Elektrochemiczne wykrywanie linii komórkowych MCF-7 (ludzki rak piersi) zostało przy użyciu kulek magnetycznych do separacji i aptamerów DNA o wysokim powinowactwie do rozpoznawania sygnału. aptamerów DNA do rozpoznawania sygnału. Wysoką specyficzność uzyskano dzięki zastosowaniu kulek magnetycznych i aptamerów, a dobrą czułość uzyskano dzięki wzmocnienie sygnału nanokryształów CdS lub PbS otoczonych DNA. Woltamperometria anodowa (anodowa woltamperometria stripingowa) została zastosowana do wykrywania kationu kadmu i jonów ołowiu. i jonów ołowiu, do elektrochemicznego oznaczania ilości docelowych komórek i biomarkerów na membranie. komórek i biomarkerów na błonie komórek docelowych. Ta metoda elektrochemiczna może reagować na tak niskie jak 100 komórek mL(-1) komórek rakowych komórek nowotworowych z liniowym zakresem kalibracji od 1,0×10(2) do 1,0×10(6) komórek mL(-1), wykazując bardzo wysoką czułość. Co więcej, ilości HER-3, które były nadekspresji na komórkach MCF-7 zostały obliczone jako odpowiadające 3,56×10(4) cząsteczek przeciwciała anty-HER-3. Ponadto, test był w stanie rozróżnić między różnymi typami komórek docelowych i kontrolnych w oparciu o aptamery i kulek magnetycznych stosowanych w teście, wskazując na szerokie zastosowanie testu do wczesnego i dokładnego diagnozowania nowotworów. --- Opisano elektrochemiczny magneto-biosensor do szybkiego oznaczania biotyny w próbkach żywności. w próbkach żywności. Reakcja powinowactwa została przeprowadzona na zmodyfikowanych streptawidyną mikrokulkach magnetycznych jako stałym nośniku w bezpośrednim konkurencyjnym formacie. Biotynylowany enzym peroksydazy chrzanowej (biotyna-HRP) konkuruje z wolną biotyną w próbce o miejsca wiązania streptawidyny na mikrokulkach magnetycznych. mikrokulkach magnetycznych. Zmodyfikowane kulki magnetyczne zostały następnie łatwo wychwycone przez magneto-grafitowo-epoksydową elektrodę kompozytową, a sygnał elektrochemiczny był oparty na aktywności enzymatycznej enzymu HRP po dodaniu H(2)O(2) jako substratu i o-fenilendiaminy jako kosubstratu. Odpowiedź była wykrywana elektrochemicznie za pomocą woltamperometrii fali prostokątnej. Granica wykrywalności wynosiła 8,4×10(-8) mol L(--1) biotyny (20 μg L(--1)) z zakresem dynamicznym od 0,94 do 2,4×10(-7) mol L(--1). Komercyjne suplementy diety wzbogacone biotyną i próbki preparatów dla niemowląt zostały ocenione, uzyskując dobre wyniki w wyniki. Całkowity czas analizy wyniósł 40 minut na 20 testów. --- Izolacja komórek za pomocą kulek magnetycznych ukierunkowanych na przeciwciała jest potężnym narzędziem do badawczych i klinicznych, ostatnio do izolacji krążących komórek nowotworowych (CTC). komórek nowotworowych (CTC). Niemniej jednak podstawowe cechy interfejsu komórka-kulka są wciąż nieznane. Tutaj stosujemy klinicznie istotne przeciwciało przeciwko HER2 (ErbB2) do izolacji komórek magnetycznych. Badamy, ile białek docelowych na komórkę jest wystarczająca do wyizolowania komórki. Aby zrozumieć znaczenie powinowactwa pierwotnego przeciwciała, porównaliśmy serię mutantów punktowych o znanym powinowactwie i mutantów o znanym powinowactwie i pokazaliśmy, że nawet zaczynając od subnanomolarnego powinowactwa powinowactwo, poprawa powinowactwa przeciwciała poprawiła izolację komórek. Aby przetestować znaczenie połączenia między pierwotnym przeciwciałem a kulką magnetyczną, porównaliśmy połączenie przeciwciała z kulkami za