Syntaza chityny, która tworzy pierwotną przegrodę podczas podziału komórek w pączkujących drożdżach jest ważnym celem terapeutycznym o nieznanym mechanizmie aktywacji. mechanizmem aktywacji. Wcześniej odkryliśmy, że domena C2 białka Saccharomyces cerevisiae Inn1 odgrywa istotną, ale niescharakteryzowaną rolę w miejscu rozszczepienia podczas podczas cytokinezy. Łącząc nowy degronowy allel INN1 z mutacją punktową w domenie C2, sprawdziliśmy mutacje w innych genach które tłumią powstały defekt w podziale komórek. W ten sposób zidentyfikowaliśmy 22 dominujące mutacje CHS2 (syntazy chityny II), które mapują się na dwa sąsiednie miejsca w domenie katalitycznej. miejsc w domenie katalitycznej. Chs2 w izolowanych błonach komórkowych jest zwykle prawie nieaktywna (chyba że stosuje się leczenie proteazą w celu ominięcia inhibicji); jednak dominujący allel supresorowy Chs2-V377I ma zwiększoną aktywność in in vitro. Pokazujemy, że Inn1 wiąże się z Chs2 w ekstraktach komórek drożdży. To również oddziałuje w teście dwuhybrydowym drożdży z N-końcowym 65% Chs2, który zawiera domenę katalityczną. Oprócz kompensacji mutacji w domenie C2 Inn1 C2-domenie, dominujące allele CHS2 tłumią defekty cytokinezy powstałe przez brak białka Cyk3. Nasze dane potwierdzają model, w którym domena C2 białka Inn1 działa w połączeniu z Cyk3 w celu regulacji domeny katalitycznej Chs2 podczas cytokinezy. Odkrycia te sugerują nowe podejścia do opracowywania przyszłych leków przeciwko ważnym patogenom grzybiczym. --- Cytokineza u drożdży może być osiągnięta poprzez ingresję błony plazmatycznej, która jest zależne od zwężenia pierścienia aktomiozyny. Inn1 przypuszczalnie łączy te procesy poprzez interakcję zarówno z błoną plazmatyczną, jak i tymczasowym składnikiem pierścienia aktomiozyny Ponadto, w cytokinezie istnieje niezależny od pierścienia aktomiozynowego szlak cytokinezy. cytokinezy istnieje u drożdży. Zidentyfikowaliśmy tutaj Cyk3, kluczowy składnik alternatywnego szlaku alternatywnego szlaku, jako nowego partnera interakcji Inn1. The bogata w karboksy-końcową prolinę część Inn1 wiąże domeny SH3 Cyk3 lub Hof1. Szczepy ze skróconymi białkami pozbawionymi jednej z tych domen SH3 nie wykazują żadnych poważnych fenotypów. nie wykazują żadnych poważnych fenotypów, ale są syntetycznie śmiertelne, demonstrując ich kluczową rolę w cytokinezie. Nadekspresja CYK3 prowadzi do niezależnej od pierścienia aktomiozyny niezależnej od pierścienia aktomiozyny rekrutacji Inn1 do szyjki pąka, dodatkowo wspierając znaczenie tej interakcji in vivo. Co więcej, nadekspresja CYK3 w komórkach myo1 lub delecji iqg1 nie tylko przywraca żywotność, ale także rekrutację Inn1 do szyjki pąka. Proponujemy, aby Cyk3 był częścią szlaku cytokinezy cytokinezy, który działa jako mechanizm ratunkowy do rekrutacji Inn1 do szyjki pąka. Inn1 do szyjki pąka. --- W Saccharomyces cerevisiae fosfataza Cdc14 odgrywa ugruntowaną rolę w odwracaniu zdarzeń fosforylacji na substratach mitotycznych. w odwracaniu zdarzeń fosforylacji na substratach mitotycznej kinazy zależnej od cykliny (M-Cdk1), promując w ten sposób wyjście mitotyczne i obniżenie aktywności M-Cdk1. Cdc14 lokalizuje się w miejscu rozszczepienia komórki po inaktywacji M-Cdk1, co sugeruje, że Cdc14 może pełnić kluczową, ale jeszcze źle zdefiniowaną rolę podczas cytokinezy. Tutaj zidentyfikowaliśmy Inn1, jako nowy bezpośredni substrat zarówno M-Cdk1, jak i Cdc14. Cdc14 kolokalizuje z Inn1 w miejscu podziału komórki miejscu podziału komórki i oddziałuje z C-końcową, bogatą w prolinę domeną Inn1 która pośredniczy w jego wiązaniu z białkami Hof1 i Cyk3 zawierającymi domenę SH3. Pokazujemy, że fosforylacja Inn1 przez Cdk1 częściowo zaburza interakcję Inn1 z Cyk3, zmniejszając w ten sposób poziom Cyk3 w miejscu podziału komórki. Proponujemy, aby Cdc14 przeciwdziałał fosforylacji Inn1 przez Cdk1, aby ułatwić tworzenie kompleksu Inn1-Cyk3, a tym samym promowanie cytokinezy.
Jaka jest rola Inn1 w cytokinezie?
Inn1 wiąże się z kurczliwym pierścieniem aktomiozyny pod koniec mitozy i jest potrzebny do cytokinezy. Inn1 ma domenę C2 na aminowym końcu białka, która jest wymagana do ingresji błony plazmatycznej podczas cytokinezy u pączkujących drożdży, podczas gdy pozostała część białka rekrutuje Inn1 do pierścienia aktomiozyny