TŁO: Bezkomórkowe DNA płodu (cffDNA) można wykryć we krwi matki podczas ciąży, otwierając możliwość wczesnej nieinwazyjnej diagnostyki prenatalnej nieinwazyjnej diagnostyki prenatalnej różnych chorób genetycznych. Od 1997 roku przeprowadzono wiele badań zbadano dokładność prenatalnego określania płci płodu przy użyciu cffDNA, szczególnie w przypadku ciąż zagrożonych chorobą sprzężoną z chromosomem X. Tutaj przedstawiamy przegląd i metaanalizę opublikowanej literatury w celu oceny wykorzystania cffDNA do prenatalnego określania (diagnozowania) płci płodu. Zastosowaliśmy czułe przeszukiwanie wielu bibliograficznych baz danych, w tym PubMed (MEDLINE), EMBASE, biblioteka Cochrane i Web of Science. WYNIKI: Dziewięćdziesiąt badań, obejmujących 9 965 ciąż i 10 587 wyników płci płodu, spełniło nasze kryteria włączenia. spełniło nasze kryteria włączenia. Ogólna średnia czułość wyniosła 96,6% (95% wiarygodny przedział 95,2% do 97,7%), a średnia swoistość wyniosła 98,9% (95% CI = 98,1% do 99,4%). Wyniki te różnią się bardzo nieznacznie w zależności od trymestru lub tygodnia badania, wskazując, że wydajność testu jest niezawodnie wysoka. WNIOSKI: Na podstawie tego przeglądu i metaanalizy stwierdzamy, że płeć płodu może być określona z wysokim poziomem dokładności poprzez analizę cffDNA. Wykorzystanie cffDNA w diagnostyce prenatalnej w celu zastąpienia lub uzupełnienia istniejących metod inwazyjnych może wyeliminować lub zmniejszyć ryzyko poronienia. Przyszłe prace powinny koncentrować się na ekonomicznych i etycznych rozważaniach nad wdrożeniem wczesnego, nieinwazyjnego nieinwazyjnego testu na płeć płodu. --- TŁO: Analiza bezkomórkowego DNA płodu (cff) w osoczu matki jest stosowana rutynowo do nieinwazyjnej diagnostyki prenatalnej (NIPD) determinacji płci płodu, statusu D płodu i niektórych zaburzeń pojedynczego genu. Prawdziwie pozytywne wyniki zależą od na wykryciu analizowanego celu płodowego. Brak amplifikacji celu może być interpretowany jako wynik prawdziwie ujemny lub fałszywie ujemny z powodu braku lub bardzo niskiego poziomu cffDNA. Hipermetylowany promotor RASSF1A został zgłoszony jako uniwersalny marker płodowy potwierdzający obecność cffDNA. cffDNA. Przy użyciu wrażliwych na metylację enzymów restrykcyjnych hipometylowane sekwencje sekwencje matczyne są trawione, pozostawiając hipermetylowane sekwencje płodowe wykrywalne. Całkowite trawienie sekwencji matczynych jest wymagane w celu wyeliminowania fałszywie dodatnich wyników. METODY: cfDNA zostało wyekstrahowane z osocza matki (n = 90) i strawione za pomocą enzymami restrykcyjnymi wrażliwymi i niewrażliwymi na metylację. Analizę RASSF1A, SRY i DYS14 przeprowadzono metodą PCR w czasie rzeczywistym. WYNIKI: Hipermetylowany RASSF1A amplifikowano w 79 próbkach (88%), co wskazuje na obecność cffDNA. obecność cffDNA. Wyniki PCR w czasie rzeczywistym SRY i płeć płodu przy porodzie były w 100% dokładne. w 100% dokładne. Jedenaście próbek (12%) nie miało wykrywalnego hipermetylowanego RASSF1A a 10 z nich (91%) miało wiek ciążowy poniżej 7 tygodni i 2 dni. Sześć tych próbek było płci męskiej w momencie porodu, pięć miało niejednoznaczne wyniki analizy SRY a jedna próbka nie miała amplifikacji SRY. WNIOSEK: Zastosowanie tego testu do wykrywania hipermetylowanego RASSF1A jako uniwersalnego markera płodowego uniwersalnego markera płodowego może potencjalnie poprawić wiarygodność diagnostyczną NIPD do określania