Choroba meningokokowa serogrupy B (MenB) pozostaje poważnym problemem zdrowia publicznego. dla której nie jest dostępna szczepionka chroniąca przed szerokim zakresem izolatów MenB nie jest dostępna. Firma Novartis Vaccines opracowała szczepionkę do zapobiegania chorobie MenB, która zawiera cztery składniki antygenowe: białko wiążące czynnik H (fHbp), adhezynę neisseria A (NadA), antygen wiążący heparynę Neisseria antygen wiążący heparynę (NHBA) i pęcherzyki błony zewnętrznej z nowozelandzkiego szczepu epidemicznego (który dostarcza PorA). Szczepionka ta została przedłożona do przeglądu regulacyjnego w Europie. Europie, więc nadszedł czas, aby dokonać przeglądu projektu szczepionki, dotychczasowych wyników badań w badaniach klinicznych oraz potencjalne pokrycie szczepu przez szczepionkę. Jest to jest również omówienie kluczowych kwestii dla długoterminowego sukcesu szczepionki, które obejmują szczepionki, które obejmują pokrycie szczepu, potencjalną trwałość ochrony, potencjalny wpływ na przenoszenie szczepów MenB, potencjał mutacji ucieczkowych i efektywność kosztową. efektywność kosztową. --- Słaba immunogenność otoczki meningokoków serogrupy B (MenB) doprowadziła do do opracowania szczepionek ukierunkowanych na antygeny podotoczkowe, w szczególności na w szczególności immunodominującą i zróżnicowaną porinę błony zewnętrznej, PorA. Szczepionki te są w dużej mierze specyficzne dla szczepu; jednak oferują one ograniczoną ochronę przed różnorodnymi chorobami związanymi z MenB obserwowanymi w wielu krajach uprzemysłowionych. Aby poszerzyć zakres ochrony, szczepionka wieloskładnikowa (4CMenB) zawiera zawierający PorA pęcherzyk błony zewnętrznej (OMV) wraz ze stosunkowo rekombinowanymi składnikami białkowymi, w tym białkiem wiążącym czynnik H (fHbp), adhezynę A Neisseria (NadA) i antygen wiążący heparynę Neisseria (NHBA). Ekspresja PorA jest unikalna dla meningokoków (Neisseria meningitidis); jednak wiele antygenów podtorebkowych jest wspólnych z niepatogennymi niepatogennymi przedstawicielami rodzaju Neisseria, które również zamieszkują nosogardziel. Te Organizmy te mogą wywoływać odporność krzyżową przeciwko meningokokom i / lub zajmować niszę, która w przeciwnym razie mogłaby pomieścić patogeny. Potencjał 4CMenB do wpływania na takie gatunki (i odwrotnie) zbadano poprzez określenie rozkładu genetycznego pierwotnych antygenów 4CMenB wśród różnych członków wspólnego dziecięcego komensala, Neisseria lactamica. Wszystkie izolaty posiadały nhba, ale były pozbawione fhbp i nadA. Allele nhba były głównie różne, ale blisko spokrewnione z tymi obserwowanymi wśród reprezentatywnego panelu inwazyjnych izolatów MenB z tego samego szerokiego regionu geograficznego. regionu geograficznego. Dokonaliśmy podobnych ustaleń dla immunogennego antygenu typującego, FetA, który stanowi główną część 4CMenB OMV. Zatem odpowiedzi na szczepionkę 4CMenB mogą mogą wpływać na nosicielstwo komensalnych neisseriae w jamie nosowo-gardłowej. To podkreśla obszar dalszych badań i nadzoru w przypadku rutynowego wdrożenia szczepionki. rutynowo wdrażana. --- Adhezyna A Neisseria meningitidis (NadA) jest białkiem powierzchniowym meningokoków. Uważa się, że wspomaga ono adhezję bakterii do komórek gospodarza. Wcześniej wcześniej wykazaliśmy, że NadA promuje również internalizację bakterii w heterologicznym systemie ekspresji. heterologicznym systemie ekspresji. Tutaj użyliśmy rozpuszczalnego rekombinowanego NadA (rNadA) pozbawionego regionu kotwicy błonowej w celu scharakteryzowania jego drogi internalizacji w nabłonku Chang. w komórkach nabłonkowych Chang. Dodany do pożywki