Fuzja genu EWS z FLI1 wytwarza fuzję onkoproteiny, która napędza program ekspresji genów nieprawidłowy program ekspresji genów odpowiedzialny za rozwój mięsaka Ewinga mięsaka Ewinga. Wykorzystaliśmy homogeniczny test bliskości do badania związków, które które zakłócają wiązanie EWS-FLI1 z jego celami DNA. Szereg chemoterapeutycznych wiążących się z DNA, które niespecyficznie zakłócają wiązanie białka z DNA. wiązanie białka z DNA. W przeciwieństwie do tego stwierdzono, że aktynomycyna D preferencyjnie zaburza wiązanie EWS-FLI1 w porównaniu do wiązania p53 z ich odpowiednimi celami DNA in vitro. W testach komórkowych niskie stężenia aktynomycyna D preferencyjnie blokowała wiązanie EWS-FLI1 z chromatyną i zakłócały ekspresję genów, w której pośredniczy EWS-FLI1. Wyższe stężenia aktynomycyny D globalnie hamowały transkrypcję. Wyniki te pokazują, że aktynomycyna D preferencyjnie zakłóca wiązanie EWS-FLI1 z DNA w wybranych stężeniach. stężeniach. Chociaż okno między tym preferencyjnym efektem a globalną a globalną supresją jest zbyt wąskie, aby wykorzystać je w sposób terapeutyczny, wyniki te sugerują, że preferencje zasadowe można wykorzystać do znalezienia związków wiążących DNA które preferencyjnie zakłócają podklasy czynników transkrypcyjnych. --- Mięsak Ewinga jest drugim najczęstszym nowotworem złośliwym kości u dzieci i młodych dorosłych. dorosłych. Jest on napędzany przez onkogenne białka fuzyjne (tj. EWS/FLI1) działające jako nieprawidłowe czynniki transkrypcyjne, które regulują w górę i w dół geny docelowe, prowadząc do transformacji komórkowej. Tak więc, identyfikacja tych genów docelowych i zrozumienie ich wkładu w proces nowotworzenia mięsaka Ewinga są kluczowe dla rozwoju nowych strategii terapeutycznych. W tym badaniu wykazaliśmy, że oksydaza lizylowa oksydaza lizylowa (LOX), enzym zaangażowany w utrzymanie integralności strukturalnej macierzy zewnątrzkomórkowej macierzy zewnątrzkomórkowej, jest regulowany w dół przez onkoproteinę EWS/FLI1 i w konsekwencji nie ulega ekspresji w nowotworach Ewinga. w konsekwencji nie ulega ekspresji w komórkach mięsaka Ewinga i guzach pierwotnych. Używając system indukowany doksycykliną w celu przywrócenia ekspresji LOX w linii komórkowej pochodzącej z mięsaka Ewinga wykazaliśmy, że LOX wykazuje aktywność supresora nowotworu. Co ciekawe, wykazaliśmy, że aktywność supresorowa guza znajduje się w domenie propeptydowej domenie propeptydowej LOX (LOX-PP), N-końcowej domenie wytwarzanej przez proteolityczne rozszczepienie podczas fizjologicznego przetwarzania LOX. Ekspresja LOX-PP zmniejszała proliferację komórek, migrację komórek, wzrost niezależny od zakotwiczenia w miękkim agarze i powstawanie guzów u myszy z niedoborem odporności. Dla kontrastu, domena C-końcowa domena LOX, która zawiera aktywność enzymatyczną, miała przeciwne skutki, potwierdzając przeciwne skutki, potwierdzając, że aktywność supresorowa nowotworu LOX jest pośredniczy wyłącznie jego domena propeptydowa. Wreszcie wykazaliśmy, że LOX-PP hamuje szlak sygnałowy ERK/MAPK i że wiele szlaków zaangażowanych