Ludzkie embrionalne komórki macierzyste (ES) to pluripotencjalne komórki pochodzące z zarodków w stadium zarodków w stadium blastocysty. Zasugerowano, że komórki te powinny odgrywać ważną rolę w medycynie transplantacyjnej i będą w stanie poszerzyć naszą wiedzę z zakresu embriologii człowieka. ludzkiej embriologii. Proponujemy, aby komórki te odgrywały również istotną rolę w tworzeniu modeli w tworzeniu modeli ludzkich zaburzeń. Ten aspekt byłby najbardziej wartościowy tam, gdzie modele zwierzęce nie są w stanie wiernie odtworzyć ludzkiego fenotypu. Choroba Lescha-Nyhana jest spowodowana mutacją w genie HPRT1, która wywołuje nadprodukcję kwasu moczowego. nadprodukcję kwasu moczowego, powodując objawy dny moczanowej i kamicę moczową, a także zaburzenia neurologiczne. oprócz zaburzeń neurologicznych. Ze względu na różnice biochemiczne między między ludźmi a gryzoniami, myszy pozbawione ekspresji HPRT nie gromadzą kwasu moczowego. kwasu moczowego. W tym badaniu zademonstrowaliśmy model choroby Lescha-Nyhana poprzez mutację genu HPRT1 w ludzkich komórkach ES przy użyciu rekombinacji homologicznej. My zweryfikowaliśmy mutację w allelu HPRT1 na poziomie DNA i RNA. Poprzez przy użyciu pożywek selekcyjnych wykazaliśmy, że aktywność HPRT1 jest zniesiona w zmutowanych komórkach. a komórki HPRT1 wykazują wyższą szybkość akumulacji kwasu moczowego niż komórki typu dzikiego. komórki typu dzikiego. Dlatego też komórki te w pewnym stopniu odzwierciedlają cechy zespołu Lescha-Nyhana i mogą pomóc naukowcom w dalszym badać tę chorobę genetyczną i analizować leki, które zapobiegną wystąpieniu jej objawów. jej objawom. Sugerujemy zatem, że ludzkie choroby mogą być modelowane przy użyciu ludzkich komórek ES. --- TŁO: Zespół Lescha-Nyhana jest recesywną chorobą dziedziczoną w sposób sprzężony z chromosomem X. spowodowaną całkowitym niedoborem aktywności fosforybozylotransferazy hipoksantynowo-guaninowej (HPRT). fosforybozylotransferazy (HPRT). Wiele różnych mutacji w całym opisano wiele różnych mutacji w regionie kodującym HPRT u pacjentów z Lesch-Nyhan, w tym substytucje pojedynczych zasad, częściowe lub całkowite delecje genów, insercje genów lub endoduplikację eksonów. Jednak badanie mutacji genów u chińskich pacjentów było rzadko zgłaszane na Tajwanie. METODY: Reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR) i analiza sekwencji nukleotydów zostały wykorzystano do zidentyfikowania lokalizacji i charakteru mutacji w locus HPRT u dwóch braci dotkniętych zespołem Lescha-Nyhana. HPRT cDNA, amplifikowany z całkowitego RNA krwi obwodowej pacjenta za pomocą reakcji łańcuchowej odwrotnej transkrypcji i polimerazy reakcji łańcuchowej odwrotnej transkrypcji, sklonowano do wektora pGEM-3Zf(-), a następnie zsekwencjonowano. Badanie rodzinne Badanie obejmowało wstępne badanie przesiewowe z wykorzystaniem polimorfizmu konformacji pojedynczej nici, i dalsze potwierdzenie przez bezpośrednie sekwencjonowanie eksonu obejmującego mutację. mutację. WYNIKI: Mutacja zidentyfikowana u dwójki chorego rodzeństwa była pojedynczą substytucją nukleotydową. substytucją nukleotydową, z cytozyny na guaninę, w eksonie 3 regionu kodującego HPRT. regionu kodującego HPRT.  z fenyloalaniny