1. Używając SEA0400, silnego i selektywnego inhibitora wymiennika Na+-Ca2+ (NCX), zbadaliśmy, czy NCX jest zaangażowany w indukowane tlenkiem azotu (NO) zaburzenia homeostazy Ca2+ retikulum endoplazmatycznego (ER), a następnie apoptozę w hodowanych mikroglejach szczurów. 2. Nitroprusydek sodu (SNP), donor NO, zmniejszał żywotność komórek w sposób zależny od dawki i czasu z apoptotyczną śmiercią komórek w hodowanych mikroglejach. hodowanych mikrogleju. 3. Leczenie SNP zmniejszyło poziom ER Ca2+, co oceniane przez pomiar wzrostu poziomu cytozolowego Ca2+ indukowanego przez ekspozycję komórek na komórki na tapsigarginę, nieodwracalny inhibitor ER Ca2+-ATPazy. 4. Leczenie Leczenie SNP zwiększyło również ekspresję mRNA CHOP i GPR78, twórców stresu ER. 5. SEA0400 w stężeniu 0,3-1,0 mikroM chronił mikroglej przed indukowaną przez SNP apoptozą. 6. SEA0400 blokował nie tylko indukowany przez SNP spadek poziomu ER Ca2+, ale także indukowany przez SNP wzrost poziomów CHOP i GRP78. ale także indukowany przez SNP wzrost mRNA CHOP i GRP78. 7. SEA0400 nie wpływ na pojemnościowe wejście Ca2+ w obecności i nieobecności SNP. 8. SNP zwiększał wychwyt 45Ca2+ zależny od Na+, a wzrost ten był blokowany przez SEA0400. 9. Wyniki te sugerują, że SNP indukuje apoptozę poprzez szlak stresu ER a SEA0400 osłabia apoptozę indukowaną przez SNP poprzez tłumienie stresu ER w hodowanych mikroglejach. hodowanych mikrogleju. Nasze odkrycia sugerują, że NCX odgrywa rolę w ER Ca2+ w warunkach patologicznych. --- Wymiennik Na(+)/Ca(2+) (NCX) odgrywa rolę w regulacji wewnątrzkomórkowych poziomów Ca(2+) i tlenku azotu (NO). Ca(2+), a tlenek azotu (NO) jest zaangażowany w wiele stanów patologicznych w tym zaburzenia neurodegeneracyjne. Wcześniej odkryliśmy, że sód nitroprusydek sodu (SNP), donor NO, powoduje apoptotyczną śmierć komórek w hodowanych komórkach glejowych poprzez komórkach glejowych poprzez szlaki, w których pośredniczy NCX, a mechanizm cytotoksyczności indukowanej przez NO jest zależny od typu komórki. W niniejszym badaniu zbadano przy użyciu specyficznego inhibitora NCX 2-[4-[(2,5-difluorofenylo)metoksy]fenoksy]-5-etoksyaniliny (SEA0400), czy NCX bierze udział w uszkodzeniu wywołanym przez NO w hodowanych komórkach neuronalnych. Leczenie komórek neuroblastoma SH-SY5Y z SNP skutkowało apoptozą, a cytotoksyczność była blokowana przez białko aktywowane mitogenem (MAP) / zewnątrzkomórkową (ERK) U0126 i inhibitor kinazy p38 MAP (MAPK) SBP. (MAPK) SB203580, ale nie przez c-Jun N-końcową kinazę (JNK) inhibitor SP60012. SNP zwiększył napływ Ca(2+) i wewnątrzkomórkowe poziomy Ca(2+). Ponadto SNP zwiększyło fosforylację ERK i p38 MAPK oraz produkcję reaktywnych form tlenu (ROS) w sposób zależny od zewnątrzkomórkowego Ca(2+). Te efekty SNP zostały powstrzymane przez SEA0400. Cytotoksyczność indukowana SNP nie była wpływ inhibitory kanałów Ca(2+), Na(+) i magazynujących/pojemnościowych kanały. Ponadto, indukowany przez SNP wzrost wewnątrzkomórkowych poziomów Ca(2+), produkcja ROS i spadek żywotności komórek były blokowane przez zależny