pomocą białka L, przeciwciała drugorzędowego przeciwciałem lub streptawidyną: wysoce stabilne wiązanie streptawidyna-biotyna poprawiło czułość o rząd wielkości. Polimeryzacja cytoszkieletu nie nie miała większego wpływu na izolację komórek, ale izolacja była hamowana przez cholesterolu i wzmocniona przez obciążenie komórek cholesterolem. Analizując panel panel ludzkich linii komórek nowotworowych obejmujących szeroki zakres ekspresji wykazał, że standardowe podejście mogło wyizolować tylko komórki o najwyższej ekspresji. Jednakże, jednak nasza optymalizacja poziomu cholesterolu, powinowactwa pierwotnego przeciwciała i pozwoliła na skuteczną i specyficzną izolację komórek o niskim poziomie ekspresji HER2. wyrażających niski poziom HER2 lub cząsteczki adhezji komórek nabłonkowych. Te spostrzeżenia powinny kierować przyszłymi podejściami do izolacji komórek, zarówno magnetycznie lub przy użyciu innych środków, a także rozszerzyć zakres antygenów komórkowych i biomarkerów które mogą być ukierunkowane na izolację CTC w badaniach i diagnostyce raka. --- Tutaj przedstawiamy czuły i specyficzny test na trombinę poprzez powinowactwo wychwytywanie trombiny za pomocą aptamerów peptydowych generowanych przez mRNA na kulkach magnetycznych i późniejszą reakcję enzymatyczną z udziałem trombiny. Trombina w stężeniu 50 fM może być wykryta. --- W niniejszym artykule przedstawiamy nowatorską metodę pull-down, która radykalnie zmniejsza koszt i czas przygotowania białka przynęty poprzez bezkomórkową translację z łącznikiem łącznikiem puromycyny. Z C-końcem białka przynęty połączonym z biotyną przez cząsteczkę puromycyny po reakcji translacji i późniejszej degradacji mRNA przez RNazę. degradacji przez RNazę, białko ofiary było łatwo ściągane przez perełki magnetyczne pokryte streptawidyną w probówce. Trzy fluorescencyjne typy białek zostały przetestowane i potwierdzone przez elektroforezę żelową, aby zostały ściągnięte łatwo i szybko, w zależności od ich powinowactwa. --- Ze względu na ich wybitne funkcje biologiczne, repertuar wyrażonych białek wiążących Białka wiążące RNA (RBP) i ich stany aktywności są wysoce pouczające o systemach komórkowych. Opracowaliśmy nowatorską i bezstronną technikę, zwaną interactome capture, do identyfikacji aktywnych RBP hodowanych komórek. Poprzez wykorzystując in vivo sieciowanie UV RBP do poliadenylowanych RNA, kowalencyjnie związane białka są wychwytywane za pomocą kulek magnetycznych oligo(dT). Po rygorystycznych płukaniach, interaktom mRNA jest określany przez ilościową spektrometrię mas (MS). spektrometrii mas (MS). Protokół trwa 3 dni robocze w przypadku analizy pojedynczych białek metodą western blotting i około 2 tygodni na określenie kompletnych interaktomów komórkowych mRNA za pomocą MS. Najważniejszą zaletą interaktomu nad innymi podejściami in vitro i in silico jest to, że tylko RBP związane z RNA w środowisku fizjologicznym. Po zastosowaniu do komórek HeLa, przechwytywanie interaktomu ujawniło setki nowych RBP. Przechwytywanie może być również szeroko stosowany do porównywania różnych stanów biologicznych, w tym stresu metabolicznego, cyklu komórkowego, różnicowania, rozwoju lub odpowiedzi na leki. odpowiedź na leki. --- Ludzka elastaza neutrofilowa (HNE) jest wielofunkcyjną proteazą serynową, zaangażowaną w w obronę przed infekcjami, regulację procesów zapalnych i procesy fizjopatologiczne wielu chorób. procesach