w progresję cyklu komórkowego cyklu komórkowego były znacząco deregulowane przez LOX-PP, zapewniając mechanistyczne wyjaśnienie zahamowania proliferacji komórek obserwowanego po ekspresji ekspresji LOX-PP. Podsumowując, nasze obserwacje wskazują, że deregulacja genu genu LOX uczestniczy w rozwoju mięsaka Ewinga i identyfikuje LOX-PP jako jako nowy cel terapeutyczny dla jednego z najbardziej agresywnych nowotworów złośliwych u dzieci. Odkrycia te sugerują, że strategie terapeutyczne oparte na podawaniu propeptydu propeptydu LOX lub funkcjonalnych analogów mogą być przydatne w leczeniu tego wyniszczającego nowotworu dziecięcego. tego wyniszczającego nowotworu dziecięcego. --- Mięsaki stanowią mniej niż 10% wszystkich nowotworów złośliwych u ludzi. wywodzą się z jeszcze słabo zdefiniowanych mezenchymalnych komórek progenitorowych. Stanowią one stanowią jedne z najbardziej agresywnych nowotworów u dorosłych i dzieci, ponieważ mają wysoką skłonność do przerzutów i są zazwyczaj oporne na konwencjonalną chemio- i radioterapię. chemio- i radioterapię. Mięsak Ewinga jest członkiem rodziny mięsaków Ewinga (ESFT) Ewinga (ESFT) i drugim najczęstszym nowotworem złośliwym kości i tkanek miękkich u dzieci i młodych dorosłych. u dzieci i młodych dorosłych. W 85% przypadków jest związany z mutacją translokacją chromosomalną t(11;22)(q24:q12), która generuje fuzję segmentu 5' genu EWS z segmentem 3' genu FLI-1 z rodziny ETS. Powstały w ten sposób Uważa się, że powstałe białko fuzyjne EWS-FLI-1 zachowuje się jak nieprawidłowy aktywator aktywator transkrypcyjny, który przyczynia się do rozwoju ESFT poprzez zmianę ekspresję genów docelowych w permisywnym środowisku komórkowym. Chociaż ESFT są jednymi z najlepiej zbadanych mięsaków, mechanizmy zaangażowane w w transformację indukowaną przez EWS-FLI-1 wymagają dalszego wyjaśnienia, a pierwotne komórki komórki, z których pochodzą ESFT, muszą zostać zidentyfikowane. Niniejszy przegląd podkreślimy niektóre z najnowszych odkryć w dziedzinie biologii i pochodzenia mięsaka Ewinga. mięsaka Ewinga. --- Mięsaki Ewinga charakteryzują się nawracającymi translokacjami chromosomalnymi. wyrażających białka fuzyjne EWS-ETS, z których najczęstszym jest EWS-FLI.(1-5) EWS-FLI jest onkogennym czynnikiem transkrypcyjnym, który reguluje geny zaangażowane w nowotworzenie. (6,7) Ponieważ komórka mięsaka Ewinga pozostaje nieznana, opracowano różnorodne systemy modelowe do badania fuzji EWS-FLI,(8-14) oraz wiele eksperymentów mikromacierzy opisujących potencjalne geny docelowe EWS-FLI. (8,10,11,13,15-21) Każdy model ma potencjalne zalety i wady. wady, ale nie zgłoszono ich porównania na dużą skalę. Poniżej przedstawiamy metaanalizę genów, które są dysregulowane przez EWS-FLI w mięsaku Ewinga. mięsaka Ewinga. Ogólnie rzecz biorąc, modele wzmocnienia i utraty funkcji EWS-FLI w ludzkich typach komórek były dobrze skorelowane z próbkami guza pochodzącymi od pacjentów pacjentów, podczas gdy modele mysie nie. Korzystając z analizy częstotliwości dysregulowanych genów w wielu systemach modelowych, zidentyfikowaliśmy