CELE: Zbadanie, czy warianty genetyczne bogatego w histydynę białka wiążącego wapń (HRC) są związane z idiopatyczną kardiomiopatią rozstrzeniową (DCM) i jej progresją. (DCM) i jej postępem. METODY I WYNIKI: Przebadaliśmy 123 pacjentów z idiopatyczną DCM i 96 osób zdrowych osoby przez analizę polimorfizmu konformacji pojedynczej nici i bezpośrednie sekwencjonowanie sekwencjonowanie pod kątem wariantów genetycznych w HRC. Wykryto sześć polimorfizmów: Leu35Leu (A/G), Ser43Asn (G/A), Ser96Ala (T/G), Glu202_Glu203insGlu (-/GAG), Asp261del (GAT/-) i insercja 51 aminokwasów w ramce w His321. Analiza analiza ich częstotliwości nie wykazała żadnej istotnej korelacji z rozwojem DCM. rozwojem DCM. Jednak polimorfizm Ser96Ala wykazywał statystycznie istotną korelację z występowaniem DCM. statystycznie istotną korelację z występowaniem zagrażających życiu arytmii komorowych. arytmii komorowych. W okresie obserwacji wynoszącym 4,02 +/- 2,4 roku ryzyko wystąpienia komorowych zaburzeń rytmu arytmii komorowych było wyższe (HR, 9,620; 95% CI, 2,183-42,394; P = 0,003) u pacjentów z grupy Ala/Ala w porównaniu z pacjentami homozygotycznymi Ser/Ser. W analizie regresji Coxa, polimorfizm Ser96Ala był jedynym istotnym genetycznym predyktorem arytmogenezy. genetycznym predyktorem arytmogenezy u pacjentów z DCM (HR, 4,191; 95% CI, 0.838-20.967; P = 0.018). WNIOSEK: Wariant genetyczny Ser96Ala HRC jest związany z zagrażającymi życiu komorowymi zaburzeniami rytmu serca w idiopatycznej DCM i może służyć jako niezależnym predyktorem podatności na arytmogenezę w DCM. DCM. --- Mutacja Ser96Ala (S96A) w obrębie bogatego w histydynę białka wiążącego Ca(2+) (HRC) została ostatnio powiązana z zaburzeniami rytmu serca u pacjentów z idiopatyczną kardiomiopatią rozstrzeniową. u pacjentów z kardiomiopatią rozstrzeniową, co potencjalnie można przypisać wzrostowi spontanicznego uwalniania uwalniania Ca(2+). Jednak mechanizm molekularny łączący mutację S96A HRC ze zwiększonym uwalnianiem Ca(2+) pozostaje niejasny. Poprzednie odkrycia naszej grupy wskazują, że te spontaniczne zdarzenia uwalniania Ca(2+) mogą mogą być powiązane z uwalnianiem Ca(2+) indukowanym przeciążeniem magazynu (SOICR) za pośrednictwem serca receptor ryanodynowy (RyR2). Dlatego w niniejszym badaniu staraliśmy się określić, czy ekspresja HRC typu dzikiego (HRC WT) i mutanta S96A (HRC S96A) ma bezpośredni wpływ na SOICR. Wykorzystując zarówno cytozolowe, jak i wewnątrzkomórkowe zapasy Ca(2+) w ludzkich embrionalnych komórkach nerkowych wyrażających RyR2, stwierdziliśmy, że HRC WT znacząco hamował skłonność do SOICR poprzez buforowanie wolnego magazynu Ca(2+) i hamowanie wychwytu Ca(2+) z magazynu. W przeciwieństwie do tego, HRC S96A wykazywał znacznie stłumiony hamujący wpływ na SOICR, który przypisano upośledzona zdolność do buforowania magazynowania Ca (2+) i zmniejszania wychwytu Ca (2+). W Oprócz upośledzenia zdolności HRC do regulowania masowego przechowywania Ca (2+), a test ligacji zbliżeniowej wykazał, że mutacja S96A zaburza również mikrodom Ca(2+) wokół RyR2, ponieważ zmienia zależną od Ca(2+) asocjację RyR2 i HRC. RyR2 i HRC. Co ważne, w przeciwieństwie do poprzednich doniesień, brak brak triadyny