fizjopatologicznych wielu chorób. Opracowaliśmy testy oparte na wychwytywaniu aptamerów dla ludzkiej elastazy neutrofilowej z różnymi substratami i stałymi nośnikami, aby spełnić różne wymagania, takie jak prostota, czułość i wysoka wydajność. Aptamery przeciwko HNE zostały unieruchomione na kulkach magnetycznych lub mikropłytkach jako ligandy powinowactwa do wychwytywania HNE, a następnie wzbogacony HNE katalizował konwersję substratów chromogennych lub fluorogennych do produktów. Pomiar Pomiar wygenerowanych produktów enzymatycznych umożliwił ostateczne wykrycie HNE. W teście z użyciem substratów chromogennych i kulek magnetycznych zmodyfikowanych aptamerem można było z powodzeniem wykryć 0,4 pM HNE. Czułość testu została dodatkowo poprawiona dzięki zastosowaniu substratów fluorogenicznych, a granicę wykrywalności HNE na poziomie 20 fM. Zastosowanie mikropłytek pokrytych aptamerami zamiast kulek magnetycznych zmodyfikowanych kulek magnetycznych w testach pozwoliło również na czułe wykrywanie HNE, oferując zalety w szybkiej obsłudze próbek i pomiarach. Ustalone testy dla HNE wykazywały dobrą specyficzność, a białka w tym albumina surowicy, transferyna, immunoglobulina G, trombina, świńska elastaza trzustkowa, tryptofan elastazę trzustkową, trypsynę, proteinazę K, chymotrypsynę, lizozym, katepsynę G. i proteinazę 3, i proteinaza 3 nie powodowały zakłóceń w wykrywaniu HNE. --- Obecność bakterii chorobotwórczych jest głównym czynnikiem ryzyka dla zdrowia w próbkach żywności. a komercyjny łańcuch dostaw żywności jest podatny na skażenie bakteryjne. skażenie bakteryjne. W związku z tym istnieje zapotrzebowanie na szybkie i czułe metody identyfikacji dla przemysłu spożywczego. Ilościowa reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR) jest jedną z niezawodnych, specyficznych metod o stosunkowo krótkim czasie badania. Jednakże, wiele składników w próbkach żywności zakłóca PCR, co skutkuje fałszywymi wynikami, a tym samym co utrudnia użyteczność metody. Dlatego też naszym celem było opracowanie systemu separacji magnetycznej opartego na aptamerach jako metody przygotowania próbek do późniejszej identyfikacji i kwantyfikacji bakterii zanieczyszczających metodą PCR w czasie rzeczywistym. Aby osiągnąć ten cel, przygotowano kulki magnetyczne poprzez polimeryzację zawiesiny polimeryzacji i szczepione szczotkami z glicydylometakrylanu (GMA), które były zmodyfikowane w duże ilości grup aminowych. Kulki magnetyczne zostały udekorowane dwoma różnymi sekwencjami aptamerów wiążącymi się specyficznie z Escherichia coli lub Salmonella typhimurium. Wyniki wykazały, że nawet 1,0% mleka hamowało PCR, ale nasz system magnetycznego powinowactwa wychwytywał bakterie ze 100% próbek mleka pozwoliło na dokładne określenie zanieczyszczenia bakteryjnego w czasie krótszym niż 2,0 h z granicą wykrywalności około 100 CFU/ml dla obu bakterii w próbkach mleka z domieszką próbek. --- Sygnalizacja kinazy białkowej reguluje los ludzkich hematopoetycznych komórek macierzystych/progenitorowych (HSPC), ale niewiele wiadomo na temat krytycznych substratów szlaku. Aby temu zaradzić w tym celu opracowaliśmy i zastosowaliśmy wielkoskalowe, empirycznie zoptymalizowane strategię wzbogacania powinowactwa fosfopeptydów z wysokoprzepustowym 2D LC-MS/MS do oceny fosfoproteomu izolowanej populacji ludzkich CD34(+) HSPC populacji. Najpierw zastosowaliśmy chromatografię oddziaływań hydrofilowych