od cGMP inhibitor kinazy białkowej (PKG). Wyniki te sugerują, że napływ Ca(2+) przez odwrotną NCX NCX jest zaangażowany w kaskadę apoptozy neuronów indukowanej przez NO i NO aktywuje NCX poprzez szlak cyklazy guanylanowej/PKG. --- Niedawno wykazaliśmy, że wymiennik Na(+)/Ca(2+) (NCX) jest zaangażowany w cytotoksyczność indukowaną tlenkiem azotu (NO) w hodowanych astrocytach i neuronach. cytotoksyczności indukowanej tlenkiem azotu (NO) w hodowanych astrocytach i neuronach. Jednakże, nie ma dowodów in vivo sugerujących rolę NCX w zaburzeniach neurodegeneracyjnych związanych z NO. NO jest zaangażowany w patogenezie zaburzeń neurodegeneracyjnych, takich jak choroba Parkinsona. To badanie badanie zbadało wpływ SEA0400, specyficznego inhibitora NCX, na 1-metylo-4-fenylo-1,2,3,6-tetrahydropirydyna (MPTP) - indukowana dopaminergiczna neurotoksyczność neurotoksyczność, model choroby Parkinsona, u myszy C57BL/6J. Leczenie MPTP (10 mg / kg, cztery razy w odstępach 2-godzinnych) zmniejszyło poziom dopaminy w śródmózgowiu i upośledzało koordynację ruchową, a efektom tym przeciwdziałały S-metylotiocitrulina, selektywny inhibitor neuronalnej syntazy NO. SEA0400 chronił przed neurotoksycznością dopaminergiczną (określaną przez poziomy dopaminy w śródmózgowiu i prążkowiu, immunoreaktywność hydroksylazy tyrozynowej w istocie czarnej i prążkowiu. istocie czarnej i prążkowiu, uwalnianiu dopaminy w prążkowiu i deficytach motorycznych) w myszy leczonych MPTP. SEA0400 nie wykazywał aktywności zmiatającej rodniki. SEA0400 nie wpływ na metabolizm MPTP i indukowaną przez MPTP produkcję NO i aktywację mikrogleju, podczas gdy osłabiał indukowany przez MPTP wzrost pozakomórkowej kinazy regulowanej sygnałem kinazy (ERK) fosforylacji i produktu peroksydacji lipidów, kwasu tiobarbiturowego substancji reaktywnej. Odkrycia te sugerują, że SEA0400 chroni przed neurotoksycznością indukowaną MPTP prawdopodobnie poprzez blokowanie fosforylacji ERK i lipidów peroksydacji lipidów, które są zależne od napływu Ca(2+) za pośrednictwem NCX. --- Zbadano kardioprotekcyjne działanie SEA0400, nowego inhibitora wymiennika Na(+)-Ca(2+) zbadano w izolowanej tkance mięśnia sercowego świnki morskiej i miocytach komorowych. miocytów komorowych. W preparacie tkanki prawej komory z perfuzją wieńcową preparat SEA0400 nie miał działania kardiosupresyjnego podczas normoksji i eksperymentalnego niedokrwienia, ale zwiększał odzyskiwanie siły skurczu podczas reperfuzji. reperfuzji. SEA0400 nie miał wpływu na zawartość ATP w tkance podczas normoksji, ale ale osłabiał jego spadek podczas niedokrwienia. Leczenie miocytów komorowych roztworem naśladującym niedokrwienie (o wysokiej zawartości K(+), bez glukozy, pH 6,0, gazowany N(2)) powodował depolaryzację mitochondrialnego potencjału błonowego i wzrost wzrost cytoplazmatycznego i mitochondrialnego stężenia Ca(2+), który miał podobny przebieg czasowy. SEA0400 znacząco opóźniał te zmiany. Wyniki te sugerują, że SEA0400 utrzymuje funkcję mitochondriów i zawartość ATP w tkankach podczas niedokrwienia poprzez hamowanie