Opisujemy tutaj prostą procedurę znacznie zmniejszającą zanieczyszczenie ekstraktów jądrowych ekstraktów jądrowych przez naturalnie biotynylowane cytoplazmatyczne karboksylazy, które stanowią główne źródło niespecyficznego tła podczas stosowania znakowania biotynylacją za pośrednictwem BirA znakowanie biotynylacją w celu oczyszczenia i scharakteryzowania jądrowego kompleksów białkowych za pomocą spektrometrii mas. Pokazujemy, że użycie 0,5% niejonowego detergentu niejonowego detergentu Nonidet-40 (NP-40) podczas lizy komórek i izolacji jąder jest wystarczające, aby praktycznie wyeliminować zanieczyszczenie ekstraktów jądrowych przez karboksylazy i znacznie zmniejszyć sygnały tła w dalszych analizach spektrometrii masowej analizach spektrometrycznych.
Jaki jest związek między Nonidet-40 (NP-40) a biotynylacją?
0,5% niejonowego detergentu Nonidet-40 (NP-40) podczas lizy komórek i izolacji jąder jest wystarczające, aby praktycznie wyeliminować zanieczyszczenie endogennymi karboksylazami znakowanymi biotyną podczas oczyszczania białek jądrowych znakowanych biotyną.