płci płodu i zaburzeń pojedynczego genu. --- TŁO: Wykrywanie bezkomórkowego płodowego DNA (cffDNA) w osoczu matki dało początek nowym nieinwazyjnym metodom wczesnej diagnostyki prenatalnej. wczesnej diagnostyki prenatalnej. Oceniliśmy wykonalność i dokładność nieinwazyjnego określania płci płodu płodu przy użyciu ilościowej reakcji łańcuchowej fluorescencji i polimerazy (QF-PCR) krążącego cffDNA w osoczu matki w pierwszym trymestrze ciąży. METODY: Próbki osocza pobrano prospektywnie z 202 ciąż pojedynczych od 4 do 13 tygodnia ciąży. Płeć płodu określono metodą QF-PCR z genami determinującymi płeć Y (SRY) i amelogeniną X/Y (AMELX/Y). Wynik wynik został potwierdzony przez kariotypowanie płodu lub fenotyp po urodzeniu. WYNIKI: Spośród 202 ciąż, 162 miały dostępne wyniki ciąży i mogły być być uwzględnione w naszej ocenie. Dokładność AMELX/Y, SRY i połączonego AMELX/Y+SRY w celu określenia płci płodu wyniosły odpowiednio 83,3%, 82,1% i 97,5%, odpowiednio, w porównaniu z podejściem inwazyjnym i płodem płodu po urodzeniu (82 mężczyzn i 80 kobiet). Połączona analiza AMELX/Y+SRY miała najwyższą czułość (98,8%) w określaniu płci płodu przy swoistości na poziomie 96,3%. Co więcej, wykrywanie płci płodu za pomocą połączonej analizy AMELX/Y+SRY w 11-13 tygodniu ciąży było w 100% prawidłowe. WNIOSEK: Określenie płci płodu można dokładnie określić na podstawie cffDNA matki w pierwszym trymestrze ciąży przy użyciu analizy QF-PCR połączonych AMELX/Y+SRY. --- Analiza wolnego od komórek płodowego DNA (cffDNA) w osoczu matki zapewnia możliwość niezawodnej, terminowej, bezpiecznej i opłacalnej diagnostyki zaburzeń pojedynczego genu. zaburzeń genowych. Wykrywanie niektórych loci płodowych przy użyciu cffDNA i cffDNA i konwencjonalnych metod analizy molekularnej jest możliwe od 4 tygodnia ciąży. Do tej pory nieinwazyjna analiza w pierwszym trymestrze ciąży pod kątem zaburzeń pojedynczego genu była była ograniczona przez czułość i swoistość testu, ze względu na tło matczynego DNA. Przewidywana zdolność do wzbogacania płodowego składnika DNA wolnego od komórek DNA zwiększy odporność testów i pozwoli na analizę półilościową, poszerzając zakres testów o zaburzenia recesywne, takie jak mukowiscydoza. mukowiscydoza. Testowanie mutacji na dużą skalę może pozostać ograniczone przez rozdrobniony charakter cffDNA, a podczas testowania na bardzo wczesnym etapie ciąży konieczne będzie dokładne badanie ultrasonograficzne będzie potrzebne do określenia liczby woreczków ciążowych, ze względu na ryzyko niezgodnych ciąż bliźniaczych. --- TŁO: Nieinwazyjne badania prenatalne bezkomórkowego DNA płodu (cffDNA) w osoczu matki w osoczu matki może przewidzieć typ RhD płodu u kobiet w ciąży D-ujemnych. W Danii, rutynowe przedporodowe badania przesiewowe w kierunku płodowego genu RhD (RHD) kierują przedporodowej profilaktyki anty-D tylko kobietom, które noszą płód RhD-dodatni. RhD dodatni płód. Profilaktyka zmniejsza ryzyko immunizacji, która może prowadzić do choroby hemolitycznej płodu i noworodka. Wiarygodność przewidywania typu RhD płodu zależy od czynników przedanalitycznych i czułości testu. My oceniliśmy konfigurację testowania w regionie stołecznym Danii, w oparciu o dane z rutynowych przedporodowych badań przesiewowych w kierunku RHD. METODY: Próbki krwi pobrano w wieku ciążowym 25 tygodni. DNA wyekstrahowane z 1 ml osocza analizowano pod kątem RHD płodu przy użyciu metody dupleksowej