przeciążenia cytoplazmatycznego i mitochondrialnego Ca(2+) . --- Wymiennik sodowo-wapniowy (NCX) jest jednym z transporterów przyczyniających się do kontroli wewnątrzkomórkowego stężenia wapnia (Ca(2+)) poprzez normalne pośrednicząc w wypływie Ca(2+) netto. Jednak tryb odwrotny NCX może powodować wewnątrzkomórkowe przeciążenie stężeniem Ca(2+), co nasila uszkodzenie tkanki mięśnia sercowego wynikające z niedokrwienia. uszkodzenie tkanki mięśnia sercowego wynikające z niedokrwienia. Chociaż wykazano, że inhibitor NCX SEA0400 wykazano, że terapeutycznie zmniejsza uszkodzenie mięśnia sercowego, nie ma techniki in vivo do monitorowania wewnątrzkomórkowych fluktuacji Ca(2+) wytwarzanych przez ten lek. Rezonans magnetyczny serca wzmocniony manganem (MEMRI) może pośrednio oceniać wypływ Ca(2+) poprzez szacowanie zmian zawartości manganu (Mn(2+)) in vivo, ponieważ Mn(2+) został jako marker zastępczy dla Ca(2+). W niniejszym badaniu wykorzystano technikę MEMRI do zbadania czasowych cech sercowego wypływu Mn(2+) poprzez wdrożenie techniki T(1)-mapping i hamując NCX za pomocą SEA0400. Zmiana szybkości relaksacji podłużnej (1)H(2)O Delta R(1) w wolnej ścianie lewej komory została obliczona w różnych punktach czasowych po infuzji. obliczono w różnych punktach czasowych po infuzji 190 nmol / g manganu (MnCl(2)) u zdrowych dorosłych samców myszy. Wyniki wykazały 50% tłumienie sygnału MEMRI w 3,4 +/- 0,6 h po infuzji MnCl(2) bez interwencji lekowej. interwencja. Ponadto, leczenie 50 +/- 0,2 mg/kg SEA0400 znacząco zmniejszyło tempo spadku Delta R(1). W 4,9-5,9 h po infuzji MnCl(2), średnie wartości Delta R(1) dla dwóch grup leczonych SEA0400 wynosiły 2,46 +/- 0,29 i 1,72 +/- 0,24 s(-1) odpowiednio dla dawek 50 i 20 mg/kg w porównaniu do wartości 1,27 +/- 0,28 s(-1) dla grupy kontrolnej. grupy kontrolnej. Gdy te dane in vivo zostały porównane z bezwzględną zawartością manganu ex vivo dane dotyczące zawartości manganu, wykazano, że technika mapowania MEMRI T(1) skutecznie kwantyfikuje szybkość wypływu Mn(2+) w mięśniu sercowym. Dlatego połączenie NCX z MEMRI może być użyteczną techniką oceny mechanizmów i szybkości transportu Mn(2+) in vivo, co może odzwierciedlać zmiany w transporcie Ca(2+) transport. --- Wpływ SEA0400, selektywnego inhibitora wymiennika Na(+)/Ca(2+) (NCX), na Na(+)-zależny wychwyt Ca(2+) i uwalnianie katecholaminy (CA) były w bydlęcych komórkach chromochłonnych nadnerczy, które zostały obciążone Na(+) przez leczenie ouabainą i weratrydyną. SEA0400 hamował zależne od Na(+) (45)Ca(2+) i uwalnianie CA, z wartościami IC(50) wynoszącymi odpowiednio 40 i 100 nM, odpowiednio. Wartości IC(50) innego inhibitora NCX KB-R7943 wynosiły odpowiednio 1,8 i 3,7 mikroM, odpowiednio. Wyniki te wskazują, że SEA0400 jest około 40 razy silniejszy niż KB-R7943 w hamowaniu NCX działającego w trybie odwrotnym. W nienaruszonych komórkach SEA0400 i KB-R7943 hamowały uwalnianie CA indukowane przez acetylocholinę i DMPP. Wartości IC(50) SEA0400 wynosiły 5,1 i 4,5 mikroM, a wartości KB-R7943 wynosiły 2,6 i 2,1 mikroM przeciwko