CEL: Przewidywanie płci płodu można osiągnąć za pomocą PCR ukierunkowanego na gen SRY poprzez analizę bezkomórkowego DNA płodu w surowicy matki. Niestety, wyniki wyniki wykazują brak czułości, szczególnie w pierwszym trymestrze ciąży. trymestrze ciąży. Dlatego określenie płci płodu za pomocą analizy surowicy matki nie może zastąpić analizy kariotypu po pobraniu próbki kosmówki. PACJENCI I METODY: Opracowano nową, wysoce czułą metodę PCR w czasie rzeczywistym w celu do wykrywania sekwencji genu SRY w surowicy matki. Analizę przeprowadzono na 121 ciężarnych kobiet w pierwszym trymestrze ciąży (średni wiek ciążowy: 11,8 tygodnia). Wśród nich 61 miało co najmniej jedną wcześniejszą ciążę męską. Wyniki porównano z płcią płodu. WYNIKI: Analiza SRY PCR surowicy matki była całkowicie zgodna z płcią płodu. płcią płodu. Spośród 121 ciężarnych kobiet, 61 urodziło płód płci męskiej, a 60 płód płci żeńskiej. Nie zaobserwowano wyników fałszywie ujemnych. Ponadto nie zaobserwowano wyników fałszywie pozytywnych wyników, chociaż 27 kobiet nosiło płód płci żeńskiej podczas w obecnej ciąży, miało co najmniej jedną wcześniejszą ciążę męską. DYSKUSJA I WNIOSKI: Niniejsze badanie pokazuje, że wiarygodne, nieinwazyjne płci można osiągnąć za pomocą analizy PCR surowicy matki podczas pierwszego trymestru ciąży. pierwszego trymestru ciąży. To nieinwazyjne podejście do przewidywania płci płodu płodu powinno mieć ogromne znaczenie w leczeniu kobiet w ciąży nosicielek zaburzeń genetycznych sprzężonych z chromosomem X. Diagnostyka prenatalna jest zatem wykonywana tylko dla płodów płci męskiej, unikając procedur inwazyjnych i ryzyka utraty płodu dla płodów płci żeńskiej. --- W ostatnich latach identyfikacja komórek płodowych w krążeniu krwi matki spowodowała nową rewolucję w nieinwazyjnej metodzie diagnostyki prenatalnej. Niska liczba komórek płodowych we krwi matki i długotrwałe przeżycie po ciąży ograniczały wykorzystanie komórek płodowych w zastosowaniach diagnostycznych i klinicznych. Wraz z odkryciem płodowego DNA (cffDNA) w osoczu kobiet w ciąży, dostęp do materiału genetycznego płodu stał się łatwiejszy. materiału genetycznego płodu stał się możliwy do określenia wczesnej płci płodu w ciążach zagrożonych ciążą. płodu w ciążach zagrożonych chorobami genetycznymi sprzężonymi z chromosomem X, zamiast stosowania metod inwazyjnych. Dlatego w tym badaniu prawdopodobieństwo wykrycia sekwencji sekwencji na chromosomie Y u kobiet w ciąży w celu określenia płci płodu. płci płodów. Próbki krwi obwodowej uzyskano od 80 kobiet w ciąży kobiet w 6(th) do 10(th) tygodniu ciąży, a następnie wyekstrahowano DNA płodu z osocza. z osocza. Zastosowano zagnieżdżony PCR w celu wykrycia sekwencji pojedynczej kopii genu SRY oraz wielokrotnych kopii genów DYS14 i DAZ na chromosomie Y płodów płci męskiej. płodów płci męskiej. Na koniec wszystkie uzyskane wyniki porównano z rzeczywistą płcią noworodków. płcią noworodków. U 40 z 42 urodzonych chłopców zidentyfikowano odpowiednie sekwencje genów. zidentyfikowano odpowiednie sekwencje genów i uzyskano czułość 95,2%. Nieinwazyjne wczesne określenie płci płodu przy użyciu cffDNA może być zastosowane jako test wstępny