hodowlanej, rNadA internalizuje się poprzez zależny od PI3K proces endocytozy, w którym nie pośredniczy kanoniczna rusztowania klatryny lub kaweoliny, ale zamiast tego następuje recykling regulowany przez ARF6 opisanym wcześniej dla MHC-I. Wewnątrzkomórkowa pula rNadA osiąga poziom w stanie stacjonarnym w ciągu godziny od inkubacji i kolokalizuje się w pęcherzykach endocytarnych pęcherzykach endocytarnych z MHC-I i zewnątrzkomórkowo znakowanym chaperonem Hsp90. Leczenie przenikającymi przez błonę i nieprzepuszczalnymi inhibitorami Hsp90, odpowiednio 17-AAG i FITC-GA, prowadzi do wewnątrzkomórkowej akumulacji rNadA, silnie sugerując, że zewnątrzkomórkowa wydzielana pula chaperonu jest zaangażowana w wewnątrzkomórkowy transport rNadA. Znaczna liczba pęcherzyków wewnątrzkomórkowych zawierających rNadA rekrutuje Rab11, małą GTPazę związaną z recyklingiem endosomów, ale nie zawierają receptora transferyny (TfR). Co ciekawe, komórki leczenie inhibitorami Hsp90, w tym nieprzepuszczalnym dla błony FITC-GA, zniosło kolokalizację Rab11-rNadA, ale nie zakłóciło kolokalizacji Rab11-TfR kolokalizacją. Łącznie wyniki te są zgodne z modelem, w którym rNadA internalizuje się do ludzkich komórek nabłonkowych, porywając endosom recyklingu i powraca na powierzchnię komórki poprzez zależny od ARF6, związany z Rab11 i regulowany przez Hsp90 i mechanizm regulowany przez Hsp90. Niniejsze badanie dotyczy po raz pierwszy mechanizm endocytozy adhezyny meningokokowej i sugeruje możliwą ścieżkę wejścia zaangażowaną przez N. meningitidis w pierwotną infekcję ludzkich komórek nabłonkowych. komórek nabłonkowych. --- Neisseria adhesin A (NadA), zaangażowana w adhezję i inwazję Neisseria meningitidis do tkanek gospodarza, jest jednym z głównych składników Bexsero, nowej wieloskładnikowej szczepionki Bexsero, nowej wieloskładnikowej szczepionki licencjonowanej do ochrony przed meningokokami serogrupy B w Europie, Australii i Kanadzie. NadA został zidentyfikowany w około 30% izolatów klinicznych i w znacznie mniejszym odsetku izolatów nosicieli. izolatów nosicieli. Trzy warianty białka zostały pierwotnie zidentyfikowane w inwazyjnych meningokoków i nazwano je NadA-1, NadA-2 i NadA-3, podczas gdy większość izolatów nosicieli nie posiadała genu lub posiadała inny wariant, NadA-4. Dalsza analiza izolatów należących do kompleksu klonalnego typu sekwencji 213 (ST-213) NadA-5, który był strukturalnie podobny do NadA-4, ale bardziej odlegle NadA-1, -2 i -3. W chwili pisania tego tekstu ponad 89 różnych sekwencji alleli NadA opisano ponad 89 różnych sekwencji alleli NadA i 43 różne peptydy. Tutaj przedstawiamy zrewidowany system nomenklatury, biorąc pod uwagę kompletny zestaw danych, który jest zgodny z wcześniejszymi danymi. zestaw danych, który jest zgodny z poprzednimi schematami klasyfikacji i jest i jest rozszerzalny. Główne cechy tego nowego schematu obejmują (i) grupowanie wcześniej nazwanych peptydów wcześniej nazwanych wariantów NadA-2 i NadA-3 w jeden wariant NadA-2/3, (ii) zgrupowanie wcześniej przypisanych wariantów NadA-4 i NadA-5 w jeden wariant NadA-4/5, (iii) wprowadzenie dodatkowego wariantu (NadA-6), oraz (iv) klasyfikację wariantów na dwie główne grupy, nazwane grupami I i II. Aby ułatwić wyszukiwanie sekwencji i przesyłanie nowych sekwencji alleli sekwencje nukleotydów i aminokwasów są dostępne pod adresem http://pubmlst.org/neisseria/NadA/. --- W celu zbadania różnorodności molekularnej antygenów nowej rekombinowanej szczepionki przeciwko meningokokom serogrupy B, trzy geny kodujące dla głównych składników szczepionki GNA (Genome-derived Neisseria