Ligaza ubikwitynowa E3 CHIP (C-końcowa część białka oddziałującego z Hsc70) jest Uważa się, że jest centralnym graczem w podejmowaniu decyzji o segregacji komórkowej, ponieważ łączy chaperony molekularne Hsp70/Hsc70 i Hsp90 z ubikwityną proteasomalną szlakiem degradacji. Aby lepiej zrozumieć proces decyzyjny, określiliśmy powinowactwo CHIP do Hsp70 i Hsp90 przy użyciu izotermicznej kalorymetrii miareczkowej. Przeanalizowaliśmy wpływ CHIP na cykle ATPazy obu chaperonów w obecności w obecności ko-chaperonów i substratu, a także określiliśmy skuteczność ubikwitynacji ubikwitynacji CHIP w obecności chaperonów. Stwierdziliśmy, że CHIP ma sześciokrotnie wyższe powinowactwo do Hsp90 w porównaniu z Hsc70. CHIP nie miał wpływu na dysocjację ADP lub asocjację ATP, ale zmniejszał kochaperon Hsp70 Stymulowane przez Hdj1 szybkości ATPazy pojedynczego obrotu Hsc70 i Hsp70. CHIP nie wpływał na cykl ATPazy Hsp90 przy braku ko-chaperonów lub w obecności kochaperonu Hsp90. obecności ko-chaperonów Hsp90 Aha1 lub p23. Poliubikwitynacja termicznie denaturowanej lucyferazy i natywnego substratu p53 była znacznie bardziej wydajna w obecności Hsc70 i Hdj1 niż w obecności Hsp90, co wskazuje, że CHIP preferencyjnie ubikwitynuje substraty związane z Hsp70. --- Regulacja poziomu białka receptora węglowodorów arylowych (AhR) była obszarem obszar żywego zainteresowania, biorąc pod uwagę jego ważną rolę w pośredniczeniu w adaptacji komórkowej adaptacji komórkowej i toksycznej odpowiedzi na kilka zanieczyszczeń środowiska. Karboksylowy karboksylowy koniec ligazy ubikwityny białka oddziałującego z hsc70 (CHIP) był wcześniej związana z regulacją receptora węglowodorów arylowych, chociaż mechanizmy mechanizmy nie zostały bezpośrednio wykazane. W tym badaniu ustaliliśmy, że CHIP może wiązać się z AhR na poziomie komórkowym tych dwóch białek, sugerując potencjalną rolę CHIP w regulacji kompleksu AhR. Analiza analiza frakcjonowanych w gradiencie sacharozy kompleksów AhR tłumaczonych in vitro ujawniła, że CHIP może pośredniczyć w ubikwitynacji hsp90, jednocześnie współpracując z niezidentyfikowanymi czynnikami w celu promowania ubikwitynacji dojrzałych nieligandowanych kompleksów AhR kompleksów. Ponadto, białko podobne do immunofiliny XAP2 było w stanie częściowo chronić AhR przed ubikwitynacją za pośrednictwem CHIP in vitro. Ochrona ta wymagała bezpośredniej interakcji XAP2 z kompleksem AhR. Zaskakujące, Wyciszenie CHIP w komórkach Hepa-1c1c7 metodami siRNA nie ujawniło funkcji CHIP w kompleksie AhR, ponieważ nie wpłynęło to na dobrze scharakteryzowane aktywności AhR ani nie wpłynęło na jego poziomy białka w stanie stacjonarnym. Jednakże obecność potencjalnych mechanizmów kompensacyjnych może zakłócać tę szczególną obserwację. obserwację. Nasze wyniki sugerują model, w którym ligaza ubikwityny E3 CHIP współpracuje z innymi czynnikami ubikwitynacji w celu przebudowy natywnych kompleksów AhR-hsp90 i gdzie ko-chaperony takie jak XAP2 mogą wpływać na zdolność CHIP do ukierunkowania kompleksów AhR na ubikwitynację. --- Ligaza ubikwityny U-box E3 CHIP (koniec C białka oddziałującego z Hsc70) wiąże Hsp90 i/lub Hsp70 poprzez swoje powtórzenie tetratricopeptydowe (TPR), ułatwiając ubikwitynację białek klienckich związanych z chaperonem. Mechanizmy, które regulują aktywność CHIP są obecnie słabo poznane. Wcześniej donosiliśmy że białka Ca(2+)/S100 bezpośrednio wiążą się z białkami TPR, takimi jak białko organizujące Hsp70/Hsp90 (Hop), łańcuch lekki kinezyny, Tom70, FKBP52, CyP40, i fosfataza białkowa 5 (PP5), co prowadzi do dysocjacji oddziaływań białek TPR z ich białkami TPR. białek TPR z ich białkami docelowymi. Dlatego postawiliśmy hipotezę że białka Ca(2+)/S100 mogą oddziaływać z CHIP i regulować jego funkcję. TESTY GST wykazały, że Ca(2+)/S100A2 i S100P wiążą się z domeną TPR i prowadzą do interferencji z interakcjami CHIP z Hsp70, Hsp90, HSF1, i Smad1. Testy ubikwitynacji in vitro wykazały, że Ca(2+)/S100A2 i S100P są skutecznymi i specyficznymi inhibitorami ubikwitynacji Hsp70 za pośrednictwem CHIP, Hsp90, HSF1 i Smad1. Nadekspresja S100A2 i S100P tłumiła zależną od kompleksu CHIP-chaperon ubikwitynację i degradację zmutowanego p53 w komórkach Hep3B. komórkach Hep3B. Połączenie białek S100 z CHIP zapewnia zależny od Ca(2+) mechanizm regulacyjny dla ubikwitynacji i degradacji wewnątrzkomórkowych białek przez szlak CHIP-proteasom.
Która jest ligazą ubikwityny E3 Hsp90?
Karboksylowy koniec białka oddziałującego z hsc70 (CHIP) może pośredniczyć w ubikwitynacji białka szoku cieplnego 90 kDa (hsp90) in vitro, a następnie proteasomalnej degradacji chaperonu.