na leucynę w kodonie 74 w tłumaczonym białku. Ta zmiana została następnie potwierdzona przez bezpośrednie sekwencjonowanie zarówno fragmentu cDNA HPRT i eksonu 3 genu HPRT amplifikowanego z genomowego DNA. Badanie rodzinne wykazało, że matka pacjenta była heterozygotycznym nosicielem, a mutacja mutacja wystąpiła de novo w komórce germinalnej jednego z dziadków ze strony matki. dziadków ze strony matki. WNIOSKI: Jest to pierwsze badanie rodzinne dotyczące chińskich pacjentów z zespołem Lescha-Nyhana zidentyfikowanych za pomocą analizy molekularnej na Tajwanie. Opisana mutacja jest nową substytucją, która występuje w sugerowanym "gorącym punkcie" mutacji (ekson 3) genu HPRT. Zastosowanie analizy molekularnej genu HPRT umożliwia nie tylko diagnostykę DNA poprzez bezpośrednie wykrywanie zmutowanych alleli, ale także diagnostykę prenatalną i identyfikację nosicieli w poszczególnych rodzinach dotkniętych zespołem Lescha-Nyhana. --- Mutacje w genie kodującym enzym biosyntezy puryn fosforybozylotransferazy hipoksantynowo-guaninowej (HPRT) powodują nieuleczalną neurorozwojową chorobę Lescha-Nyhana (LND) związaną z nieprawidłowym rozwojem szlaków dopaminowych w mózgu. W bieżącym badaniu zidentyfikowaliśmy zwiększoną ekspresję mikroRNA miR181a w ludzkich dopaminergicznych komórkach SH-SY5 z niedoborem HPRT. dopaminergicznych komórkach nerwiaka SH-SY5Y. Wśród genów potencjalnie regulowanych przez miR181a jest kilka, o których wiadomo, że są wymagane do rozwoju neuronów, w tym Engrailed1 (En1), Engrailed2 (En2), Lmx1a i Brn2. Wykazaliśmy, że te geny są regulowane w dół w komórkach SH-SY5Y z niedoborem HPRT i że nadekspresja miR181a znacząco zmniejsza endogenną ekspresję tych genów i hamuje translację plazmidów lucyferazy zawierających En1/2 lub Lmx1a elementy wiążące 3'UTR miRNA. I odwrotnie, hamowanie miR181a zwiększa ekspresję tych genów i ekspresję tych genów i zwiększa translację konstruktów lucyferazy zawierających sekwencje wiążące 3'UTR miRNA En1/2 i Lmx1a. Wykazaliśmy również że kluczowe geny neurorozwojowe (np. Nurr1, Pitx3, Wnt1 i Mash1), o których wiadomo, że są funkcjonalnymi partnerami są funkcjonalnymi partnerami Lmx1a i Brn2, są również znacznie regulowane w dół w komórkach SH-SY5Y z nadekspresją miR181a oraz w komórkach z niedoborem HPRT. Nasze wyniki w komórkach SH-SY5Y pokazują, że niedoborowi HPRT towarzyszy dysregulacją niektórych ważnych szlaków, które regulują rozwój neuronów dopaminergicznych i neuronów neuronów dopaminergicznych i szlaków dopaminergicznych oraz że wada ta jest związana z i prawdopodobnie przynajmniej częściowo wynika z nieprawidłowej ekspresji miR181a. Ponieważ nieprawidłowa ekspresja miR181a nie jest tak widoczna w fibroblastach LND z niedoborem HPRT fibroblastach, znaczenie komórek neuroblastoma SH-SY5Y dla ludzkiej choroby pozostaje do udowodnienia. Niemniej jednak proponujemy, aby te plejotropowe efekty neurorozwojowe miR181a mogą odgrywać rolę w patogenezie LND. --- Mutacje w genie fosforybozylotransferazy hipoksantynowo-guaninowej chromosomu X (HPRT) są odpowiedzialne za zespół Lescha-Nyhana i choroby pokrewne u ludzi. u ludzi. Ponieważ gen znajduje się na chromosomie X, mężczyźni są dotknięci chorobą, a