w możliwie najkrótszym czasie i przy w najkrótszym możliwym czasie i z wysoką niezawodnością, aby uniknąć stosowania metod inwazyjnych w przypadkach, gdy płód jest zagrożony chorobami genetycznymi. --- CEL: Pary z ryzykiem przeniesienia chorób sprzężonych z chromosomem X w centrum preimplantacyjnej diagnostyki genetycznej (PGD) preimplantacyjnej diagnostyki genetycznej (PGD) potrzebują wczesnego i szybkiego określenia płci płodu płodu podczas ciąży w dwóch sytuacjach. Pierwsza sytuacja odpowiada kontroli seksowania zarodków po PGD, a druga dotyczy par w programie PGD, które par w programie PGD mających spontaniczną ciążę. Określenie płci płodu płodu można osiągnąć poprzez kariotypowanie przy użyciu procedur inwazyjnych, takich jak pobieranie kosmówki kosmówki (CVS), amniopunkcja lub kordocenteza, a także za pomocą nieinwazyjnych procedur, takich jak ultrasonografia (USG). procedury, takie jak badanie ultrasonograficzne (USG). CVS jest najwcześniejszą inwazyjną procedurą do określania płci płodu i analizy molekularnej zaburzeń genetycznych sprzężonych z chromosomem X w pierwszym trymestrze ciąży. w pierwszym trymestrze ciąży, ale wiąże się z ryzykiem utraty płodu. utraty płodu. USG pozwala na wiarygodne określenie płci płodu dopiero w drugim trymestrze ciąży. trymestrze. Niedawno przeprowadzono wiarygodne nieinwazyjne określenie płci płodu za pomocą amplifikacji genu SRY w surowicy matki. PACJENCI I METODY: Zgłaszamy prospektywne zastosowanie oznaczania płci płodu w surowicy matki w naszym ośrodku PGD. Zarządzanie ciążami zostało przeprowadzone przy użyciu tej nieinwazyjnej procedury w czterech przypadkach kontroli płci zarodków i dziewięciu przypadkach spontanicznych ciąż u par objętych programem PGD dla chorób sprzężonych z chromosomem X. WYNIKI: Wyniki płci płodu przy użyciu amplifikacji genu SRY w surowicy matki były w całkowitej zgodności z płcią płodu obserwowaną w analizie cytogenetycznej lub badaniu USG. badania cytogenetycznego lub USG, a także po urodzeniu. DYSKUSJA I WNIOSKI: Ta nowa strategia pozwoliła na szybkie określenie płci w pierwszym trymestrze ciąży i pozwoliła uniknąć wykonywania procedur inwazyjnych w dziewięciu ciążach. --- Pobieranie próbek kosmówki (CVS) lub amniopunkcja w celu określenia płci płodu jest zazwyczaj zazwyczaj pierwszym krokiem w diagnostyce prenatalnej zaburzeń genetycznych sprzężonych z chromosomem X takich jak dystrofia mięśniowa Duchenne'a (DMD). Jednakże, nieinwazyjne techniki diagnostyki prenatalnej techniki diagnostyki prenatalnej (NIPD), takie jak pomiar bezkomórkowego DNA płodu (cffDNA) w osoczu matki są preferowane, biorąc pod uwagę wskaźnik poronień związanych z procedurą CVS. Określiliśmy płeć płodu w pierwszym trymestrze ciąży przy użyciu ilościowej w czasie rzeczywistym (PCR) cffDNA u ciężarnych nosicielek DMD. DMD. Płeć płodu została potwierdzona za pomocą analizy kariotypu amniopunkcji i multipleksową amplifikację sond zależną od ligacji (MLPA) w 16 tygodniu. Ta Procedura ta może pozwolić uniknąć niepotrzebnego CVS lub amniopunkcji płodów płci żeńskiej. --- Przewidywanie płci płodu można osiągnąć za pomocą PCR ukierunkowanego na gen SRY poprzez analizę