dla eksonu 7/10. Zbadaliśmy wpływ czasu transportu próbki krwi (n = 110) i temperatury otoczenia (n = 1539) na poziomy cffDNA i całkowitego DNA. DNA. Porównaliśmy dwie różne metody kwantyfikacji, metodę delta Ct i uniwersalną krzywą standardową. uniwersalną krzywą standardową. Porównano pipetowanie PCR w dwóch systemach (n = 104). WYNIKI: Na poziom cffDNA nie miał wpływu transport próbki krwi przez okres do 9 dni i temperatura otoczenia na zewnątrz. do 9 dni i temperatury otoczenia na zewnątrz w zakresie od -10 °C do 28 °C podczas transportu. Uniwersalna krzywa standardowa miała zastosowanie do kwantyfikacji cffDNA kwantyfikacji. Identyczne poziomy cffDNA zaobserwowano przy użyciu dwóch zautomatyzowanych systemów pipetowania PCR. systemów pipetowania PCR. Wykryliśmy średnio 100 kopii płodowego DNA/ml przy medianie wieku ciążowym wynoszącym 25 tygodni (zakres 10-39, n = 1317). WNIOSEK: Konfiguracja nieinwazyjnych testów prenatalnych opartych na PCR w czasie rzeczywistym dla cffDNA w regionie stołecznym Danii jest bardzo solidna. Nasze ustalenia dotyczące transportu próbek krwi wykazują wysoką stabilność cffDNA. Zastosowanie uniwersalnej krzywej standardowej ułatwia kwantyfikację cffDNA. kwantyfikację cffDNA. --- Niedawna premiera nowych, nieinwazyjnych testów prenatalnych na aneuploidię płodu z wykorzystaniem bezkomórkowego DNA płodu (cffDNA) zostało okrzyknięte rewolucją w badaniach prenatalnych prenatalnych i wywołało znaczne zainteresowanie komercyjne w tej dziedzinie. Trwające badania badania zapowiadają pojawienie się szerokiej gamy testów cffDNA. Nie jest jednak jeszcze nie jest jeszcze jasne, w jaki sposób testy te zostaną zintegrowane z ugruntowanymi strategiami badań prenatalnych w USA. prenatalnych w USA, ponieważ czas takich testów i stopień, w jakim nowe nieinwazyjne testy w jakim nowe nieinwazyjne testy uzupełnią lub zastąpią istniejące badania przesiewowe i narzędzia diagnostyczne. narzędzia diagnostyczne pozostają niepewne. Twierdzimy, że istnieje pilna potrzeba, aby decydentów, organów regulacyjnych i stowarzyszeń zawodowych, aby zapewnić wytyczne dotyczące najbardziej efektywny i etyczny sposób wprowadzenia takich testów do praktyki klinicznej w USA. do praktyki klinicznej w USA. --- NIFTY (nieinwazyjny test na trisomię płodu) to nieinwazyjny test prenatalny, który jest służy do diagnozowania trisomii płodu. Test opiera się na analizie wolnego od komórek DNA płodu (cffDNA) obecnego w osoczu i surowicy kobiety ciężarnej. NIFTY pozwala wykryć trisomię chromosomów 13, 18, 21, X i Y u płodu, a także monosomię chromosomu X. monosomię X. Nieprawidłowe wyniki NIFTY nadal wymagają weryfikacji przy użyciu innych technik diagnostycznych. technik diagnostycznych. Jednakże czułość NIFTY dla trisomii 21, 18 i 13 szacuje się odpowiednio na 99%, 97% i 79% z fałszywie dodatnim wskaźnikiem dla wszystkich badanych trisomii i monosomii X < 1%. NIFTY jest obecnie dostępny w Polsce jako usługa komercyjna, wykorzystywana jako dobry test przesiewowy w kierunku powszechnych trisomii (oprócz trisomii (oprócz badań ultrasonograficznych i biochemicznych) w przypadku lęku pacjentki oraz w sytuacji, gdy pacjentka nie wyraża zgody na inwazyjne badania inwazyjne badania prenatalne. Czułość i swoistość testu NIFTY będzie najprawdopodobniej w miarę rozwoju metod laboratoryjnych i po przebadaniu wystarczająco dużej grupy ciężarnych pacjentek. ciężarnych