kobiety w rodzinach są narażone na ryzyko bycia nosicielami mutacji. Ponieważ istnieje tak wiele różnych mutacji, które mogą powodować chorobę (218 różnych mutacji w 271 rodzinach), testy genetyczne na nosicielstwo u kobiet wymagają szczegółowej analizy molekularnej rodzinnej mutacji. Analiza ta może być skomplikowana przez niedostępność chorego mężczyzny do badania. Ponadto, gdy mutacja jest delecją (34 zgłoszone przypadki), analiza molekularna u u kobiet jest trudna ze względu na dwa chromosomy X. Zastosowaliśmy metodę zastosowaliśmy test klonowania limfocytów T krwi obwodowej, który wykorzystuje oporność na purynę analog 6-tioguaniny (TG) do pomiaru częstotliwości komórek u kobiet wyrażających zmutowany allel HPRT w celu określenia statusu nosicielstwa mutacji u 123 kobiet w 61 rodzinach. W rodzinach, w których określono mutację HPRT i mogła być łatwo analizowana w próbkach pochodzących od kobiet, stwierdziliśmy średnią (+/- SD) 9,7 (+/- 8,7) x 10(-6) u kobiet niebędących nosicielkami i 2,9 (+/- 3,0) x 10(-2) u kobiet niebędących nosicielkami. 3,0) x 10(-2) u nosicielek. Częstotliwość u nosicielek jest mniejsza niż 0,5 oczekiwanego dla nielosowej inaktywacji X z powodu selekcji in vivo przeciwko limfocytom T lub komórkom macierzystym wyrażającym mutację HPRT podczas rozwoju prenatalnego. rozwoju prenatalnego. Zastosowanie tego testu klonowania pozwala na określenie statusu nosicielstwa samic, nawet jeśli mutacja HPRT nie jest jeszcze znana lub jest trudna do określenia w próbkach do określenia w próbkach DNA od kobiet. Podejście to zapewnia szybki test który dostarcza informacji na temat statusu nosicielstwa w ciągu 10 dni od otrzymania próbki. --- Mutacje w genie HPRT powodują spektrum chorób, od samej hiperurykemii do hiperurykemii z głębokimi zaburzeniami neurologicznymi i behawioralnymi. do hiperurykemii z głębokimi zaburzeniami neurologicznymi i behawioralnymi. zaburzeniami neurologicznymi i behawioralnymi. Skrajny fenotyp określany jest jako zespół Lescha-Nyhana. W 271 przypadkach w których scharakteryzowano zarodkową mutację HPRT, stwierdzono 218 różnych mutacji. mutacji. Spośród nich, 34 (13%) to duże (makro-) delecje jednego eksonu lub większej, a cztery (2%) to częściowe duplikacje genów. Delecje zostały zdefiniowane tylko dla trzech z 34 makro-delecji. Molekularne podstawy dwóch z czterech duplikacji zostały zdefiniowane. Zgłaszamy tutaj punkty przerwania dla trzech nowych mutacji delecji, obejmujących eksony 4-8 (20033bp), eksony 4 i 5 (13307bp) oraz eksony 5 i 6 (9454bp), odpowiednio. Punkty przerwania delecji zostały zdefiniowane przez połączenie długiej amplifikacji łańcuchowej reakcji polimerazy (PCR) oraz konwencjonalnego PCR i sekwencjonowania DNA. sekwencjonowania DNA. Wszystkie trzy delecje są wynikiem rekombinacji niehomologicznych. Czwarta mutacja, duplikacja eksonów 2 i 3, jest wynikiem rekombinacji homologicznej. homologicznej rekombinacji między identycznymi sekwencjami 19bp w intronach 3 i 1. W sumie, dwie z trzech zarodkowych mutacji duplikacji HPRT wydają się być spowodowane przez Alu. wydają się być spowodowane homologiczną rekombinacją za pośrednictwem Alu, podczas gdy tylko z sześciu mutacji delecyjnych