jako pierwszy aby rozdzielić i uprościć mieszaniny białek do oddzielnych frakcji. dyskretne frakcje. Fosfopeptydy zostały następnie wzbogacone off-line przy użyciu kulek magnetycznych TiO2 -a następnie wykrywane w trybie online za pomocą nanoflow HPLC C18 RP przy użyciu zależnej od danych MS/MS wysokoenergetycznej dysocjacji aktywowanej kolizją na wysokowydajnym hybrydowym tandemowym spektrometrze mas Orbitrap. Zidentyfikowaliśmy zidentyfikowaliśmy 15 533 unikalnych fosfopeptydów w 3574 domniemanych fosfoproteinach. Systematyczna analiza obliczeniowa ujawniła ścieżki biologiczne i motywy fosfopeptydowe wzbogacone w CD34(+) HSPC, które znacznie różnią się od obserwowanych w analogicznej równoległej analizie izolowanych ludzkich limfocytów T, wskazując na możliwe zaangażowanie specyficznych relacji kinaza-substrat w aktywowanych kaskadach napędzających odnowę hematopoetyczną, zaangażowanie i różnicowanie. --- Opracowanie technik immobilizacji enzymów, które nie wpłyną na aktywność katalityczną aktywności katalitycznej i konformacji jest ważnym zadaniem badawczym. Znaczniki powinowactwa które są obecne lub dodane w określonej pozycji z dala od miejsca aktywnego w strukturze natywnego enzymu. struktury natywnego enzymu mogą być wykorzystane do utworzenia silnych wiązań powinowactwa między strukturą białka a powierzchnią sfunkcjonalizowaną komplementarnym ligandem powinowactwa. komplementarnym ligandem powinowactwa. Te techniki immobilizacji opierają się na oddziaływania powinowactwa między biotyną i cząsteczkami (strept)awidyny, lektynami i cukrami lub chelatami metali. cukrami lub chelatem metalu i znacznikiem histydynowym. Najnowsze osiągnięcia obejmują immobilizację znakowanych enzymów na nanocząstkach magnetycznych. Te nośniki mogą poprawić wydajność unieruchomionych biomolekuł w testach analitycznych, ponieważ koraliki magnetyczne zapewniają względnie dużą liczbę miejsc wiązania dla reakcji biochemicznych. reakcji biochemicznych, co skutkuje szybszą kinetyką testu. W niniejszym rozdziale opisano procedury immobilizacji znakowanych enzymów na różnych kulkach magnetycznych. --- Opracowano nowy amperometryczny magnetoimmunoczujnik wykorzystujący pośredni konkurencyjny format opracowany do czułego wykrywania amino-końcowego peptydu natriuretycznego typu pro-B peptydu natriuretycznego typu B (NT-proBNP). Konstrukcja immunoczujnika obejmuje kowalencyjną unieruchomienie antygenu na koralikach magnetycznych modyfikowanych karboksylem (HOOC-MBs) aktywowanych N-(3-dimetyloaminopropylo)-N'-etylokarbodiimidem (EDC) i N-hydroksysulfobursztynoimidem (sulfo-NHS) i dalszą inkubacją w mieszaninie roztworze zawierającym zmienne stężenia antygenu i stałe stężenie stężenie przeciwciała wykrywającego znakowanego HRP. Odpowiednio, docelowy NT-proBNP w próbce i ten unieruchomiony na MB konkurują o wiązanie ze stałą ilością specyficznego przeciwciała drugorzędowego znakowanego HRP. Immunokoniugat MB zawierające immunokoniugat są wychwytywane przez magnes umieszczony pod powierzchnią jednorazowej złotej elektrody sitodrukowej (Au/SPE). Odpowiedzi amperometryczne mierzone przy -0,10 V (względem pseudoreferencyjnej elektrody Ag), po dodaniu 3,3',5,5'-tetrametylobenzydyny (TMB) jako mediatora transferu elektronów i H2O2 jako substratu enzymu. jako substratu enzymu, są wykorzystywane do monitorowania reakcji powinowactwa. Opracowany magnetoimmunosensor zapewnia atrakcyjne