konserwatywny "rdzeń" EWS-FLI sygnaturę transkrypcyjną. Sygnatura ta zawierała wiele genów, o których wiadomo, że zaangażowanych w fenotyp nowotworowy mięsaka Ewinga, a także zawierała geny, które nie zostały wcześniej zgłoszone. Porównania między sygnaturą EWS-FLI i opublikowanymi danymi dotyczącymi mezenchymalnych komórek macierzystych potwierdzają niedawne że mezenchymalne komórki macierzyste są prawdopodobnie komórkami prekursorowymi mięsaka Ewinga(15). (15) Wyniki te pokazują użyteczność stosowania analizy porównawczej do walidacji systemów modelowych i podkreślają unikalny potencjał tego podejścia do zidentyfikować zarówno sygnatury komórek onkogennych, jak i komórek tła. --- Mięsak Ewinga to złośliwy nowotwór kości występujący u dzieci i młodych dorosłych. dorosłych. Większość przypadków mięsaka Ewinga wykazuje ekspresję białka fuzyjnego EWS/FLI. EWS/FLI funkcjonuje jako nieprawidłowy czynnik transkrypcyjny typu ETS i służy jako główny regulator mięsaka Ewinga. głównego regulatora fenotypu transformowanego mięsaka Ewinga. Niedawno wykazaliśmy że EWS/FLI reguluje jeden ze swoich kluczowych celów, NR0B1, poprzez mikrosatelitę GGAA-mikrosatelitę w jego promotorze. Czy inne krytyczne cele EWS/FLI są są również regulowane przez mikrosatelity GGAA. W tym badaniu połączyliśmy analizę transkrypcyjną, dane dotyczące lokalizacji całego genomu i interferencję RNA knockdown, aby zidentyfikować S-transferazę glutationową M4 (GSTM4) jako krytyczny gen docelowy EWS/FLI w mięsaku Ewinga. Odkryliśmy, że EWS/FLI bezpośrednio wiąże promotor GSTM4 i reguluje ekspresję GSTM4 poprzez mikrosatelitę GGAA w jego promotorze. promotorze. Obniżenie poziomu GSTM4 spowodowało utratę transformacji onkogennej. Ponadto, redukcja GSTM4 skutkowała zwiększoną wrażliwością komórek mięsaka Ewinga na chemioterapię. mięsaka Ewinga na środki chemioterapeutyczne, co sugeruje rolę tego białka w oporności na leki. oporności na leki. Zgodnie z tą hipotezą, pacjenci z mięsakiem Ewinga których guzy miały wyższy poziom ekspresji GSTM4, mieli gorsze wyniki niż te z niższymi poziomami ekspresji. Dane te pokazują, że GSTM4 przyczynia się do mięsaka Ewinga i definiują szerszą rolę dla mikrosatelitów GGAA. GGAA-mikrosatelitów w funkcji EWS/FLI niż wcześniej doceniano. Dane te sugerują również nowy mechanizm oporności terapeutycznej, w którym centralna onkogenna nieprawidłowość bezpośrednio reguluje gen oporności. --- Mięsak Ewinga, złośliwy nowotwór kości u dzieci i młodych dorosłych, jest należy do rodziny małych guzów niebieskokomórkowych. Nowotwory z rodziny mięsaków Ewinga (ESFT), które obejmują obwodowe prymitywne guzy neuroektodermalne (PNET), charakteryzują się translokacjami chromosomalnymi. charakteryzują się translokacjami chromosomalnymi, które generują fuzje między genem EWS i czynnikami transkrypcyjnymi z rodziny ETS, najczęściej FLI1. Onkoproteina fuzyjna EWS-FLI1 stanowi atrakcyjny cel terapeutyczny w leczeniu mięsaka Ewinga. mięsaka Ewinga. Komórka pochodzenia ESFT i mechanizmy molekularne, za pomocą których w których