wydaje się wynikać z tego typu mechanizmu rekombinacji. mechanizmu rekombinacji. Pozostałe pięć mutacji delecyjnych wynikało z rekombinacji niehomologicznej. Przy tak ograniczonej liczbie scharakteryzowanych makromutacji, nierówne homologiczne rekombinacje, w których pośredniczy Alu stanowią co najmniej 8% (3 z 38) makro-zmian i 1% (3 z 271) wszystkich mutacji germinalnych HPRT. --- Zespół Lescha-Nyhana jest rzadkim recesywnym zaburzeniem metabolizmu puryn sprzężonym z chromosomem X. związane z praktycznie całkowitym niedoborem enzymu fosforybozylotransferazy hipoksantynowo-guaninowej (HPRT). Choroba charakteryzuje się charakteryzuje się hiperurykemią, samomultilacją, choreoatetozą, spastycznością i upośledzeniem umysłowym, i upośledzeniem umysłowym. Nieprawidłowości w metabolizmie puryn są obecne przy i mogą prowadzić do krystalurii kwasu moczowego i powstawania kamieni we wczesnym okresie życia. Wyniki radiograficzne opisywane w zespole Lescha-Nyhana obejmują słabo radioprzezroczyste kamienie na radiogramach jamy brzusznej lub, jeśli występuje choroba nerek, małe nerki ze słabą funkcją w urogramie dożylnym. Kamienie radiocieniujące są zwykle składają się z kwasu moczowego; jednak kilka przypadków ksantyny i hipoksantyny zawierających ksantynę i hipoksantynę u pacjentów z Lesch-Nyhan otrzymujących terapię allopuryną. opisano również kilka przypadków kamieni zawierających ksantynę i hipoksantynę. Oksypuryna to zbiorcza nazwa dla związków związków: hipoksantyny, ksantyny i kwasu moczowego, i wszystkie one mogą być przezroczyste dla promieni rentgenowskich. My przypadek zespołu Lescha-Nyhana z domniemanym odkładaniem się oksypuryny w miąższu nerek. oksypuryny w miąższu nerek, co łatwo wykazano za pomocą ultrasonografii, ale nie wykryto na standardowych radiogramach lub urogramach dożylnych. --- Opisujemy rodzinę siedmiu chłopców dotkniętych chorobą Lescha-Nyhana z różnymi fenotypami. fenotypami. Dalsze badania ujawniły mutację c.203T>C w genie kodującym HGprt u wszystkich członków, z zamianą leucyny na prolinę w reszcie 68 (p.Leu68Pro). resztę 68 (p.Leu68Pro). Tak więc pacjenci z tej rodziny wykazują szeroką gamę objawów, chociaż mają tę samą mutację. Zmutowany enzym HGprt został przygotowany przez mutagenezę ukierunkowaną na miejsce, a kinetyka enzymu wykazała, że aktywność katalityczna mutanta że aktywność katalityczna mutanta została zmniejszona, w połączeniu ze znacznym zmniejszenie powinowactwa do fosforybozylopirofosforanu (PRPP). Jego Km dla PRPP wzrosło 215-krotnie z hipoksantyną jako substratem i 40-krotnie z guaniną jako substratem z towarzyszącym obniżonym potencjałem katalitycznym. Modelowanie molekularne modelowanie molekularne potwierdziło, że najbardziej widoczną wadą było dramatycznie zmniejszone powinowactwo do PRPP. powinowactwo do PRPP. Nasze badania sugerują, że mutacja p.Leu68Pro ma silny wpływ na wiązanie silny wpływ na wiązanie PRPP i stabilność aktywnej konformacji. To sugeruje, że czynniki inne niż aktywność HGprt per se mogą wpływać na fenotyp fenotyp pacjentów z Lesch-Nyhan. --- Choroba Lescha-Nyhana (LND) jest spowodowana niedoborem fosforybozylotransferazy hipoksantynowo-guaninowej (HPRT). fosforybozylotransferazy (HPRT). Celem niniejszego badania jest scharakteryzowanie niedoboru molekularnego zdiagnozowanego klinicznie chińskiego pacjenta z atenuowanym wariantem LND. Region kodujący i granice intron-ekson genu HPRT1 zsekwencjonowano standardowymi metodami, a aktywność HPRT oznaczono metodą HPLC. metodą HPLC. Analiza struktury została przeprowadzona w celu oszacowania konsekwencji mutacji genu HPRT1. U pacjentki zidentyfikowano nową mutację c.245T>G (p.Ile82Ser). u tego pacjenta, a heterozygotyczną mutację stwierdzono u matki pacjenta. Aktywność Aktywność HPRT u pacjenta była całkowicie niewykrywalna. Badanie struktury wskazuje, że mutacja p.Ile82Ser może prowadzić do utraty hydrofobowego łańcucha bocz łańcucha bocznego i zakłócić normalną konformację białka HPRT. Jest to pomocne dla diagnozy LND jest przeprowadzenie analizy sekwencjonowania genu HPRT1 u mężczyzn niemowląt i nieletnich z hiperurykemią i dysfunkcją neurologiczną w Chinach. --- Biosynteza puryn de novo była badana w liniach komórkowych limfocytów utworzonych od pacjentów Lesch-Nyhan z niedoborem hipoksantyny-guaniny fosforybozylotransferazy (HGPRT), w różnicujących się in vitro liniach komórek erytroleukaemii linie komórkowe sklonowane z komórek charakterystycznych dla białaczki mysiej wywołanej wirusem oraz w zmutowanych komórkach chomika z niedoborem amidofosforybozylotransferazy. Związek związek między komórkowym fosforybozylopirofosforanem (PP-ryboza-P) a aktywnością enzymów katalizujących wczesne etapy biosyntezy de biosyntezy puryn de novo. Stwierdzono, że komórki chomika z niedoborem amidofosforybozylotransferazy nie gromadzą PP-rybozy-P tak jak komórki z niedoborem HGPRT. W tych modelowych systemach, przyspieszona szybkość biosyntezy puryn de novo biosyntezy puryn było zwykle związane ze wzrostem komórkowego PP-rybozy-P, ale spadek tego tempa wynika ze zmniejszenia aktywności amidofosforybozy-P. aktywności amidofosforybozylotransferazy. Regulacja zależnej od amoniaku biosyntezy de była podobna do regulacji biosyntezy puryn zależnej od glutaminy. biosyntezy puryn. --- Zidentyfikowano pięć niezależnych mutacji w genie fosforybozylotransferazy hipoksantynowo-guaninowej (HPRT) zidentyfikowano u pacjenta z częściowym niedoborem HPRT z dną moczanową i u czterech pacjentów z Lesch-Nyhan. Wykorzystując reakcję łańcuchową polimerazy (PCR) w połączeniu z bezpośrednim sekwencjonowaniem, sekwencje nukleotydowe całego regionu kodującego HPRT amplifikowanego z cDNA, a także każdego egzonu amplifikowanego z genomowego DNA. genomowego DNA. Trzy niezależne mutacje punktowe w regionie kodującym w regionie kodującym wykryto u pacjenta z częściowym niedoborem HPRT (przypadek 1) oraz u dwóch pacjentów z zespołem Lescha-Nyhana (przypadek 2 i 3), skutkujące pojedynczymi substytucjami aminokwasów. podstawienia pojedynczych aminokwasów. Badanie rodzinne przypadku 3, wykorzystujące miejsce restrykcyjne PvuII w zmutowanym genie, wykazało, że matka była heterozygotą, a siostra i płodowy brat byli heterozygotami. siostra i brat płodu odziedziczyli normalny gen HPRT od matki. W dwóch innych mutantach powodujących zespół Lescha-Nyhana, część genu HPRT została usunięta, a w obu mutantach brakowało splicingu