w naszym modelu eksperymentalnym ilustruje, że mutacja S96A w HRC może zmieniać skłonność do SOICR bez interakcji z triadyną. Podsumowując, nasze wyniki pokazują, że ludzka mutacja HRC S96A prowadzi do wzrostu spontanicznego uwalniania Ca(2+) i ostatecznie arytmii poprzez zaburzając regulację wewnątrzmagazynowego wolnego Ca(2+). Wynika to przede wszystkim z upośledzonej zdolności do działania jako skuteczny bufor Ca(2+) w masie i lokalnym mikrodomenie Ca(2+). --- TŁO: Ludzki wariant genetyczny (Ser96Ala) w siateczce sarkoplazmatycznej (SR) bogatym w histydynę białku wiążącym Ca(2+) (HRC) został powiązany z komorową arytmią i nagłą śmiercią w kardiomiopatii rozstrzeniowej. arytmią komorową i nagłą śmiercią w kardiomiopatii rozstrzeniowej. Jednakże, dokładne mechanizmy wpływające na funkcję SR i prowadzące do arytmii pozostają nieuchwytne. METODY I WYNIKI: Wygenerowaliśmy transgeniczne myszy z ekspresją specyficzną dla serca ekspresją ludzkiego Ala96 HRC lub Ser96 HRC w zerowym tle, aby ocenić funkcji przy braku endogennego białka. Ala96 HRC zmniejszyła (25% do 30%) kurczliwość kardiomiocytów i kinetykę Ca2+ w porównaniu z Ser96 HRC przy braku przy braku jakichkolwiek nieprawidłowości strukturalnych lub histologicznych. Ponadto częstotliwość fal Ca2+ była znacznie wyższa (10-krotnie), chociaż obciążenie SR Ca2+ było zmniejszone (o 27%) w komórkach Ala96 HRC. Podstawowe mechanizmy obejmowały zmniejszona interakcja Ala96 HRC z triadyną, wpływająca na stabilność receptora ryanodyny (RyR). Rzeczywiście, prawdopodobieństwo otwarcia RyR, oceniane za pomocą wiązania wiązania ryanodyny, było znacząco zwiększone. Odpowiednio, warunki stresowe (5 Hz plus izoproterenol) indukowały skurcze następcze (65% w Ala96 w porównaniu z 12% w Ser96) i opóźnione afterdepolaryzacje (70% w Ala96 w porównaniu do 20% w Ser96). Zwiększonemu zwiększonemu wyciekowi SR Ca2+ towarzyszyła hiperfosforylacja (1,6-krotna) RyR w Ser2814 przez kinazę białkową II zależną od kalmoduliny. Odpowiednio, włączenie inhibitora kinazy białkowej II zależnej od kalmoduliny KN93 zapobiegało fosforylacji Ser2814 fosforylacji i częściowo odwróciło wzrost częstotliwości iskier Ca2+ i produkcji fal. produkcji fal. Równoległe badania in vivo ujawniły ektopię komorową na krótkotrwałej prowokacji izoproterenolem i zwiększoną (4-krotnie) skłonność do arytmii, w tym nieutrwalonego częstoskurczu komorowego, po zawale mięśnia sercowego w Ala96 HR po zawale mięśnia sercowego u myszy Ala96 HRC. WNIOSKI: Odkrycia te sugerują, że nieprawidłowe uwalnianie SR Ca2+ i zwiększona podatność na opóźnione następcze depolaryzacje leżą u podstaw wyzwalanej arytmii u ludzkich nosicieli Ala96 HRC.
Czy wariant HRC Ser96Ala jest związany z nagłą śmiercią sercową u pacjentów z kardiomiopatią rozstrzeniową?
Ludzki wariant genetyczny (Ser96Ala) w bogatym w histydynę białku wiążącym Ca(2+) siateczki sarkoplazmatycznej (SR) (HRC) został powiązany z arytmią komorową i nagłą śmiercią w kardiomiopatii rozstrzeniowej. Wykazano, że polimorfizm Ser96Ala białka wiążącego wapń bogatego w histydynę (HRC) koreluje z arytmią komorową i nagłą śmiercią tylko u pacjentów z kardiomiopatią rozstrzeniową, ale nie u zdrowych nosicieli.