EWS-FLI1 pośredniczy w nowotworzeniu, pozostają nieznane, a kilka zwierzęcych modeli mięsaka Ewinga. Tutaj opisujemy wykorzystanie danio pręgowanego jako kręgowca modelu funkcji EWS-FLI1 i nowotworzenia. Mozaikowa ekspresja ludzkiego białka fuzyjnego białka fuzyjnego EWS-FLI1 u danio pręgowanego powodowała rozwój guzów o o histologii silnie przypominającej ludzki mięsak Ewinga. Częstość występowania nowotworów wzrosła na zmutowanym tle p53, co sugeruje, że szlak p53 hamuje nowotworzenie wywołane przez EWS-FLI1. Profilowanie ekspresji genów zebrafish zdefiniowało zestaw genów, które mogą być regulowane przez EWS-FLI1, w tym zebrafish ortolog kluczowego genu docelowego EWS-FLI1 u ludzi. Stabilne linie transgeniczne danio pręgowanego wyrażające EWS-FLI1 pod kontrolą promotora szoku cieplnego szoku cieplnego wykazują zmieniony rozwój embrionalny i wadliwe konwergencję i wydłużenie, co sugeruje, że EWS-FLI1 oddziałuje z zachowanymi szlakami rozwojowymi. Wyniki te wskazują, że funkcjonalne cele EWS-FLI1, które pośredniczą w nowotworzeniu, są zachowane od danio pręgowanego do człowieka i zapewniają nowy kontekst do badania funkcji tego fuzyjnego onkogenu. --- Mięsak Ewinga to złośliwy nowotwór kości, który występuje głównie u dzieci i młodzieży. młodzieży. Osiemdziesiąt pięć procent mięsaków Ewinga charakteryzuje się obecnością obecność nieprawidłowego chimerycznego genu fuzyjnego EWS/FLI1. Wcześniej wykazaliśmy, że interakcja między EWS/FLI1 i EWS typu dzikiego prowadzi do zahamowania aktywności EWS i dysfunkcji mitotycznej. Chociaż wadliwa mitoza jest uważana za krytyczny etap w inicjacji raka, nie wiadomo, w jaki sposób ingerencja w EWS przyczynia się do powstawania mięsaka Ewinga. Tutaj wykazać, że komórki EWS/FLI1- i EWS-knockdown wykazują wysoką częstość występowania defekty w strefie środkowej, strukturze linii środkowej znajdującej się między segregującymi chromatydami podczas anafazy. Defekty w strefie środkowej mogą prowadzić do niepowodzenia cytokinezy i mogą skutkować indukcją aneuploidii. Podobieństwo między fenotypów komórek HeLa transfekowanych EWS/FLI1- i EWS siRNA wskazuje na zahamowanie EWS jako kluczowego mechanizmu indukcji defektów strefy środkowej. Potwierdzając tę obserwację, ektopowa ekspresja EWS ratuje wysoką częstość występowania wad strefy środkowej obserwowanych w komórkach mięsaka Ewinga A673. Odkryliśmy że EWS oddziałuje z kinazą Aurora B i że EWS jest również wymagana do rekrutacji Aurory B do strefy środkowej. Analiza domeny ujawniła, że R565 w domenie domenie RGG3 EWS jest niezbędna zarówno dla interakcji Aurora B, jak i dla rekrutacji Aurory B do strefy środkowej. Tutaj proponujemy, że upośledzenie zależnego od EWS tworzenia strefy środkowej poprzez rekrutację Aurory B jest potencjalnym mechanizmem mechanizm rozwoju mięsaka Ewinga. --- W rodzinie nowotworów Ewinga występują translokacje chromosomalne, które łączą N-końcowy region genu EWS z C-końcowym regionem kilku czynników transkrypcyjnych z rodziny ETS, głównie czynników transkrypcyjnych z rodziny ETS, głównie FLI1, w wyniku