Antigen) 1870 (fHbp, białko wiążące czynnik H), GNA1994 (NadA, adhezyna A Neisseria) i GNA2132 zostały zsekwencjonowane w panelu 85 szczepów zebranych na całym świecie i wybranych jako reprezentatywne dla różnorodności serogrupy B meningokoków. Nie stwierdzono korelacji między zmiennością antygenów szczepionkowych a serogrupą, obszarem geograficznym i rokiem izolacji. i rokiem izolacji. Chociaż stwierdzono istotne grupowanie z kompleksami klonalnymi MLST klonalnych MLST, z których każdy wykazywał prawie specyficzny repertuar wariantów antygenów, przewidywanie przewidywanie asortymentu antygenów nie było możliwe na podstawie MLST tylko na podstawie MLST. Dlatego też klasyfikacja meningokoków wyłącznie na podstawie MLST jest nie jest wystarczająca do przewidywania różnorodności antygenów szczepionkowych. Sekwencjonowanie każdego genu w w różnych szczepach będzie ważne dla oceny zachowania antygenów i antygenów i asortymentu oraz umożliwienia przyszłego przewidywania potencjalnego pokrycia szczepionką. --- TŁO: Nowa wieloskładnikowa szczepionka przeciwko meningokokom, 4CMenB (Bexsero®), została zatwierdzona w Europie, Kanadzie, Australii i Stanach Zjednoczonych. została zatwierdzona w Europie, Kanadzie, Australii i Stanach Zjednoczonych. Potencjalny wpływ szczepionki 4CMenB na pokrycie szczepionką jest szacowany przy użyciu Meningococcal Antigen Meningococcal Antigen Typing System (MATS), testu ELISA, który mierzy ekspresję antygenu szczepionkowego i różnorodność w każdym szczepie. Tutaj przedstawiamy charakterystykę genetyczną i 4CMenB hiszpańskich szczepów inwazyjnych (zebranych podczas jednego roku epidemiologicznego) w porównaniu z innymi szczepami szczepionkowymi. epidemiologicznych) w porównaniu z innymi krajami europejskimi i omawiamy potencjalne przyczyny niższego oszacowania zasięgu w Hiszpanii. MATERIAŁ I METODY: Panel 300 szczepów, reprezentatywna próbka wszystkich szczepów Neisseria serogrupy B Neisseria meningitidis zgłoszonych w Hiszpanii w latach 2009-2010, został scharakteryzowany przez typowanie sekwencji multilocus (MLST) i zmienny region FetA FetA. Antygeny szczepionkowe 4CMenB, PorA, białko wiążące czynnik H (fHbp), Neisseria Heparin Binding Antigen (NHBA) i neisseriańska adhezyna A (NadA) były typowane molekularnie przez sekwencjonowanie molekularnie typowane przez sekwencjonowanie. Pokrycie PorA zostało przypisane do szczepu z VR2 = 4. Poziomy ekspresji i reaktywności krzyżowej fHbp, NHBA i NadA zostały analizowano przy użyciu testu MATS ELISA. WYNIKI: Globalne szacowane pokrycie szczepu przez MATS wyniosło 68,67% (95% CI: 47,77-84,59%), z 51,33%, 15,33% i 2% szczepów objętych jednym, dwoma i trzema antygenami szczepionkowymi. trzy antygeny szczepionkowe. Przewidywane pokrycie szczepów przez poszczególnych antygenów wynosiło: 42% NHBA, 36,33% fHbp, 8,33% PorA i 1,33% NadA. Pokrycie w najbardziej rozpowszechnionych kompleksach klonalnych (cc) wynosiło 70,37% dla cc 269, 30,19% dla cc 213 i 95,83% dla cc 32. WNIOSKI: Dystrybucja kompleksów klonalnych (cc) odpowiada za różnice w pokryciu zasięgu szczepu, dlatego ważne są badania zasięgu szczepu i częstości występowania cc w poszczególnych krajach. i częstości występowania cc są ważne. Ponieważ rozkład cc może się również zmieniać w czasie, co z kolei może prowadzić do zmian w zasięgu szczepu, ciągły szczegółowy nadzór i monitorowanie ekspresji antygenów szczepionkowych w krajach, w których w krajach, w których wprowadzono szczepionkę wieloskładnikową. Jest to naprawdę ważne w krajach takich jak Hiszpania, gdzie przewiduje się, że większość szczepów będzie tylko