właściwości analityczne w 10-krotnie rozcieńczonych próbkach ludzkiej surowicy, wykazując liniowy zakres użyteczności klinicznej (0,12-42,9 ng mL(-1)) i granicę wykrywalności 0,02 ng mL(-1), która może być stosowana w diagnostyce klinicznej przewlekłej niewydolności serca u osób starszych oraz do klasyfikacji pacjentów zagrożonych śmiercią po przeszczepie serca. Magnetoimmunosensor magnetoimmunosensor został z powodzeniem zastosowany do analizy próbek ludzkiej surowicy. próbek ludzkiej surowicy. --- Interakcje między DNA a czynnikami transkrypcyjnymi (TF) kierują funkcjami komórkowymi i rozwojem. i rozwojem, jednak złożoność regulacji genów jest wciąż daleka od zrozumienia. zrozumienia. Takie zrozumienie jest ograniczone przez niedostatek technik, za pomocą których można za pomocą których można badać interakcje DNA-białko. Opracowaliśmy magnetyczną immobilizację białka Immobilizacja na DNA wzmacniacza (MagPIE), prosty, szybki, wieloparametryczny test wykorzystujący immunofluorescencję cytometryczną w celu ujawnienia interakcji między TF, strukturą chromatyny i DNA. W MagPIE, zsyntetyzowane DNA jest wiązane do kulek magnetycznych. kulki, które są następnie inkubowane z lizatem jądrowym, umożliwiając specyficzne dla sekwencji wiązanie przez TF, histony i metylację przez natywny lizat czynniki, które mogą być opcjonalnie hamowane za pomocą małych cząsteczek. Lizat wiązanie białko-DNA jest monitorowane przez immunofluorescencję cytometryczną, która pozwala na dokładny pomiar porównawczy powinowactwa TF-DNA. Kombinatoryczne barwienie fluorescencyjne umożliwia jednoczesną analizę interakcji TF-DNA i modyfikacji chromatyny. i modyfikacji chromatyny. MagPIE zapewnia prostą i niezawodną metodę analizy złożonych interakcji epigenetycznych in vitro. --- Zastosowanie immobilizowanych kapilarnych reaktorów enzymatycznych (ICER) i enzymów pokrytych kulkami magnetycznymi ((NT lub CT) magnetycznych ((NT lub CT)-MB) do badań przesiewowych ligandów zostało przyjęte jako nowa technika badań przesiewowych o wysokiej przepustowości (HTS). W tej pracy wybranym celem był enzym acetylocholinoesteraza (AChE), który działa na ośrodkowy układ nerwowy i jest potwierdzonym celem dla układ nerwowy i jest zatwierdzonym celem w leczeniu choroby Alzheimera, a także nowych insektycydów. jak również dla nowych insektycydów. Nowe podejście do badań przesiewowych ekstraktów roślinnych zostało opracowane w oparciu o eksperymenty połowu ligandów i chromatografię strefową. W tym celu wykorzystano koraliki magnetyczne do eksperymentów połowu ligandów oraz bioreaktory kapilarne do chromatografii strefowej. bioreaktory kapilarne do testów aktywności. Ten ostatni został również zastosowany w warunkach nieliniowych w celu określenia stałych powinowactwa znanych ligandów. ligandów, jak również dla aktywnego liganda. --- Opracowaliśmy metodę, która wzbogaca metylowane cytozyny poprzez wychwytywanie frakcji frakcję DNA poddanego działaniu bisulfitu z nieprzekształconymi cytozynami. Metoda ta, zwana wzbogacaniem metylacji ligandem streptawidyny bisulfitu (SuBLiME), obejmuje polega na specyficznym znakowaniu (przy użyciu ligandu nukleotydowego znakowanego biotyną) metylowanych cytozyn w DNA przekształconym przez bisulfit. Po tym etapie następuje wychwyt powinowactwa przy użyciu kulek magnetycznych sprzężonych ze streptawidyną. SuBLiME jest wysoce adaptowalny i może być połączony z