czego powstają chimeryczne czynniki transkrypcyjne, które odgrywają kluczową rolę w patogenezie guzów Ewinga. Ewinga. Aby zidentyfikować dalsze cele białka fuzyjnego EWS / FLI1, my utworzyliśmy komórki 293 wyrażające konstytutywnie chimeryczne białka EWS/FLI1 lub FLI1 typu dzikiego i wykorzystaliśmy tablice cDNA do identyfikacji genów różnie regulowanych przez EWS/FLI1. regulowanych przez EWS/FLI1. DAX1 (NR0B1), niezwykły sierocy receptor jądrowy zaangażowany w rozwój gonad, determinację płci i steroidogenezę, wykazał konsekwentną regulację w górę przez onkoproteinę EWS/FLI1, ale nie przez dziki typ FLI1. Specyficzna indukcja DAX1 przez EWS/FLI1 została potwierdzona w dwóch niezależnych systemach komórkowych systemach z indukowalną ekspresją EWS/FLI1. Przeanalizowaliśmy również ekspresję DAX1 w guzach Ewinga i pochodnych liniach komórkowych, a także w innych niepowiązanych małych guzach okrągłokomórkowych. DAX1 ulegał ekspresji we wszystkich próbkach guza Ewinga analizowanych oraz w siedmiu z ośmiu linii komórkowych guza Ewinga, ale nie w żadnym neuroblastoma lub zarodkowym mięsaku prążkowanokomórkowym. Ponadto, wyciszenie EWS/FLI1 przez interferencję RNA w linii komórkowej guza Ewinga znacznie zmniejszyło poziomy DAX1, potwierdzając, że regulacja DAX1 w górę jest zależna od ekspresji EWS/FLI1. ekspresji EWS/FLI1. Wysoki poziom DAX1 stwierdzony w guzach Ewinga i jego silna aktywność represora transkrypcji sugerują, że onkogenny efekt EWS/FLI1 może być pośredniczony, przynajmniej częściowo, przez regulację w górę ekspresji DAX1 ekspresji. --- Mięsaki Ewinga (Ewing sarcoma family tumors, ESFT) to wysoce agresywne i dające przerzuty nowotwory guzy spowodowane fuzją chromosomalną pomiędzy białkiem mięsaka Ewinga (EWS) z czynnikiem transkrypcyjnym FLI-1. Jednak ekspresja chimerycznego onkogenu EWS/FLI-1 jest niewystarczająca do karcynogenezy, co sugeruje, że wymagane są dodatkowe zdarzenia. że wymagane są dodatkowe zdarzenia. Tutaj przedstawiamy identyfikację substratu Akt PRAS40 jako genu docelowego EWS. EWS negatywnie reguluje ekspresję PRAS40 poprzez wiązanie nieulegającego translacji regionu 3' w mRNA PRAS40. Proliferacja komórek ESFT Proliferacja komórek ESFT była hamowana przez leczenie inhibitorem Akt, a proliferacja i przerzuty komórek ESFT a proliferacja komórek ESFT i wzrost przerzutów były hamowane przez PRAS40 knockdown. Co więcej, nokaut PRAS40 był wystarczający do odwrócenia zwiększonej proliferacji komórek. proliferacji komórek wywołanej przez knockdown EWS. Na poparcie patologicznej roli dla podwyższenia PRAS40 w EFST, udokumentowaliśmy odwrotne poziomy białka EWS i PRAS40 w komórkach ESFT. Łącznie nasze odkrycia sugerują, że PRAS40 promuje rozwój rozwój ESFT i dlatego może stanowić nowy cel terapeutyczny w tej agresywnej chorobie. terapeutyczny w tej agresywnej chorobie. --- EWS-FLI1 to onkogenne białko fuzyjne zaangażowane w rozwój guzów z rodziny mięsaków Ewinga (Ewing's Ewinga (ESFT). Wykorzystując nasz wcześniej opisany związek wiodący 2 (YK-4-279), zaprojektowaliśmy i zsyntetyzowaliśmy