jeden antygen szczepionkowy, a prawdopodobieństwo pojawienia się mutantów ucieczkowych z użyciem szczepionki jest wyższa. W oparciu o zaobserwowane dane, cc213 powinien otrzymać szczególną uwagę, ponieważ wiąże się z niskim przewidywanym pokryciem szczepu i niedawno pojawił się w Hiszpanii. --- Rodzina Oca (Oligomeric coiled-coil adhesin) jest podgrupą bakteryjnych trimerycznych adhezyn autotransporterowych, która obejmuje strukturalnie spokrewnione białka, takie jak YadA z Yersinia enterocolitica i NadA z Neisseria meningitidis. W W tym badaniu przeszukaliśmy in silico pod kątem nowych członków tej rodziny w genomach bakterii genomach bakterii i zidentyfikowaliśmy HadA (Haemophilus adhesin A), trimeryczny autotransporter wyrażany tylko przez Haemophilus influenzae biogroup aegyptius wywołujący brazylijską gorączkę brazylijską gorączkę purpurową (BPF), piorunującą chorobę posocznicową u dzieci. Poprzez genomikę porównawczą genomikę porównawczą i analizę sekwencji przewidzieliśmy, że gen hadA znajduje się na mobilnym elemencie genetycznym unikalnym dla izolatów BPF. Analiza biologiczna HadA w była ograniczona, ponieważ organizm ten nie jest podatny na manipulacje genetyczne. manipulacji genetycznej. Alternatywnie, wykazaliśmy, że ekspresja HadA nadaje nieinwazyjnemu szczepowi Escherichia coli zdolność do przylegania do ludzkich komórek i macierzy zewnątrzkomórkowej. komórek i białek macierzy zewnątrzkomórkowej oraz do wywoływania agregacji bakterii i tworzenia mikrokolonii in vitro. agregacji bakterii i tworzenia mikrokolonii. Co ciekawe, przewiduje się, że HadA nie ma typowej N-końcowej domeny głowy białek Oca, zwykle związanej z wiązaniem receptorów komórkowych. wiązaniem receptorów komórkowych. Proponujemy tutaj model strukturalny łodygi HadA i pokazujemy, że region N-końcowy jest nadal odpowiedzialny za aktywność wiązania i motyw KGD. aktywność wiązania, a motyw KGD odgrywa ważną rolę. Co ciekawe, HadA promuje wnikanie bakterii do komórek ssaków. Nasze wyniki pokazują reorganizację cytoszkieletu cytoszkieletu i zaangażowanie klatryny w internalizację, w której pośredniczy HadA. internalizację. Dane te dają nowy wgląd w zależność struktura-funkcja adhezyny i sugerują potencjalną rolę tego białka w patogenezie choroby. tego białka w patogenezie BPF. --- Adhezyna NadA sprzyja adhezji/inwazji komórek przez hiperwirulentną Neisseria meningitidis B (MenB). Jego rekombinowana forma NadA(Δ351-405,) pozbawiona zewnętrznej domeny błony domeny błony zewnętrznej, jest immunogennym kandydatem na szczepionkę anty-MenB zdolną do stymulować monocyty, makrofagi i komórki dendrytyczne. W tym badaniu zbadaliśmy molekularny mechanizm działania komórkowego NadA(Δ351-405) w monocytach. monocytach. Wykazaliśmy, że NadA(Δ351-405) (przeciwko któremu uzyskaliśmy przeciwciała poliklonalne przeciwciała u królików), wiąże się z hsp90, ale nie z innymi zewnątrzkomórkowymi homologiczne białka szoku cieplnego grp94 i hsp70, in vitro i na powierzchni monocytów, w sposób zależny od temperatury. Wstępna inkubacja monocytów z rozpuszczalną adhezyną MenB zakłócała wiązanie przeciwciał anty-hsp90 i anty-hsp70 do hsp90 i hsp70 w temperaturze 37°C, czyli w warunkach, w których występuje specyficzne wiązania komórek, ale nie w temperaturze 0°C, w której specyficzne wiązanie komórek jest bardzo zmniejszone. I odwrotnie, wstępna inkubacja monocytów z przeciwciałami anty-hsp90 i anty-hsp70 przeciwciałami anty-hsp70 nie wpłynęło na wiązanie komórek NadA(Δ351-405) w żadnym warunkach temperaturowych, wskazując, że wiąże się on z innym receptorem na ich błonie plazmatycznej, a