uwalnianiu indukowanemu przez acetylocholinę i DMPP, wskazując, że siła działania SEA0400 wynosi około połowy KB-R7943 w hamowaniu uwalniania CA za pośrednictwem receptora nikotynowego. Wiązanie [(3)H]nikotyny z receptorami nikotynowymi było hamowane przez SEA0400 (IC(50) = 90 mikroM) i KB-R7943 (IC(50) = 12 mikroM). Na podstawie tych wyników stwierdzono, że w przeciwieństwie do KB-R7943, SEA0400 ma silne i selektywne działanie na NCX w bydlęcych komórkach chromafinowych nadnerczy. --- Wpływ nowo zsyntetyzowanego związku 2-[4-[(2,5-difluorofenylo)metoksy]fenoksy]-5-etoksyaniliny (SEA0400) na wymiennik Wymiennik Na+-Ca2+ (NCX) został zbadany i porównany z wymiennikiem 2-[2-[4-(4-nitrobenzyloksy)fenylo]etylo]izotiomocznika (KB-R7943). Ponadto zbadano wpływ SEA0400 na uszkodzenie reperfuzyjne in vitro i in vivo. SEA0400 był niezwykle silniejszy niż KB-R7943 w hamowaniu zależnego od Na+ wychwytu Ca2+ w hodowanych neuronach, astrocytach i mikrogleju: wartości IC50 dla SEA0400 i KB-R7943 wynosiły odpowiednio od 5 do 33 nM i od 2 do 4 mikroM. SEA0400 w zakresie stężeń zakresie stężeń, które hamowały NCX, wykazywały znikome powinowactwo do kanałów kanałów Ca2+, kanałów Na+, kanałów K+, transportera noradrenaliny i receptorów 14 receptory i nie wpływały na aktywność wymiennika Na + / H +, Na+,K+-ATPazy, Ca2+-ATPazy i pięciu enzymów. SEA0400, w przeciwieństwie do KB-R7943, nie hamował operowanego przez magazynowanie wejścia Ca2+ w hodowanych astrocytach. SEA0400 osłabiał zależną od dawki paradoksalną produkcję reaktywnych form tlenu, tworzenie drabiny DNA tlenu, tworzenie drabiny DNA i kondensację jądrową w hodowanych astrocytach, podczas gdy nie wpływał na uszkodzenie komórek wywołane tapsigarginą. Ponadto podawanie SEA0400 zmniejszyło objętość zawału po przejściowym okluzji tętnicy środkowej mózgu w korze mózgowej i prążkowiu szczura. Te wyniki wskazują, że SEA0400 jest najsilniejszym i najbardziej selektywnym inhibitorem NCX, i sugerują, że związek może wywierać działanie ochronne na niedokrwienne uszkodzenie mózgu uszkodzenia mózgu. --- Aktywacja wymiennika Na+/Ca2+ może przyczyniać się do przeciążenia Ca2+ podczas reperfuzji po przejściowym niedokrwieniu. reperfuzji po przejściowym niedokrwieniu. Zbadaliśmy wpływ 2-[4-[(2,5-difluorofenylo) metoksy]fenoksy]-5-etoksyaniliny (SEA0400), selektywnego inhibitora wymiany Na+/Ca2+. selektywny inhibitor wymiany Na + / Ca2 + na psim modelu uszkodzenie niedokrwienne / reperfuzyjne (ogłuszenie mięśnia sercowego). Ogłuszenie mięśnia sercowego było indukowane przez 15-minutową okluzję lewej przedniej zstępującej tętnicy wieńcowej a następnie 4-godzinną reperfuzję u znieczulonych psów z otwartą klatką piersiową. Reperfuzja stopniowo przywracała procentowe skrócenie segmentu mięśnia sercowego, ale pozostawała obniżona podczas 4-godzinnego okresu reperfuzji. Dożylne wstrzyknięcie bolusa SEA0400 (0,3 lub 1,0 mg/kg), podane 1 min przed reperfuzją, znacząco poprawiło w niedokrwionym/reperfundowanym mięśniu sercowym. SEA0400 nie wpływał na hemodynamikę i parametry