bezkomórkowego DNA płodu w surowicy matki. Niestety, wyniki wykazują brak czułości, szczególnie w pierwszym trymestrze ciąży. trymestrze ciąży. Dlatego określenie płci płodu za pomocą analizy surowicy matki nie może zastąpić analizy kariotypu po pobraniu próbki kosmówki. kosmówki. Opracowano nową, wysoce czułą metodę PCR w czasie rzeczywistym do wykrywania sekwencji genu SRY w surowicy matki. Analizę przeprowadzono na 121 ciężarnych kobietach w pierwszym trymestrze ciąży (średni wiek ciążowy: 11,8 tygodnia). Wśród nich 51 miało co najmniej jedną wcześniejszą ciążę męską. Wyniki zostały porównano z płcią płodu. Analiza SRY PCR surowicy matki była całkowicie zgodność z płcią płodu. Spośród 121 ciężarnych kobiet, 61 nosiło płód męski, a 60 płód żeński. płód płci męskiej, a 60 płód płci żeńskiej. Nie zaobserwowano wyników fałszywie ujemnych. Ponadto nie wystąpiły wyniki fałszywie dodatnie, mimo że 27 kobiet noszących płód płód płci żeńskiej podczas obecnej ciąży miało co najmniej jedną wcześniejszą ciążę męską. ciążę. Badanie to pokazuje, że wiarygodne, nieinwazyjne określenie płci można osiągnąć poprzez analizę PCR surowicy matki podczas pierwszego trymestru ciąży. trymestrze ciąży. To nieinwazyjne podejście do przewidywania płci płodu płodu powinno mieć ogromne znaczenie w leczeniu kobiet w ciąży, które są nosicielkami zaburzeń genetycznych sprzężonych z chromosomem X. Diagnostyka prenatalna może być zatem płodów płci męskiej, unikając procedur inwazyjnych i ryzyka utraty płodów płci żeńskiej. utraty płodów płci żeńskiej. --- TŁO: Wykrywanie bezkomórkowego płodowego DNA (cffDNA) w osoczu matki dało początek nowym nieinwazyjnym metodom wczesnej diagnostyki prenatalnej. wczesnej diagnostyki prenatalnej. Oceniliśmy wykonalność i dokładność nieinwazyjnego określania płci płodu płodu przy użyciu ilościowej reakcji łańcuchowej fluorescencji i polimerazy (QF-PCR) krążącego cffDNA w osoczu matki w pierwszym trymestrze ciąży. METODY: Próbki osocza pobrano prospektywnie z 202 ciąż pojedynczych od 4 do 13 tygodnia ciąży. Płeć płodu określono metodą QF-PCR z genami determinującymi płeć Y (SRY) i amelogeniną X/Y (AMELX/Y). Wynik wynik został potwierdzony przez kariotypowanie płodu lub fenotyp po urodzeniu. WYNIKI: Spośród 202 ciąż, 162 miały dostępne wyniki ciąży i mogły być być uwzględnione w naszej ocenie. Dokładność AMELX/Y, SRY i połączonego AMELX/Y+SRY w celu określenia płci płodu wyniosły odpowiednio 83,3%, 82,1% i 97,5%, odpowiednio, w porównaniu z podejściem inwazyjnym i płodem płodu po urodzeniu (82 mężczyzn i 80 kobiet). Połączona analiza AMELX/Y+SRY miała najwyższą czułość (98,8%) w określaniu płci płodu przy swoistości na poziomie 96,3%. Co więcej, wykrywanie płci płodu za pomocą połączonej analizy AMELX/Y+SRY w 11-13 tygodniu ciąży było w 100% prawidłowe. WNIOSEK: Określenie płci płodu można dokładnie określić na podstawie cffDNA matki w pierwszym trymestrze ciąży przy użyciu analizy QF-PCR połączonych AMELX/Y+SRY.
Na jakim etapie ciąży nieinwazyjne badanie cffDNA pozwala na określenie płci płodu?
Wykorzystując cffDNA z krwi matki, płeć płodu można określić już w 6-10 tygodniu ciąży (w pierwszym trymestrze ciąży).