ERK7, członek rodziny kinaz białkowych aktywowanych mitogenami, posiada karboksylowo-końcowy ogon, który jest wymagany do aktywacji ERK7, komórkowej i jego zdolności do hamowania syntezy DNA. Aby zidentyfikować białka które oddziałują z ERK7, wykorzystaliśmy drożdżowy ekran dwuhybrydowy z COOH-końcowym ogonem ERK7 jako przynętą i wyizolowaliśmy cDNA dla nowego białka o nazwie CLIC3. Interakcja między CLIC3 i ERK7 w komórkach ssaków została potwierdzona przez koimmunoprecypitację. CLIC3 ma znaczną homologię do ludzkiego wewnątrzkomórkowych kanałów chlorkowych 1 (NCC27/CLIC1) i 2 oraz bydlęcego nerkowego kanału chlorkowego kanału p64. Podobnie jak NCC27/CLIC1, CLIC3 jest głównie zlokalizowany w jądrze i stymuluje przewodnictwo chlorkowe, gdy ulega ekspresji w komórkach. Podsumowując, wyniki te sugerują, że CLIC3 jest nowym członkiem ludzkiej rodziny CLIC. Zaobserwowana Zaobserwowana interakcja między CLIC3 i ERK7 jest pierwszą demonstracją stabilnego kompleksu między białkiem aktywującym transport jonów chlorkowych a członkiem rodziny transduktorów sygnału kinazy białkowej aktywowanej mitogenami. Specyficzne specyficzne powiązanie CLIC3 z końcowym ogonem COOH ERK7 sugeruje, że CLIC3 może odgrywać rolę w regulacji wzrostu komórek. --- CEL: Zbadanie lokalizacji i ekspresji CLIC1 w mysich liniach komórkowych w mysich liniach komórkowych wodobrzusza wątrobowokomórkowego o różnym potencjale przerzutowym. METODY: Modele mysiego wodobrzusza wątrobowokomórkowego (linia komórkowa o wysokim potencjale przerzutów limfatycznych przerzutów limfatycznych-Hca-F i niski potencjał przerzutów limfatycznych-Hca-P). linia-Hca-P) zostały zbadane przy użyciu fluorescencyjnej dwuwymiarowej różnicy-żelu elektroforezy (2-D DIGE) i spektrometrii masowej w celu wykrycia lokalizacji i ekspresji CLIC1. Immunofluorescencję, immunocytochemię i Western do oceny statusu białka CLIC1 w dwóch liniach komórkowych. WYNIKI: Ekspresję CLIC1 uzyskano w cytoplazmie i błonie plazmatycznej komórek obu linii komórkowych. komórek w obu liniach komórkowych. 2-D DIGE wykazało, że CLIC1 ulegał nadekspresji w komórkach Hca-F 1,6 razy wyższa niż w komórkach Hca-P. Komórki Hca-F miały również wyższą integralną błonę CLIC1 w komórkach Hca-P. WNIOSKI: Chociaż ekspresja CLIC1 jest wykrywana zarówno w liniach komórkowych Hca-F, jak i Hca-P i Hca-P, wyższy poziom ekspresji białka występuje w komórkach Hca-F. CLIC1 może odgrywać ważną rolę w przerzutowaniu nowotworów.
Gdzie zlokalizowane jest białko CLIC1?
CLIC1 jest wewnątrzkomórkowym kanałem jonów chlorkowych, który jest zlokalizowany zarówno w jądrze, jak i cytolasmie.