wpływu MBL, fikolina-1 i fikolina-2 ani naturalne przeciwciała. naturalne przeciwciała. --- CELE: Ocena udziału fikoliny-3, głównego inicjatora szlaku lektynowego szlaku dopełniacza (LCP), w patologii i wynikach krwotoku podpajęczynówkowego (SAH). wynik. METODY: W tym wstępnym badaniu eksploracyjnym stężenie w osoczu fikoliny-3 i funkcjonalnej aktywności LCP, w której pośredniczyła fikolina-3, a także z innymi inicjatorami LCP (lektyna wiążąca mannozę, fikolina-2 i fikolin-1), produktów aktywacji C3 i rozpuszczalnego kompleksu końcowego C5b-9, w prospektywnej kohorcie prospektywnej kohorcie 39 pacjentów z SAH i 20 zdrowych osób z grupy kontrolnej. Rejestrowano następujące parametry następujące parametry: ciężkość SAH, oceniana przy użyciu World Federation Światowej Federacji Towarzystw Neurochirurgicznych; skurcz naczyń, zdefiniowany jako pogorszenie neurologiczne z angiograficznym potwierdzeniem zwężenia naczynia; niedokrwienie mózgu niedokrwienie mózgu, definiowane jako zmiana hipodensyjna w tomografii komputerowej wykonanej przed wypisem; oraz 6-miesięczny wynik, oceniany przy użyciu skali Glasgow Outcome Scale. WYNIKI: U pacjentów nie wykryto zmian dla fikoliny-3 w porównaniu z grupą kontrolną. z grupą kontrolną. Warto jednak zauważyć, że funkcjonalna aktywność LCP, w której pośredniczyła fikolina-3, była zmniejszona. Niskie poziomy fikoliny-3 w osoczu i funkcjonalnej aktywności LCP za pośrednictwem fikoliny-3 były związane z ciężkością SAH, skurczem naczyń i niedokrwieniem mózgu. Co więcej, funkcjonalna aktywność LCP fikoliny-3 była zmniejszona u pacjentów z niekorzystnym rokowaniem. niekorzystnym wynikiem. WNIOSEK: Nasze dane dostarczają dowodów na to, że LCP jest aktywowany po SAH i że rzeczywiste stężenie fikoliny-3 w osoczu odzwierciedla nasilenie uszkodzenia mózgu uszkodzenie mózgu oceniane na podstawie parametrów klinicznych i strukturalnych. Wyniki te potwierdzają pomysł, że funkcjonalna aktywność LCP, w której pośredniczy fikolina-3, może być ukierunkowana na kontrolować postęp urazu w SAH. --- Fikoliny i lektyny wiążące mannozę (MBL) są kolagenopodobnymi białkami obronnymi które służą jako cząsteczki rozpoznające w lektynowym szlaku dopełniacza. Zróżnicowane cechy, które mogą wskazywać na różne funkcje tych białek, są słabo słabo poznane. W tym badaniu porównaliśmy ważne cechy biologiczne fikoliny i MBL. Zbadaliśmy dystrybucję tkankową genów FCN1-3 i MBL2 kodujących fikoliny i MBL za pomocą ilościowego PCR. Wyprodukowano rekombinowane białka białka zostały wyprodukowane, a cechy strukturalne i biologiczne zostały zbadane i porównane. Nasze główne odkrycia były takie, że FCN3 mRNA był wysoce ekspresji w wątrobie i płucach w porównaniu z innymi genami, ujawniając płuco jako tkanka o najwyższym wzorze ekspresji FCN3. Fikolina-3 wykazała wyższą zdolność aktywacji dopełniacza w porównaniu z Ficolin-2, MBL i Ficolin-1 i była wysoce odporna na działanie kolagenazy bakteryjnej, co różni się od innych fikolin i MBL. Odkryliśmy kilka unikalnych właściwości Ficolin-3 wykazując, że FCN3 jest genem