elektrokardiogramu. Ponadto Ponadto SEA0400 nie wpływał na wywołaną reperfuzją zmianę przepływu wieńcowego przepływu wieńcowego. Wyniki te sugerują, że wymiennik Na+/Ca2+ jest zaangażowany w uszkodzenie ogłuszonego mięśnia sercowego. ogłuszony mięsień sercowy psów po reperfuzji i że SEA0400 ma działanie ochronne wpływ na ogłuszenie mięśnia sercowego u psów. --- TŁO: Przebudowa molekularna w niewydolności serca obejmuje spowolnienie repolaryzacji, co prowadzi do proarytmii. CEL: Ocena wpływu inhibicji wymiennika Na(+)/Ca(2+) (NCX) na repolaryzację jako nowej koncepcji antyarytmicznej. repolaryzacji jako nowej koncepcji antyarytmicznej w przewlekłej niewydolności serca (CHF). METODY I WYNIKI: Przewlekłą niewydolność serca wywołano szybką stymulacją komorową u królików. Funkcję lewej komory oceniano za pomocą echokardiografii. Jednofazowe potencjały czynnościowe potencjały czynnościowe (MAP) wykazały wydłużenie repolaryzacji w CHF po bloku przedsionkowo-komorowego i stymulacji przy różnych długościach cyklu. Sotalol (100 μM, n = 13) lub weratrydyna (0,5 μM; n = 15) powodowały dalszy znaczący wzrost czasu trwania MAP. wzrost czasu trwania MAP. CHF była związana ze zwiększoną dyspersją repolaryzacji w porównaniu do leczonych sotalolem (+22 ± 7 ms; P < .05) i weratrydyną (+22 ± 7 ms; P < .05). leczonych weratrydyną (+20 ± 6 ms; P < .05). W obecności niskiego stężenia stężenia potasu, sotalol i weratrydyna powtarzalnie indukowały wczesne po depolaryzacji (EAD) i polimorficzne tachyarytmie komorowe (VT). SEA0400 (1 μM), farmakologiczny inhibitor NCX, znacząco skrócił czas trwania MAP (P < .01) i zmniejszył dyspersję (P < .05). Tłumił EAD w 6 z 13 niewydolnych serc leczonych sotalolem i w 9 z 10 niewydolnych serc leczonych weratrydyną serca, prowadząc do zmniejszenia częstoskurczu komorowego (60% w niewydolnych sercach leczonych sotalolem i 83% w niewydolnych sercach leczonych weratrydyną). Symulacje z wykorzystaniem modelu matematycznego wykazały skrócenie czasu trwania potencjału czynnościowego i liczby EAD przez blok NCX we wszystkich podgrupach. WNIOSKI: W eksperymentalnym modelu CHF, ostre zahamowanie NCX (1) skraca czas trwania MAP, (2) zmniejsza dyspersję repolaryzacji i (3) tłumi EAD i VT. Nasze obserwacje wskazują po raz pierwszy, że farmakologiczne hamowanie NCX zwiększa rezerwę repolaryzacji i chroni przed częstoskurczami komorowymi w niewydolności serca. --- Wpływ 2-[4-[(2,5-difluorofenylo) metoksy]fenoksy]-5-etoksyaniliny (SEA0400), nowo zsyntetyzowanego inhibitora wymiennika Na(+)-Ca(2+) (NCX), na prąd NCX i inne prądy błonowe. NCX i inne prądy membranowe badano w izolowanych miocytach komorowych świnki morskiej miocytów komorowych i porównano z tymi z 2-[2-[4-(4-nitrobenzyloksy) fenylo]etylo]izotiomocznika (KB-R7943). SEA0400 zależnie od stężenia hamował prąd NCX z 10-krotnie wyższą siłą niż KB-R7943; 1 mikroM SEA0400 i 10 mikroM KB-R7943 hamowały prąd NCX o ponad 80%. KB-R7943, przy 10 mikroM, hamował prąd sodowy, prąd wapniowy typu L, opóźniony prostowniczy prąd potasowy i do wewnątrz prostowniczy prąd