Gen azgA Aspergillus nidulans koduje transporter hipoksantyny-adeniny-guaniny transporter. Został on sklonowany za pomocą nowej metodologii transpozonowej. Fenotyp null azgA został zdefiniowany przez szereg mutacji, w tym dużą delecję. delecji. W grzybni gen azgA jest, podobnie jak inne geny katabolizmu puryn, indukowany przez kwas moczowy i represjonowany przez amon. Jego transkrypcja zależy od specyficznego dla szlaku białka dwujądrowego klastra cynku UaY i szerokiej domeny AreA GATA. AzgA nie jest blisko spokrewniony z żadnym innym scharakteryzowanym białkiem błonowym. białkiem błonowym, ale wiele bliskich homologów o nieznanej funkcji występuje u grzybów, roślinach i prokariotach, ale nie u metazoa. Dwie z trzech baz danych i filogeneza filogeneza przedstawiona w tym artykule umieszcza białka z tej rodziny w klastrze wyraźnie oddzielonym (ale być może filogenetycznie spokrewnionym) od rodziny NAT która obejmuje inne eukariotyczne i prokariotyczne transportery nukleobaz. Tak więc AzgA jest pierwszym scharakteryzowanym członkiem tej rodziny lub podrodziny białek błonowych. białek błonowych. --- U grzybów pobieranie puryn, które można odzyskać, jest przeprowadzane przez członków dwóch ewolucyjnie odrębnych rodzin białek, transporterów związanych z purynami (PRT/NCS1) i transporterów podobnych do AzgA. Przeprowadziliśmy porównawczą analizę kinetyczną analizę dwóch prototypów tych rodzin transporterów. Pierwszym z nich był Fcy21p, scharakteryzowane tutaj białko Candida albicans, a drugim był AzgA, transporter transporter Aspergillus nidulans. Nasze wyniki wykazały, że: (i) AzgA i Fcy21p są równie wydajnymi transporterami puryn o wysokim powinowactwie i dużej pojemności, (ii) Fcy21p, ale nie AzgA, jest wydajnym transporterem cytozyny i 5-fluorocytozyny. transporterem, oddziałującym z =O2 i C4-NH2 pierścienia pirymidynowego, (iii) główne interakcje (iii) główne interakcje AzgA i Fcy21p z pierścieniem purynowym są podobne, ale nie identyczne, obejmując we wszystkich przypadkach pozycje 6 i 7, a dla niektórych substratów, pozycje 1 i 9, oraz (iv) w AzgA, nieporęczne grupy w pozycji N3 mają szkodliwy efekt steryczny szkodliwy efekt steryczny na wiązanie substratu, podczas gdy podobne podstawienia w pozycji C2 lub N9 są w pełni lub częściowo tolerowane. W przeciwieństwie do tego, w Fcy21p, podstawienia C2 i N9 znoszą wiązanie substratu, podczas gdy podobne podstawienia w N3 są w pełni tolerowane. Wyniki te sugerują, że wszystkie grzybowe transportery puryn mogły wyewoluować z pojedynczego białka przodków i pokazują, że grzybowe transportery wykorzystują różne interakcje substratowe w porównaniu do analogicznych białka pierwotniaków lub ssaków. Wreszcie, wyniki są również omawiane w odniesieniu do możliwości wykorzystania grzybowych transporterów puryn jako swoistych bram dla rozwoju ukierunkowanych przeciwgrzybiczych terapii farmakologicznych. --- Symporter puryn/H(+) AzgA Aspergillus nidulans jest członkiem założycielem funkcjonalnie i filogenetycznie odrębnej rodziny transporterów obecnych w grzybach, bakteriach i roślinach. Tutaj zbudowano prawidłowy model topologiczny AzgA w oparciu o strukturę krystaliczną na strukturze krystalicznej transportera uracylu Escherichia coli UraA, członka rodziny nukleobaz. członka rodziny transporterów nukleobaza-askorbinian (NAT/NCS2). Model składa się z 14 transbłonowych, głównie α-helikalnych segmentów (TMS) i cytoplazmatycznych ogonów N- i C-ogonków. Wyraźny zwarty rdzeń 8 TMS, wykonany z dwóch splecionych ze sobą odwróconych powtórzeń (TMS 1-4 i 8-11), topologicznie różni się od elastycznej domeny (TMS domeny (TMS 5-7 i 12-14). Widoczna jest domniemana wnęka wiążąca substrat między rdzeniem a domenami bramy. Dokowanie substratu, dynamika molekularna i analiza mutacji analiza mutacyjna zidentyfikowała kilka reszt krytycznych dla wiązania puryn i/lub transportu puryn w TMS3, TMS8 i TMS10. Wśród nich, Asn131 (TMS3), Asp339 (TMS8) i Glu394 (TMS10) mają bezpośrednio oddziaływać z substratami, podczas gdy Asp342 (TMS8) może być zaangażowany w późniejszą translokację substratu, poprzez wiązanie H(+) i symport. Tak więc AzgA i inne transportery NAT wykorzystują topologicznie podobne TMS i reszty aminokwasowe do wiązania substratu i transportu, co z kolei sugeruje, że białka podobne do AzgA stanowią odległą podgrupę podgrupę wszechobecnej rodziny NAT.
Lista przedstawicieli głównych grzybowych rodzin transporterów hipoksantyny-adeniny-guaniny.
AzgA i Fcy21p są prototypami dwóch głównych grzybowych rodzin transporterów hipoksantyny-adeniny-guaniny.