generowaniem biblioteki do głębokiego sekwencjonowania i/lub redukcją złożoności genomu. redukcją złożoności genomu. W tym pilotażowym badaniu wzbogaciliśmy metylowane DNA z genomów linii komórkowych raka jelita grubego (HCT-116, HT-29 i SW-480) i normalnych leukocytów krwi w celu odkrycia biomarkerów raka jelita grubego. Wzbogacone biblioteki zostały zsekwencjonowane przy użyciu technologii SOLiD-3 . W porównaniach parami oceniliśmy łącznie 1769 loci genów i 33 loci miRNA jako różnie metylowane pomiędzy liniami komórkowymi i leukocytami. Spośród nich, 516 loci było różnie metylowanych w co najmniej dwóch promotorach proksymalnych CpG przez dwa dyskretne fragmenty Csp6I. Zidentyfikowane metylowane loci genów były związane z rozwojem anatomicznym, różnicowaniem i sygnalizacją komórkową. Dane korelowały z wieloma opublikowanymi biomarkerami metylacji DNA raka jelita grubego. jelita grubego, biomarkerami metylacji DNA i zestawami danych genomowych. SuBLiME jest skuteczny w wzbogacaniu metylowanego kwasu nukleinowego oraz w wykrywaniu znanych i nowych biomarkerów. i nowych biomarkerów. --- Wiele białek zaangażowanych w systemy naprawy DNA oddziałuje z DNA, które ma strukturę zmienioną w stosunku do typowej helisy B. Używając kulek magnetycznych do DNA zawierającego różne typy struktur, oceniliśmy aktywność wiązania in in vitro aktywność wiązania dwóch dobrze scharakteryzowanych białek naprawy DNA, Escherichia coli MutS i ludzkiego p53. E. coli MutS wiązało się do dwuniciowego DNA, z wyższym powinowactwem do niedopasowania G/T w porównaniu do niedopasowania G/A i najwyższym powinowactwo do większych struktur innych niż B-DNA. E. coli MutS najlepiej wiązał się z DNA między pH 6 i 9. Eksperymenty rozróżniały tryby wiązania p53-DNA, a zwiększanie siły jonowej zmniejszało wiązanie p53 do niespecyficznego dwuniciowego DNA, ale miało niewielki wpływ na wiązanie z konsensusowymi sekwencjami odpowiedzi lub jednoniciowym DNA. W porównaniu do niespecyficznych sekwencji DNA, p53 wiązał się z wyższym powinowactwem do niedopasowań i insercji zasad, podczas gdy wiązanie do różnych było podobne do tego obserwowanego dla jego sekwencji DNA. W przypadku spinek do włosów zawierających powtórzenia CTG zakres wiązania p53 był proporcjonalny do wielkości powtórzenia. do wielkości powtórzenia. Podsumowując, wykorzystując elastyczność testu wykazujemy, że pH i siła jonowa wpływają na wiązanie dwóch białek naprawczych DNA z sekwencją CTG. wiązanie dwóch białek naprawczych DNA do różnych struktur DNA. --- Niski indeks terapeutyczny digoksyny wymaga starannego monitorowania jej poziomu w surowicy. stężenia digoksyny w surowicy. Większość testów immunologicznych digoksyny cierpi z powodu interferencji z substancjami immunoreaktywnymi digoksyny. substancjami immunoreaktywnymi podobnymi do digoksyny. Ponieważ wykazano, że aptamery są wysoce specyficzne dla swoich celów, celem tego badania było opracowanie aptamerów DNA dla tego szeroko stosowanego glikozydu nasercowego. Digoksyna została powleczona na powierzchnię kulek magnetycznych ze streptawidyną. Aptamery DNA przeciwko digoksynie zostały zaprojektowane przy użyciu metody Systematic Evolution of Ligands by Exponential enrichment method (SELEX) przez 11 iteracyjnych rund inkubacji pokrytych digoksyną kulek magnetycznych ze streptawidyną z biblioteką syntetycznego DNA, elucję DNA, elektroforezę i amplifikację PCR amplifikację. Produkt