potasowy o ponad 50%, ale SEA0400 (1 mikroM) nie miał znaczącego wpływu na te prądy. prądy. Wyniki te wskazują, że SEA0400 jest silnym i wysoce selektywnym inhibitorem NCX. inhibitorem NCX i byłby potężnym narzędziem do dalszych badań nad rolą NCX w sercu i terapeutycznego potencjału jego hamowania. --- Tlenek azotu (NO) jest zaangażowany w wiele stanów patologicznych, w tym zaburzenia neurodegeneracyjne. Wcześniej odkryliśmy, że nitroprusydek sodu (SNP), donor NO, stymuluje kinazy białkowe aktywowane mitogenami (MAPK), takie jak pozakomórkowa kinaza regulująca sygnał (ERK), c-jun N-końcowa kinaza białkowa (JNK) i p38 MAPK, prowadząc do apoptozy niezależnej od kaspaz w hodowanych astrocytach. astrocytach. W świetle wcześniejszych obserwacji, że NO stymuluje aktywność wymiennika Na(+)/Ca(2+) (NCX), niniejsze badanie bada udział NCX w cytotoksyczności. Specyficzny inhibitor NCX SEA0400 blokował indukowaną przez SNP fosforylację ERK, JNK i p38 MAPK oraz zmniejszenie żywotności komórek. Indukowana SNP fosforylacja ERK, JNK i p38 MAPK była blokowana przez usunięcie zewnętrznego Ca(2+), a leczenie SNP spowodowało wzrost napływu (45)Ca(2+). Ten (45)Ca(2+) był blokowany przez SEA0400, ale nie przez bloker kanału Ca(2+) nifedypinę. nifedypina. Ponadto, indukowany przez SNP napływ (45)Ca(2+) i cytotoksyczność były zmniejszone w komórkach pozbawionych NCX1, które zostały transfekowane siRNA NCX1. Inhibitory wewnątrzkomórkowych białek zależnych od Ca(2+), takich jak kalpaina i kalmodulina, blokowały indukowaną przez SNP fosforylację ERK i spadek żywotności komórek. żywotności komórek. Ponadto, inhibitor cyklazy guanylanowej LY83583 oraz KT5823 blokowały cytotoksyczność indukowaną przez SNP. Odkrycia te sugerują, że napływ Ca(2+) za pośrednictwem NCX wyzwala indukowaną przez SNP apoptozę w astrocytach, w której może pośredniczyć szlak zależny od cGMP. --- Zbadaliśmy udział wymiennika Na(+)/Ca(2+) w automatyzmie mięśnia sercowego żyły płucnej za pomocą specyficznego inhibitora mięśnia sercowego żyły płucnej za pomocą specyficznego inhibitora, SEA0400. Potencjały czynnościowe zarejestrowano z warstwy mięśnia sercowego izolowanej świnki morskiej preparaty żył płucnych, a transjenty Ca (2+) rejestrowano z kardiomiocytów. kardiomiocytów. Spontaniczną aktywność elektryczną zaobserwowano w 17,7% preparatów. która była hamowana przez SEA0400 lub ryanodynę. W spokojnych preparatach preparatach ouabaina indukowała aktywność elektryczną i spontaniczne transjenty Ca(2+) które były hamowane przez SEA0400, a także ryanodynę. Wyniki te dostarczają farmakologicznych dowodów na to, że wymiennik Na(+)/Ca(2+) leży u podstaw automatyzm mięśnia sercowego żyły płucnej. --- Wpływ SEA0400, nowego inhibitora wymiennika Na+-Ca2+, na mechaniczne i parametry elektrofizjologiczne perfuzji wieńcowej prawej świnki morskiej badano podczas niedokrwienia bez przepływu i reperfuzji. reperfuzji. Siła skurczu i czas trwania potencjału czynnościowego były zmniejszone podczas niedokrwienia bez przepływu, podczas gdy napięcie spoczynkowe było