RNA. Delecja 4 pz na na końcu 5' eksonu 4 spowodowała powstanie trzech różnych typów nieprawidłowego mRNA (Przypadek 4). mRNA (Przypadek 4). Drugi mutant (Przypadek 5) wytwarzał nieprawidłowe mRNA zawierające 26 bp intronu 8 zamiast usuniętych 58 bp na końcu 5' eksonu 9, ze względu na delecję 74-bp delecji od intronu 8 do eksonu 9. --- Choroba Lescha-Nyhana i jej atenuowane warianty są spowodowane mutacjami w genie HPRT1, który koduje enzym recyklingu puryn - fosforybozylotransferazę hipoksantyny-guaniny fosforybozylotransferazę. Mutacje są heterogenne, z ponad 400 różnymi mutacjami. udokumentowano już ponad 400 różnych mutacji. Wcześniejsze wysiłki mające na celu skorelowanie fenotypu klinicznego z różnymi mutacjami sugerowały, że łagodniejsze fenotypy są zwykle związane z mutacjami, które pozwalają na pewną resztkową funkcję enzymu. funkcję enzymu, podczas gdy najcięższy fenotyp jest związany z mutacjami null. mutantami. Odnotowano jednak wiele wyjątków od tej koncepcji. W 44 mutacje HPRT1 związane z szerokim spektrum fenotypów klinicznych. fenotypów zostały zrekonstruowane za pomocą mutagenezy ukierunkowanej na miejsce, zmutowane enzymy uległy ekspresji in vitro i oczyszczeniu, a ich właściwości kinetyczne zostały zbadane w stosunku do substratów: hipoksantyny, guaniny i fosforybozylopirofosforanu. Wyniki dostarczają mocnych dowodów na korelację między ciężkością choroby a resztkową aktywnością katalityczną enzymu (k(cat)) w stosunku do każdego z jego substratów substratów, a także kilka mechanizmów, które powodują wyjątki od tej korelacji. korelacji. Nie stwierdzono korelacji między ciężkością choroby a powinowactwem enzymu do jego substratów. enzymu do jego substratów (K(m)). Badania te stanowią cenny model dla zrozumienia ogólnych zasad korelacji genotyp-fenotyp w ludzkiej choroby, ponieważ zaangażowane mechanizmy mają zastosowanie do wielu innych zaburzeń. --- Zbadaliśmy molekularne podstawy niedoboru fosforybozylotransferazy hipoksantyny-guaniny fosforybozylotransferazy (HPRT) u pacjenta z zespołem Lescha-Nyhana. Lescha-Nyhana. Katalitycznie niekompetentna forma HPRT została wyizolowana z erytrocytów i limfoblastów tego pacjenta. Ten wariant enzymu, który nazwaliśmy nazwaliśmy HPRTKinston, jest nie do odróżnienia od normalnego enzymu pod względem pod względem stężenia wewnątrzkomórkowego i maksymalnej prędkości, ale różni się w odniesieniu do do jego punktu izoelektrycznego (bardziej podstawowego) i stałych Michaelisa dla obu substratów (znacznie podwyższone). Peptydy tryptyczne HPRTKinston zostały zmapowane przez wysokociśnieniową chromatografię cieczową w odwróconej fazie w celu zdefiniowania dokładnej nieprawidłowości w jego pierwotnej strukturze. Analiza sekwencji pojedynczego peptydu tryptycznego w HPRTKinston ujawniła zamianę kwasu asparaginowego na asparaginę w pozycji 193. Analiza elektroforetyczna peptydów CNBr peptydów HPRTKinston potwierdziła lokalizację proponowanej mutacji. To aminokwasową można wyjaśnić pojedynczą zmianą nukleotydu w kodonie kodonie dla kwasu asparaginowego 193 (GAC prowadzi do AAC). Jest to pierwsza specyficzna mutacja opisana na poziomie molekularnym u pacjenta z zespołem Lescha-Nyhana. Lescha-Nyhana. --- Zespół