Opracowaliśmy technikę wielokolorowego znakowania neuronów u Drosophila melanogaster która łączy w sobie moc specyficznego ukierunkowania na różne populacje neuronowe z różnorodnością etykiet zapewnianą przez stochastyczny wybór kolorów. Ta adaptacja kręgowców Brainbow wykorzystuje rekombinację do wyboru jednego z trzech białek znakowanych epitopem białek wykrywalnych metodą immunofluorescencji. Dwie kopie tego konstruktu dają sześć jasnych, rozłącznych kolorów. Użyliśmy Drosophila Brainbow do zbadania wzory unerwienia wielu linii neuronów projekcyjnych płata przedsionkowego w tego samego preparatu i obserwowania względnych trajektorii poszczególnych neuronów neuronów aminergicznych. Wiązki nerwów, a nawet pojedyncze neuryty o długości setek mikrometrów mikrometrów, można śledzić za pomocą ostatecznego znakowania kolorem. Prześledziliśmy neurony ruchowe w zwoju podprzełykowym i skorelowaliśmy je z połączeniami nerwowo-mięśniowymi węzłami nerwowo-mięśniowymi, aby zidentyfikować ich specyficzne cele mięśniowe. Zdolność do niezależnej wizualizacji wielu linii lub projekcji neuronów w tym samym preparacie w tym samym preparacie znacznie przyspiesza osiągnięcie celu, jakim jest mapowanie połączeń neuronów w obwodach. obwody. --- Aby ułatwić badania nad architekturą i tworzeniem sieci neuronowych, wygenerowaliśmy trzy warianty Drosophila melanogaster mysiego systemu Brainbow-2, zwane Flybow. Sekwencje kodujące różne białka fluorescencyjne związane z błoną były ułożone parami w kasetach otoczonych miejscami rekombinacji. Flybow łączy system binarny aktywujący sekwencję Gal4-upstream w celu regulacji ekspresji transgenu i indukowalnej ekspresję transgenu i indukowalny zmodyfikowany system Flp-FRT do napędzania inwersji i wycięcia kaset. Zapewnia to przestrzenną i czasową kontrolę nad stochastyczną ekspresją jednego z dwóch lub czterech reporterów w jednej próbce. w jednej próbce. Wykorzystując układ wzrokowy, embrionalny układ nerwowy i dysk pokazujemy, że Flybow w połączeniu ze specyficznymi sterownikami Gal4 może być do wizualizacji morfologii komórek z wysoką rozdzielczością. Na koniec że to podejście do etykietowania jest kompatybilne z dostępnymi technikami opartymi na technikami opartymi na Flp-FRT, takimi jak analiza mozaiki z represyjnym markerem komórkowym. marker; może to dodatkowo wspierać analizę genetyczną obwodu neuronalnego i funkcji.
Lista dostępnych genetycznych technik wielokolorowego znakowania komórek u Drosophila
Flybow i Drosophila Brainbow.