PCR został sklonowany i poddany sekwencjonowaniu. Powinowactwo wiązania zostało przy użyciu koniugatu digoksyna-BSA, powleczonego na płytce ELISA. Hamujący Działanie hamujące aptameru anty-digoksyny przeprowadzono przy użyciu izolowanego przedsionka świnki morskiej. Zidentyfikowano trzy aptamery (D1, D2 i D3). Badania wiązania znakowanych fluoresceiną skróconych (bez regionu wiążącego primer) D1 i D2 oraz pełnej długości długości aptamerów anty-digoksyny D1, a odpowiadające im wartości stałych dysocjacji wartości stałych dysocjacji wynosiły odpowiednio 8,2×10(-9), 44,0×10(-9) i 17,8×10(-9) M, odpowiednio. Jest to porównywalne z tym, co inni pracownicy uzyskali dla interakcji przeciwciał monoklonalnych podniesionych przeciwko digoksynie. Różnica różnica w powinowactwie wiązania między pełną długością i skróconą anty-digoksyną D1 aptamer. Aptamer anty-digoksyny D1 hamował również działanie digoksyny na izolowany przedsionek świnki morskiej. izolowanym przedsionku świnki morskiej. Aptamer D1 anty-digoksyny rozróżniał między digoksyną i ouabainą zarówno w badaniach tkankowych, jak i eksperymentach wiązania. Nasze odkrycie wskazuje, że aptamer D1 anty-digoksyny może selektywnie wiązać się z digoksyną. Dalsze badania mogą wykazać jego przydatność do stosowania w testach digoksyny i jako środek terapeutyczny w zagrażającej życiu toksyczności digoksyny. --- Opracowaliśmy podejście do badań przesiewowych związków bioaktywnych z leków botanicznych przy użyciu wielu unieruchomionych kulek magnetycznych połączonych z wysokowydajną chromatografią cieczową i spektrometrią mas. To nowatorskie podejście zostało nazwane oparte na spektrometrii masowej z selekcją powinowactwa do wielu celów (MT-ASMS). Może ono wzbogacać i identyfikować różne typy ligandów z ekstraktów mieszanin. Wiele cele (maltaza, inwertaza, lipaza) zostały unieruchomione na kulkach magnetycznych przez kowalencyjne wiązanie przy użyciu 1-(3-dimetylo-aminopropylo)-3-etylo-karbodiimidu (EDC) i N-hydroksysukcynoimidu (NHS) jako odczynników reakcyjnych. Właściwości enzymu scharakteryzowano za pomocą transmisyjnej mikroskopii elektronowej, dyfrakcji rentgenowskiej mikroskopii transmisyjnej, dyfraktometru rentgenowskiego i magnetometru wibracyjnego. Kilka czynników, w tym pH, siły jonowej, czasu inkubacji i temperatury. zoptymalizowano przy użyciu trzech znanych ligandów (kwas kawowy, kwas ferulowy i hesperydyna). Ustalone podejście MT-ASMS zostało zastosowane do badań przesiewowych dla ligandów z chińskiego leku "Tang-Zhi-Qing", który był stosowany w leczeniu cukrzycy typu II w Chinach. cukrzycy typu II w Chinach. Siedem związanych związków zidentyfikowano za pomocą chromatografii cieczowej ze spektrometrią mas (LC/MS). Pięć aktywnych związków, w tym 2,3,4,6-tetra-O-galloilo-D-glukoza, 1,2,3,4-tetra-O-galloilo-D-glukoza, 1,2,3,4,6-penta-O-galloilo-D-glukoza, kwercetyna-3-O-β-D-glukuronid i zidentyfikowano kwercetynę-3-O-β-D-glukozyd, a ich aktywność potwierdzono przez konwencjonalny test hamowania. Nasze odkrycia sugerują, że proponowane podejście podejście jest skuteczne w badaniach przesiewowych związków o wielu aktywnościach z ekstraktów leków botanicznych.
Kulki magnetyczne są wykorzystywane w wielu zastosowaniach. Wymień niektóre stosowane powłoki.
aptamery
enzymy
streptawidyna
konkanawalina A
modyfikowany karboksylem
TiO2
przeciwciała
biblioteka SELEX
zsyntetyzowane DNA
C18
C8
oligo(dT)