skoncentrowaną bibliotekę analogów. Funkcjonalne hamowanie Funkcjonalne hamowanie analogów mierzono za pomocą testu lucyferazy reporterowej EWS-FLI1/NR0B1 test lucyferazy reporterowej EWS-FLI1/NR0B1 oraz badanie przesiewowe sparowanych komórek mierzące wpływ na hamowanie wzrostu ludzkich komórek zawierających EWS-FLI1 (TC32 i TC71) oraz kontrolnych linii komórkowych PANC1 pozbawionych onkoproteiny. Nasze dane ujawniły, że podstawienie grup donorowych elektronów w pozycji para na pierścieniu fenylowym było najbardziej korzystne dla hamowania EWS-FLI1 przez analogi 2. Związek 9u (z podstawieniem dimetyloaminowym) był najbardziej aktywnym inhibitorem z GI50 = 0,26 ± 0,1 μM. Ponadto, korelacja hamowania wzrostu (komórki TC32 z ekspresją EWS-FLI1 TC32) i aktywności reporterowej lucyferazy (R(2) = 0,84). Wreszcie, zaprojektowaliśmy i zsyntetyzowaliśmy biotynylowany analog i określiliśmy powinowactwo wiązania dla rekombinowanego EWS-FLI1 (Kd = 4,8 ± 2,6 μM). --- Mięsak Ewinga (Ewing sarcoma family of tumors, ESFT) to grupa agresywnych nowotworów pediatrycznych agresywnych nowotworów dziecięcych napędzanych przez białko fuzyjne EWS-FLI1, nieprawidłowy czynnik transkrypcyjny czynnik transkrypcyjny regulujący w górę określone geny docelowe, takie jak neuropeptyd Y (NPY) i jego receptory receptory Y1 i Y5 (Y5R). Wcześniej wykazaliśmy, że zarówno egzogenny NPY jak i endogenny NPY stymulują śmierć komórek ESFT poprzez receptory Y1 i Y5. Tutaj wykazać, że efektowi temu zapobiegają peptydazy dipeptydylowe (DPP), które rozszczepiają NPY do jego krótszej formy, NPY(3-36), nieaktywnej w Y1R. Wykazaliśmy że śmierć komórek indukowana przez NPY może zostać zniesiona przez nadekspresję DPP i wzmocnione przez ich regulację w dół. Zarówno leczenie NPY, jak i blokada DPP aktywowały ten sam szlak śmierci komórkowej, w którym pośredniczy polimeraza poli(ADP-rybozy) (PARP-1) i czynnik indukujący apoptozę (AIF). Co więcej, spadek przeżywalności komórek indukowany przez hamowanie DPP był blokowany przez antagonistów Y1 i Y5R, potwierdzając jego zależność od endogennego NPY. Co ciekawe, podobne poziomy śmierci komórek wywołanej przez NPY osiągnięto poprzez blokowanie błonowego DPPIV i cytozolowych DPP8 i DPP9. Jest to zatem pierwszy dowód na to, że te wewnątrzkomórkowe DPP rozszczepiają uwalniane peptydy, takie jak peptydy, takie jak NPY, w żywych komórkach. W przeciwieństwie do tego, inna membranowa DPP, białko aktywacji fibroblastów (FAP), nie wpływało na działanie NPY. Podsumowując, DPP działają jako czynniki przeżycia dla komórek ESFT i chronią je przed śmiercią komórkową indukowaną przez endogenny NPY. Jest to pierwsza demonstracja, że wewnątrzkomórkowe DPP są zaangażowane w regulację wzrostu ESFT i mogą stać się potencjalnymi celami terapeutycznymi dla tych nowotworów. celami terapeutycznymi dla tych nowotworów. --- Nasze zrozumienie rozwoju mięsaka Ewinga, w którym pośredniczy białko fuzyjne EWS/FLI było ograniczone przez brak wiedzy na temat komórki nowotworowej pochodzenia. Aby to obejść, przeanalizowaliśmy funkcję EWS/FLI w