o najwyższej ekspresji w wątrobie i płucach wśród lektyn inicjujących szlak dopełniacza. Co więcej, Ficolin-3 ma wysoki potencjał aktywacji dopełniacza i jest jedyną proteolityczną cząsteczką kolagenazy jest jedyną cząsteczką odporną na proteolizę kolagenazy wśród lektynowych inicjatorów szlaku dopełniacza. --- Układ dopełniacza odgrywa patofizjologiczną rolę w toczniu rumieniowatym układowym (SLE). rumieniowatym (SLE). Niniejsze badanie ma na celu zbadanie, czy istnieje związek istnieje między fikolinami, które są częścią lektynowego szlaku dopełniacza i SLE. Do badania włączono próbki osocza EDTA od 68 duńskich pacjentów ze SLE i 29 zdrowych dawców. i 29 zdrowych dawców. Stężenia Ficolin-1, -2 i -3 w osoczu zostały w specyficznych testach ELISA typu sandwich. Aktywność szlaku lektynowego poprzez Ficolin-3 mierzono w teście ELISA na acetylowanej albuminie surowicy bydlęcej (acBSA) i mierzono jako Wiązanie Ficolin-3 i odkładanie C4, C3 i końcowego kompleksu dopełniacza (TCC). Pacjenci ze SLE mieli podwyższony poziom Ficolin-3, 21,6 μg/ml w porównaniu do 17,0 μg/ml w zdrowych grupach kontrolnych (P=0,0098). Stężenie Ficolin-1 w osoczu było ujemnie skorelowane ze wskaźnikiem aktywności choroby SLE (SLEDAI) (Rho=-0,29, P=0,015) i dodatnio skorelowane z [Systemic Lupus International Systemic Lupus International Collaborating Clinics (SLICC)/American College of Rheumatology (ACR) Damage Index] (SDI) (Rho=0,27, P=0,026). Stężenie Fikoliny-1 było również związane z występowaniem zakrzepicy tętniczej (P=0,0053), ale nie żylnej (P=0.42). Wreszcie, odkładanie się C4, C3 i TCC w szlaku Ficolin-3 było wszystkie były odpowiednio skorelowane z SLEDAI (P<0,0076). Związek Ficolin-1 z SLEDAI i SDI, a także zakrzepicą tętniczą wykazaną w tym badaniu sugeruje, że Ficolin-1 może być potencjalnym nowym biomarkerem dla pacjentów z tru. Ponadto, aktywacja dopełniacza, w której pośredniczy Ficolin-3, może być cenna w monitorowaniu w monitorowaniu aktywności choroby u pacjentów z tru ze względu na wysoką czułość na zużycie dopełniacza w teście niezależnym od stężenia Fikoliny-3. --- Fikolina-3 (zwana również H-ficoliną lub antygenem Hakata) jest aktywującą dopełniacz cząsteczką rozpoznającą wzór cząsteczka rozpoznająca wzór, posiadająca domenę podobną do fibrynogenu zaangażowaną w wiązanie węglowodanów. Spośród ludzkich fikolin, Fikolina-3 ma najwyższe stężenie w surowicy i jest najsilniejsza. stężenie w surowicy i jest najsilniejszym aktywatorem szlaku lektynowego in vitro. Dowody na jej fizjologiczną funkcję są skąpe, chociaż jej niedobór sugeruje się, że jej niedobór zwiększa podatność na infekcje. Specyficzność Ficolin-3 jest słabo scharakteryzowana i obecnie znanych jest kilka ligandów. Tutaj aglutynacji Hafnia alvei, Gram-ujemnej komensalnej bakterii jelitowej i patogenu oportunistycznego. bakterii jelitowej i patogenu oportunistycznego, w obecności rekombinowanej Fikoliny-3 i wapnia. wapnia. Fikolina-3 zwiększała również fagocytozę H. alvei przez makrofagi i wykazywała aktywność bakteriobójczą. wykazywała aktywność