zwiększone. Po reperfuzji zaobserwowano przemijające arytmie, a siła skurczu powróciła do do mniej niż 50% wartości sprzed niedokrwienia. SEA0400 (1 mikroM) nie miał wpływu na spadek siły skurczowej podczas spadek siły skurczu podczas niedokrwienia bez przepływu, ale zniósł wzrost napięcia spoczynkowego. w napięciu spoczynkowym. SEA0400 znacząco poprawił odzyskiwanie siły skurczu po reperfuzji do około 80% wartości sprzed niedokrwienia. SEA0400 nie miał wpływu na potencjał czynnościowy w normalnych warunkach i podczas niedokrwienia, ale znacząco poprawiał odzyskiwanie czasu trwania potencjału czynnościowego po reperfuzji. Zwiększenie odzyskiwania siły skurczu podczas reperfuzji przez SEA0400 zaobserwowano również, gdy lek był stosowany tylko przed i podczas okres niedokrwienia i gdy lek był stosowany tylko podczas reperfuzji. Obecne Obecne wyniki wskazują, że hamowanie wymiennika Na+-Ca2+ zarówno podczas niedokrwienia lub podczas reperfuzji wywiera działanie kardioprotekcyjne i zwiększa przywracanie funkcji skurczowej mięśnia sercowego. --- SEA0400 jest selektywnym inhibitorem wymiennika Na(+)/Ca(2+) o równej potencjały do tłumienia zarówno działania w trybie do przodu, jak i do tyłu Na(+)/Ca(2+). Obecne eksperymenty zostały zaprojektowane w celu zbadania efektu częściowej blokady wymiennika Na(+)/Ca(2+) na obsługę Ca(2+) w izolowanych miocytach komorowych szczura. miocytach komorowych szczura. Zmierzono wewnątrzkomórkowe transienty Ca(2+) i skracanie komórek mierzono w miocytach komorowych obciążonych barwnikiem fluorescencyjnym Fura-2-AM. Częściowa blokada wymiennika Na(+)/Ca(2+) była indukowana przez superfuzję komórek z SEA0400 w stężeniu 0,3 mikroM. Amplituda wewnątrzkomórkowego Ca(2+) i skrócenie komórek były znacząco zwiększone przez SEA0400 zarówno w zarówno w miocytach stymulowanych polem, jak i zaciśniętych napięciem, bez znaczącego wzrostu rozkurczowego poziomu Ca(2+) i stałej czasowej rozpadu przejściowego Ca(2+). W SEA0400 indukowany wzrost przejściowego poziomu Ca(2+) i skracanie komórek towarzyszyło znacznemu zmniejszeniu rozkurczowego poziomu Ca(2+) i stałej czasowej rozpadu Ca(2+). i skrócenie komórki towarzyszyło znaczące zmniejszenie szczytowego prądu Ca(2+) typu L . Efekty te można wytłumaczyć autoregulacyjnym charakterem obsługi Ca(2+) przez serce. Ca(2+), ponieważ zmniejszony wypływ Ca(2+) z komórki powoduje zwiększone obciążenie Ca(2+) do retikulum sarkoplazmatycznego, co prowadzi do zwiększonego uwalniania Ca(2+) co z kolei może zmniejszyć prąd Ca(2+) typu L poprzez przyspieszenie zależną od Ca(2+) inaktywację prądu Ca(2+) typu L. Nasze wyniki sugerują, że złożone zmiany w cyklu Ca(2+) mogą wystąpić po selektywnym farmakologicznym farmakologicznej inhibicji wymiennika Na(+)/Ca(2+). --- Zaangażowanie wymiennika Na+/Ca2+ w inotropię i arytmogenezę indukowaną ouabainą arytmogenezę zbadano za pomocą specyficznego inhibitora, SEA0400. W mięśniu brodawkowatym prawej mięśnia brodawkowatego prawej komory izolowanego z komory świnki morskiej, 1 mikroM SEA0400, który specyficznie hamuje