Polimeraza RNA (Pol) II katalizuje zależną od DNA syntezę RNA podczas transkrypcji genów. transkrypcji genów. Istnieją jednak dowody na to, że Pol II posiada również aktywność polimerazę RNA zależną od RNA (RdRP). Pol II może wykorzystywać homopolimeryczną matrycę RNA RNA, może wydłużyć RNA o kilka nukleotydów przy braku DNA i jest jest zaangażowana w replikację genomów RNA wirusa zapalenia wątroby typu delta (HDV) i wiroidów roślinnych. Tutaj pokazujemy wewnętrzną aktywność RdRP Pol II z tylko czystej polimerazy, rusztowania szablonu-produktu RNA i trifosforanów nukleozydów (NTP). trifosforanów nukleozydów (NTP). Krystalografia ujawnia dupleks szablonu-produktu w miejscu zajmowanym przez hybrydę zajmowanym przez hybrydę DNA-RNA podczas transkrypcji. Aktywność RdRP znajduje się w miejscu aktywnym wykorzystywanym podczas transkrypcji, ale jest wolniejsza i mniej wolniejsza i mniej procesywna niż aktywność zależna od DNA. Aktywność RdRP jest również uzyskiwana z częścią antygenomu antygenomu HDV. Kompleks czynnika transkrypcyjnego IIS (TFIIS) z Pol II może rozszczepić jedną nić HDV, utworzyć reaktywną pętlę macierzystą w miejscu hybrydowym, i przedłużyć nowy koniec 3' RNA. Krótkie pętle macierzyste RNA z przedłużeniem 5' wystarczają do aktywności do aktywności, ale ich wzrost do krytycznej długości najwyraźniej upośledza procesywność. Aktywność RdRP Pol II stanowi brakujące ogniwo w ewolucji molekularnej, ponieważ sugeruje ewolucji molekularnej, ponieważ sugeruje, że Pol II wyewoluowała ze starożytnej replikazy która powielała genomy RNA. --- Chimeryczne białka łączące metylotransferazę histonową MLL z różnymi partnerami fuzji wywołują charakterystyczne białaczki limfoidalne i szpikowe. Tutaj immunopurifikowaliśmy białka związane z ENL, białkiem powszechnie łączonym z MLL. Identyfikacja tych białek związanych z ENL (EAP) za pomocą spektrometrii masowej ujawniła enzymy o znanej roli w wydłużaniu transkrypcji (polimeraza RNA II C-końcowa domena kinazy [RNAPolII CTD], dodatni czynnik wydłużania transkrypcji czynnik b [pTEFb]) oraz w modyfikacji chromatyny (metylotransferaza histonu H3 DOT1L), jak również innych częstych partnerów MLL (AF4, AF5q31 i LAF4), oraz członków grupy polycomb (RING1, CBX8 i BCoR). Skład EAP został dalej weryfikowany przez koimmunoprecypitację, analizę 2-hybrydową, pull-down i eksperymenty kolokalizacyjne. eksperymenty kolokalizacji. Oczyszczony EAP wykazywał aktywność metylazy specyficznej dla lizyny 79 histonu H3 aktywność metylazy, wykazywał silną funkcję kinazy CTD RNAPolII i przeciwdziałał efektowi inhibitora pTEFb 5,6-dichloro-benzimidazol-rybozydu. In vivo, ENL knock-down zmniejszył w całym genomie, jak również dimetylację H3K79 specyficzną dla genu, zmniejszoną globalną elongację run-on i hamował przejściową transkrypcyjną aktywność reporterową. Zgodnie z według danych struktura-funkcja, rekrutacja DOT1L była ważna dla transformacji przez pochodną fuzji MLL-ENL. Wyniki te sugerują funkcję ENL w modyfikacji histonów i wydłużaniu transkrypcji. --- Polimeraza RNA II (Pol II) jest dobrze scharakteryzowaną polimerazą RNA zależną od DNA, która została również opisana jako polimeraza RNA zależna od RNA (RdRP) aktywność. Naturalne komórkowe substraty RNA Pol II ssaków nie zostały jednak zidentyfikowane, a komórkowa funkcja nie zostały zidentyfikowane, a funkcja komórkowa aktywności Pol II RdRP jest nieznana. Odkryliśmy, że Pol II może wykorzystywać niekodujący RNA, B2 RNA, zarówno jako substrat zarówno jako substrat, jak i matrycę dla swojej aktywności RdRP. Pol II wydłuża B2 RNA o 18 nt na jego 3'-końcu w wewnętrznie szablonowanej reakcji. Produkt RNA powstający z wydłużenia B2 RNA przez Pol II RdRP może zostać usunięty z Pol II przez czynnik obecny w ekstraktach jądrowych. czynnik obecny w ekstraktach jądrowych. Traktowanie komórek α-amanityną lub aktynomycyną D ujawniło, że wydłużenie B2 RNA przez Pol II destabilizuje RNA. Nasze badania dostarczają przekonujących dowodów na to, że Pol II ssaków działa jako RdRP w celu kontrolować stabilność komórkowego RNA poprzez wydłużanie jego 3'-końca.
Czy RNAPolII może funkcjonować jako zależna od RNA polimeraza RNA?
Polimeraza RNA II (Pol II) jest dobrze scharakteryzowaną polimerazą RNA zależną od DNA, która wykazuje również aktywność polimerazy RNA zależnej od RNA (RdRP). Pol II może wykorzystywać homopolimeryczną matrycę RNA, może wydłużać RNA o kilka nukleotydów przy braku DNA i jest zaangażowana w replikację genomów RNA wirusa zapalenia wątroby typu delta (HDV) i wiroidów roślinnych. Aktywność RdRP Pol II stanowi brakujące ogniwo w ewolucji molekularnej, ponieważ sugeruje, że Pol II wyewoluowała ze starożytnej replikazy, która powielała genomy RNA.