samym mięsaku Ewinga. mięsaka Ewinga. Łącząc interferencję RNA za pośrednictwem retrowirusów z badaniami wykazaliśmy, że trwająca ekspresja EWS/FLI jest wymagana dla fenotypu nowotworowego mięsaka Ewinga. fenotypu nowotworowego mięsaka Ewinga. Wykorzystaliśmy ten system do zdefiniowania pełnego zestawu genów regulowanych przez EWS/FLI w mięsaku Ewinga. Analiza funkcjonalna funkcjonalna ujawniła, że NKX2.2 jest genem regulowanym przez EWS/FLI, który jest niezbędny do onkogennej transformacji w tym nowotworze. W ten sposób opracowaliśmy wysoce zwalidowany profil transkrypcyjny dla białka fuzyjnego EWS/FLI i zidentyfikowaliśmy krytyczny gen docelowy gen docelowy w rozwoju mięsaka Ewinga. --- Mięsak Ewinga to agresywny nowotwór kości i tkanek miękkich u dzieci, w którym w którym pacjenci, których guzy mają słabą odpowiedź histologiczną na początkową chemioterapię chemioterapię mają złe rokowanie ogólne. Dlatego ważne jest, aby zidentyfikować cząsteczki zaangażowane w oporność na chemioterapię. Tutaj pokazujemy, że białko naprawy DNA i kofaktor transkrypcyjny, EYA3, ulega wysokiej ekspresji w próbkach guza mięsaka Ewinga i liniach komórkowych w porównaniu z mezenchymalnymi komórkami macierzystymi, domniemanymi komórkami mezenchymalnymi komórkami macierzystymi, przypuszczalną komórką pochodzenia mięsaka Ewinga, i że jest regulowany przez fuzję czynnik transkrypcyjny białka fuzyjnego EWS/FLI1. Ponadto wykazaliśmy, że EWS/FLI1 pośredniczy w regulacji EYA3 poprzez represję miR-708, miRNA ukierunkowanego na 3'-nietranslowany region EYA3, a nie przez wiązanie promotora EYA3 bezpośrednio. Co ważne, pokazujemy, że wysokie poziomy EYA3 znacząco korelują z niskimi poziomami miR-708 w próbkach mięsaka Ewinga, co sugeruje, że ten mechanizm regulacji EYA3 za pośrednictwem miR ma zastosowanie w ludzkich nowotworach. Ponieważ białka EYA są ważne dla przeżycia komórek podczas rozwoju, zbadaliśmy i pokazujemy, że utrata EYA3 zmniejsza przeżywalność komórek mięsaka Ewinga. Co najważniejsze co najważniejsze, knockdown EYA3 w komórkach mięsaka Ewinga prowadzi do uwrażliwienia na chemioterapeutyki uszkadzające DNA stosowane w leczeniu mięsaka Ewinga, i jak oczekiwano, że po leczeniu chemioterapeutycznym komórki EYA3 knockdown naprawiają DNA mniej skutecznie niż ich odpowiedniki kontrolne. Badania te identyfikują EYA3 jako nowy mediator chemiooporności w mięsaku Ewinga i określają molekularne mechanizmy zarówno molekularne mechanizmy zarówno nadekspresji EYA3, jak i chemooporności, w której pośredniczy EYA3. chemooporności. --- Mięsak Ewinga / pierwotne guzy neuroektodermalne (EWS/PNET) charakteryzują się specyficzne translokacje chromosomalne, najczęściej generujące chimeryczny gen EWS/FLI-1 gen. W zależności od liczby zestawionych ze sobą eksonów, opisano kilka typów fuzji o różnej częstości występowania. opisano kilka typów fuzji, różniących się częstością występowania i rokowaniem. Aby ocenić wpływ wpływ każdego typu fuzji na specyficzne cechy fenotypowe, nowotworowe i przerzutowe EWS/PLI-1. przerzutowe EWS/PNET, opracowaliśmy