pacjentek. Dlatego też test ten może wkrótce stać się podstawowym narzędziem diagnostycznym dla powszechnych trisomii, pozwalając uniknąć inwazyjnych badań prenatalnych w tym wskazaniu. badań prenatalnych w tym wskazaniu. Z dużym prawdopodobieństwem cffDNA uzyskane z surowicy z surowicy kobiet w ciąży będzie również z czasem wykorzystywane w diagnostyce strukturalnych aberracji chromosomowych płodu i innych zmian genetycznych. Celem naszego badania jest przedstawienie nowej metody diagnostycznej. --- TŁO: Przekładanie nowych technologii genomicznych z laboratorium na łóżko pacjenta wymaga kompleksowego uwzględnienia perspektyw wszystkich interesariuszy którzy mogą wpływać lub być pod wpływem przebiegu translacji. Nieinwazyjne prenatalne testy aneuploidii, które wykorzystują bezkomórkowe płodowe DNA (cffDNA) krążące we krwi matki jest jednym z przykładów innowacyjnej technologii, która obiecuje znaczące korzyści dla zamierzonych użytkowników końcowych; jednak obecnie nie jest pewne, czy osiągnie powszechne wdrożenie kliniczne. kliniczną. Przeprowadziliśmy wywiady jakościowe z 18 różnymi interesariuszami w tej dziedzinie, w tym potencjalnymi użytkownikami technologii i personelem medycznym, badaczami i twórcami personel medyczny, badacze i programiści oraz eksperci w zakresie społecznych, prawnych i prawnych i regulacyjnych aspektów technologii genetycznej, a także pilotażową ankietę wśród 62 położników. położniczych. Analiza danych z wywiadów i ankiet została połączona z Przegląd przebiegu całodniowej, multidyscyplinarnej konferencji na temat temat oraz opublikowaną literaturą naukową i etyczną dotyczącą tej i innych i inne istotne technologie. DYSKUSJA: Skonstruowaliśmy potencjalne ścieżki wdrażania technologii, zidentyfikowaliśmy szerokie klasy interesariuszy uczestniczących w tych procesach translacyjnych oraz przeprowadziliśmy wstępną ocenę punktów widzenia i wzajemnych powiązań między tych zróżnicowanych interesariuszy. Niektórzy z interesariuszy, których priorytety są których priorytety są krytyczne do zrozumienia i włączenia do tłumaczenia i ich rodziny; świadczeniodawcy opieki zdrowotnej; naukowcy, ich instytucje lub firmy i agencje finansujące, które je wspierają; organy regulacyjne i sądowe organy regulacyjne i sądowe; płatnicy zewnętrzni; stowarzyszenia zawodowe; systemy edukacyjne; społeczności zajmujące się prawami osób niepełnosprawnych oraz inni przedstawiciele społeczeństwa obywatelskiego. Wywiady z zainteresowanymi stronami, wyniki ankiet i postępowania konferencyjne dodają złożoność tych przewidywanych ścieżek, a także wykazują nadrzędną potrzebę włączenia iteracyjnej analizy interesariuszy na wczesnym etapie i przez cały czas trwania analizę interesariuszy. Wierzymy, że opracowane przez nas ramy translacji pomogą ukierunkować kluczowe przyszłe mapowanie i zaangażowanie interesariuszy działaniami w zakresie testowania aneuploidii cffDNA i informować o nowych metodach oceny technologii oceny technologii dla innych osiągnięć w rozwijającej się dziedzinie medycyny genomowej. PODSUMOWANIE: Mapowanie potencjalnych ścieżek wdrożenia i badanie postaw i wzajemnych powiązań różnych interesariuszy może prowadzić do skuteczniejszego tłumaczenia nowej metody prenatalnego testowania aneuploidii.
Czy cffDNA może być używane do nieinwazyjnych testów?
Tak, bezkomórkowe DNA płodu (cffDNA) umożliwiło przeprowadzenie nieinwazyjnych badań prenatalnych.