bakteriobójczą. Dodatkowo, Ficolin-3 hamował odpowiedź komórek gospodarza na aktywację NF-κB zależną od TLR4/MD-2/CD14-LPS. Jest to pierwsza demonstracja ochronnego działania Ficolin-3 przeciwko ludzkiemu patogenowi bakteryjnemu. patogenem bakteryjnym. Chociaż ludzka Ficolin-3 nie rozpoznaje i nie wiąże się z powszechnymi bakteriami patogennymi bakteriami, może być ważnym składnikiem odporności wrodzonej zapewniając ochronę, na przykład, przed florą komensalną, która może powodować pozajelitowe infekcje oportunistyczne. --- Fikolina-3, kodowana przez gen FCN3 i ulegająca ekspresji w płucach i wątrobie, jest cząsteczką jest cząsteczką rozpoznającą w szlaku lektynowym układu dopełniacza. Heterozygotyczność dla mutacji przesunięcia ramki FCN3 (rs28357092), prowadzącej do zniekształcenia C-końcowego końca cząsteczki, występuje u osób bez choroby (częstotliwość alleli wśród białych, 0,01). Opisujemy pacjenta z nawracającymi infekcjami, który był homozygotyczny dla tej mutacji, który miał niewykrywalne poziom fikoliny-3 w surowicy i który miał niedobór aktywacji dopełniacza zależnej od fikoliny-3. aktywacji dopełniacza. --- Fikoliny-1, -2 i -3 są cząsteczkami rozpoznającymi w lektynowym szlaku dopełniacza i tworzą kompleksy z proteazami serynowymi o nazwie MASP-1, -2 i -3 oraz dwoma białkami nieenzymatycznymi. białkami nieenzymatycznymi. MASP-2 jest głównym inicjatorem aktywacji szlaku lektynowego. aktywacji szlaku lektynowego, podczas gdy fikolina-3 jest najliczniejszą cząsteczką fikoliny w krążeniu. krążeniu. Znaczenie kompleksów szlaku lektynowego w krążeniu jest nieznane. W związku z tym opracowaliśmy test do pomiaru krążącego kompleksu MASP-2/ficolin-3. Ilościowy test ELISA typu sandwich został opracowany dla pomiaru kompleksów MASP-2/ficolin-3 w surowicy w oparciu o przeciwciała monoklonalne przeciwciała monoklonalne przeciwko MASP-2 do powlekania i anty-ficolin-3 do wykrywania. Dodatkowo Ponadto oceniliśmy stężenie fikoliny-3 i MASP-2 w surowicy oraz zakres oraz stopień odkładania C4 za pośrednictwem fikoliny-3 na acetylowanym BSA w próbkach od 97 zdrowych dawców. zdrowych dawców. Stwierdzono, że mediana stężenia kompleksów MASP-2/ficolin-3 119,7 AU/ml (zakres: 2,9-615,5 AU/ml). Stwierdzono istotne korelacje między poziomem kompleksów MASP-2/ficolin-3 a stężeniem fikoliny-3 (Spearman r=0,2532, p=0,0124) i MASP-2 (Spearman r=0,4505, p<0,0001), a także stopień odkładania C4 (Spearman r=0,671, p<0,0001). Gdy niedobór fikoliny-3 (homozygotyczny dla polimorfizmu rs28357092) i MASP-2 (homozygotyczne dla polimorfizmu rs72550870) surowice były inkubowane razem, indukowano tworzenie kompleksu między MASP-2 i fikoliną-3. Tworzenie kompleksu zanikało w obecności EDTA. Test umożliwiający ilościowy pomiar wyłącznie kompleksów MASP-2/ficolin-3 w surowicy jest w surowicy. Metoda ta może przyczynić się do dalszego wglądu w patofizjologię zaburzeń związanych z niedoborem lub nieprawidłową aktywnością MASP-2 i fikoliny-3.
Który szlak jest aktywowany przez fikolinę-3?
Fikolina-3 aktywuje lektynowy szlak dopełniacza.