podatny system wykorzystujący mysi mezenchymalny multipotencjalny mezenchymalnej multipotencjalnej linii komórkowej C3H10T1/2. Po transdukcji EWS/FLI-1, komórki uzyskały dramatyczne zmiany morfologiczne in vitro, w tym mniejszy rozmiar i "neurytopodobne" wydłużenia błony. Chimeryczne białka fuzyjne nadawały onkogenne właściwości in vitro, w tym wzrost niezależny od zakotwiczenia i zwiększoną szybkość proliferacji. zwiększoną szybkość proliferacji. Ponadto, ekspresja EWS/FLI-1 blokowała mineralizację, z jednoczesną represją genów osteoblastycznych i indukowała dramatyczną represję programu różnicowania adipocytów. Ponadto, EWS/FLI-1 promował nieprawidłowy fenotyp neuronalny poprzez ekspresję de novo specyficznych genów neuronalnych. specyficznych genów neuronalnych. Domięśniowe wstrzyknięcie transdukowanych komórek prowadziło do rozwoju guza i indukcji jawnych zmian osteolitycznych. Analogicznie do co zaobserwowano w ludzkich guzach, komórki EWS/FLI-1 typu 2 tworzyły guzy pierwotne u myszy z niedoborem odporności z wyższą częstością występowania i niższą latencją niż komórki niosące fuzje typu 1 i 3. Natomiast komórki wyrażające fuzje typu 2 i 3 wykazywały specyficzną aktywność przerzutową z większą liczbą makroskopowych przerzutów w tkankach miękkich i zmian osteolitycznych w kończynach w porównaniu z komórkami komórek z ekspresją typu 1. Dlatego też struktura każdej onkoproteiny silnie wpływała na jego nowotworowość i przerzutogenność. W ten sposób model ten zapewnia podstawę do zrozumienia uwarunkowań genetycznych związanych z rozwojem i aktywnością przerzutową guza Ewinga. rozwój i aktywność przerzutową oraz reprezentuje system komórkowy do analizy innych onkoprotein zaangażowanych w ludzką sarkomagenezę. --- Guz Ewinga jest drugim najczęstszym pierwotnym nowotworem kości. Jest związany w 85% przypadków ze specyficzną i powtarzającą się translokacją chromosomową t(11; 22)(q24; q12), która generuje gen fuzyjny między 5' częścią EWS i 3' częścią FLI-1. 5' częścią EWS i 3' częścią FLI-1, członka rodziny ETS. Rzadziej rzadziej ta fuzja genów obejmuje EWS i innego członka rodziny ETS. którymi mogą być: ERG, ETV1, E1AF lub FEV w zależności od przypadków. Fuzja EWS-ETS jest przyczyną rozwoju guza Ewinga. Jej mechanizm działania polega głównie na nieprawidłowej regulacji transkrypcji kluczowych genów docelowych, które które są zaangażowane w regulację cyklu komórkowego, transdukcję sygnału i migrację. Kontekst komórkowy, w którym EWS-FLI-1 wywiera swoje działanie onkogenne, jest od dawna przedmiotem dyskusji. od dawna przedmiotem dyskusji. Ostatnie dane sugerują, że pochodzenie komórek Ewinga jest mezenchymalną komórką macierzystą.
Które białko fuzyjne bierze udział w rozwoju mięsaka Ewinga?
Mięsak Ewinga jest drugim najczęstszym nowotworem złośliwym kości u dzieci i młodych dorosłych. W prawie 95% przypadków jest on powodowany przez onkogenne białko fuzyjne EWS/FLI1, które działa jako nieprawidłowy czynnik transkrypcyjny, który reguluje w górę lub w dół geny docelowe, prowadząc do transformacji komórkowej.