Lescha-Nyhana charakteryzuje się klinicznie choreoatetozą, spastycznością, samookaleczeniem oraz opóźnieniem rozwoju umysłowego i wzrostu. Biochemicznie, występuje uderzające zmniejszenie aktywności fosforybozylotransferazy hipoksantynowo-guaninowej (HGPRT). (HGPRT) u osób dotkniętych chorobą. Zbadaliśmy erytrocyty pochodzące od 14 pacjentów z zespołem Lescha-Nyhana pod kątem obecności hipoksantyny-guaniny fosforybozylotransferazy i białka enzymu. W przeciwieństwie do zwykłego stwierdzenie braku wykrywalnej fosforybozylotransferazy hipoksantynowo-guaninowej aktywności, znaleźliśmy niskie poziomy (0,002-0,79 nmoli/mg białka na godzinę) aktywności fosforybozylotransferazy hipoksantynowo-guaninowej w lizatach erytrocytów od pięciu z tych pacjentów. U trzech z pięciu pacjentów aktywność fosforybozylotransferazy hipoksantynowo-guaninowej aktywność fosforybozylotransferazy okazała się znacznie bardziej labilna in niż normalnie przy użyciu erytrocytów, które zostały rozdzielone zgodnie z ich gęstością (wiekiem). gęstości (wieku). Badania immunochemiczne z użyciem monospecyficznej surowicy odpornościowej przygotowanej z jednorodnego preparatu normalnych ludzkich erytrocytów hipoksantyny-guaniny fosforybozylotransferazy ujawniły białko immunoreaktywne (CRM) w hemolizacie od wszystkich 14 pacjentów z zespołem Lescha-Nyhana. Immunoreaktywne białko od każdego pacjenta dało reakcję całkowitej identyczności z normalnymi erytrocytami fosforybozylotransferazą hipoksantynowo-guaninową i było obecne w ilościach równych ilościom obserwowanym w prawidłowych erytrocytach. Ponadto, stałą ilość CRM stwierdzono w erytrocytach o rosnącej gęstości (wieku) od pacjentów z zespołem zespół Lescha-Nyhana pomimo zmniejszającej się hipoksantyny-guaniny aktywność fosforybozylotransferazy. Badania te potwierdzają wcześniejsze dane, które wskazują, że mutacje prowadzące do zespołu Lescha-Nyhana są zwykle, jeśli nie zawsze nie zawsze na strukturalnym genie kodującym fosforybozylotransferazę hipoksantynowo-guaninową fosforybozylotransferazy. Ponadto, chociaż wydaje się, że zmutowane białka są obecne w normalnych ilościach, często są bardzo labilne in vivo w odniesieniu do aktywności enzymatycznej. aktywności enzymatycznej. Obserwacje te sugerują, że terapia ukierunkowana na stabilizację lub aktywację aktywności enzymatycznej in vivo może przynieść potencjalne korzyści. korzyści. --- W przypadku trzech pacjentów z zespołem Lescha-Nyhana istnienie prawidłowych ilości katalitycznie nieaktywnej fosforybozylotransferazy hipoksantynowo-guaninowej (HGPRT) wykazano za pomocą przeciwciał przeciwko prawidłowym podjednostkom enzymu. Brak aktywności enzymu jest odwracany w komórkach transformowanych wirusem. Poszczególne klony komórek rewersyjnych zawierają różne enzymy HGPRT, co wykazano tutaj przez ogniskowanie izoelektryczne. Dane te silnie wspierają koncepcję strukturalnej mutacji genu jako przyczyny niedoboru enzymu w zespole Lescha-Nyhana.
Który gen jest zmutowany u pacjentów z chorobą Lescha-Nyhana?
Choroba Lescha-Nyhana (LND) jest wynikiem mutacji w sprzężonym z chromosomem X genie kodującym enzym metabolizmu puryn, fosforybozylotransferazę hipoksantynowo-guaninową (HPRT).