wymiennik Na + / Ca2 + o 80%, zmniejszył indukowana ouabainą (1 mikroM) dodatnia inotropia o 40%, ale nie miała wpływu na inotropię indukowaną przez izobutylometyloksantynę 100 mikroM. SEA0400 znacząco hamował skurcz indukowany przez roztwór o niskiej zawartości Na+. W komórkach HEK293 wyrażających wymiennik Na+/Ca2+, 1 mikroM ouabain indukował wzrost wewnątrzkomórkowego Ca2+. wewnątrzkomórkowego Ca2+, który był hamowany przez SEA0400. Skurcze arytmiczne indukowane przez 3 mikroM ouabainy były znacznie zmniejszone przez SEA0400. Wyniki te dostarczają farmakologicznych dowodów na to, że wymiennik Na+/Ca2+ jest zaangażowany w indukowaną ouabainą inotropię i arytmogenezę. --- SEA0400 (2-[4-[(2,5-difluorofenylo)metoksy]fenoksy]-5-etoksyanilina) został niedawno opisany jako silny i selektywny inhibitor Na(+)-Ca(2+). został niedawno opisany jako silny i selektywny inhibitor wymiany Na(+)-Ca(2+) w preparatach sercowych, neuronalnych i nerkowych. Hamujące działanie SEA0400 badano na sklonowanym sercowym wymienniku Na(+)-Ca(2+), NCX1.1, wyrażony w oocytach Xenopus laevis, aby uzyskać wgląd w jego hamujący mechanizm mechanizm. Prądy wymiany Na(+)-Ca(2+) mierzono przy użyciu techniki gigantycznego wyciętego płata wykorzystując warunki do oceny zarówno prądów wewnętrznych, jak i zewnętrznych. SEA0400 hamował zewnętrzne prądy wymiany Na(+)-Ca(2+) z wysokim powinowactwem (IC(50) = 78 +/- 15 i 23 +/- 4 nM dla prądów szczytowych i ustalonych, odpowiednio). Znacznie mniejsza siła hamująca (tj. Mikromolarna) była zaobserwowano dla prądów wewnętrznych. Profil hamujący został ponownie zbadany po proteolitycznym traktowaniu wyciętych plastrów alfa-chymotrypsyną, procedurą która eliminuje jonowe mechanizmy regulacyjne. Po tym zabiegu wartość IC(50) wartość 1,2 +/- 0,6 mikroM oszacowano dla prądów zewnętrznych, podczas gdy do wewnątrz prądy stały się prawie niewrażliwe na SEA0400. Hamujące działanie SEA0400 na prądy wymiany na zewnątrz były widoczne zarówno przy wysokich, jak i niskich stężeniach Ca(2+), chociaż odnotowano różne cechy. SEA0400 przyspieszył szybkość inaktywacji prądów zewnętrznych. Na podstawie sparowanych eksperymentów impulsowych, SEA0400 zmienił odzyskiwanie wymienników ze stanu nieaktywnego zależnego od Na(+)(i) szczególnie przy wyższych regulacyjnych stężeniach Ca(2+)(i). Wreszcie SEA0400 była silnie zależna od wewnątrzkomórkowego stężenia Na(+) stężenia. Nasze dane potwierdzają, że SEA0400 jest najsilniejszym inhibitorem układu sercowy wymiennik Na (+) - Ca (2+) opisany do tej pory i zapewnia rozsądne wyjaśnienie jego pozornej selektywności trybu transportu.
Mała cząsteczka SEA0400 jest inhibitorem jakiego antyportera/wymiennika jonów?
Wpływ SEA0400, selektywnego inhibitora wymiennika Na(+)/Ca(2+) (NCX), na zależny od Na(+)wychwyt Ca(2+ i uwalnianie katecholaminy (CA) badano w bydlęcych komórkach chromafinowych nadnerczy, które zostały obciążone Na(+) przez leczenie ouabainą i weratrydyną. SEA0400 hamował zależny od Na(+) wychwyt (45)Ca(2+) i uwalnianie CA, z wartościami IC(50) odpowiednio 40 i 100 nM.  