następnie dyfunduje bocznie, aby napotkać hsp90. Konsekwentnie, polimyksyna B zakłócała asocjację NadA(Δ351-405) /hsp90, zniósł spadek wiązania przeciwciał anty-hsp90 z powierzchnią komórki z powodu do NadA (Δ351-405) i hamował indukowane adhezyną wydzielanie cytokin / chemokin bez wpływu na wiązanie monocytów z adhezyną. Wspólna stymulacja monocytów przeciwciałami przeciwciałami anty-hsp90 i NadA(Δ351-405) określała silniejszą, ale niewrażliwą na polimyksynę B niewrażliwą aktywację komórek. Wskazuje to, że tworzenie rekombinowanego kompleksu NadA/hsp90/hsp70, choć niezbędne do pełnej stymulacji monocytów, może być może być zastąpione przez wiązanie przeciwciał anty-hsp90/hsp90. Wreszcie, aktywacja monocytów przez NadA(Δ351-405) samodzielnie lub w obecności przeciwciał anty-hsp90 były hamowane przez neutralizujące przeciwciała anty-TLR4, ale nie przez przeciwciała anty-TLR2 przeciwciała. Proponujemy, aby zależna od hsp90 rekrutacja do kompleksu sygnałowego hsp90/hsp70/TLR4 jest niezbędna dla immunostymulującej aktywności NadA(Δ351-40). NadA(Δ351-405) kandydata na szczepionkę przeciwko MenB. --- Hiperwirulentne MenB powodujące śmiertelne infekcje u ludzi często wykazują oligomeryczną zwiniętą adhezynę NadA, wewnętrzne białko błony zewnętrznej o masie 45 kDa zaangażowane w wiązanie i inwazję komórek nabłonka oddechowego. A rekombinowany rozpuszczalny mutant pozbawiony 10-kDa końcowej domeny błonowej COOH (NadA(Delta351-405)) również aktywuje ludzkie monocyty/makrofagi/DC. Ponieważ NadA jest fizjologicznie uwalniany podczas sepsy jako część OMV, w tym badaniu przetestowaliśmy hipotezę, że NadA(+) OMV mają wzmocniony lub zmodyfikowany działanie prozapalne/proimmunologiczne w porównaniu z NadA(-) OMV. Aby to zrobić zbadaliśmy aktywność oczyszczonego wolnego NadA (Delta351-405) i OMV z MenB i szczepów Escherichia coli, wyrażających lub nie NadA pełnej długości. NadA(Delta351-405) stymulował monocyty i makrofagi do wydzielania cytokin (IL-1beta, TNF-alfa, IL-6, IL-12p40, IL-12p70, IL-10) i chemokin (IL-8, MIP-1alfa, MCP-1, RANTES), a NadA pełnej długości poprawiała aktywność MenB OMV, preferencyjnie na makrofagach i tylko zwiększało uwalnianie cytokin. NadA(Delta351-405) indukował limfocytowy czynnik kostymulujący CD80 w monocytach i makrofagach, a makrofagach, a NadA(+) OMV indukowały szerszy zestaw cząsteczek wspomagających prezentację antygenu (CD80, CD86, HLA-DR i ICAM-1) bardziej efektywnie niż NadA(-) OMV tylko w makrofagach. Co więcej, błonowe efekty NadA, w przeciwieństwie do NadA(Delta351-405), były znacznie mniej wrażliwe na IFN-gamma. Aktywność NadA-pozytywnych E. coli OMV była podobna do aktywności kontrolnych OMV. NadA w MenB OMV działał przy stężeniach adhezyny około 10(6) razy niższych niż te wymagane do stymulacji komórek wolnym NadA(Delta351-405). --- W ostatniej dekadzie częstość występowania inwazyjnej choroby meningokokowej (IMD) w Chorwacji utrzymywała się na stałym poziomie około 1 przypadku na 100 000 mieszkańców. Chorwacji utrzymywała się na stabilnym poziomie około 1 przypadku na 100 000 mieszkańców, dotykając głównie dzieci w wieku ≤5 lat. Przedstawiamy charakterystykę molekularną meningokoków wywołujących IMD, które wystąpiły od czerwca 2009 do stycznia 2014 w Chorwacji. Genomowe DNA z 50 izolatów klinicznych analizowano pod kątem serogrupy, typowania sekwencji multilocus i typu alleli dwóch genów białek błony zewnętrznej, porA i białka białek błony zewnętrznej, porA i regulowanego żelazem fetA. Ponadto 22 z nich zostały scharakteryzowano za pomocą sekwencjonowania całego genomu w celu zdefiniowania szczepionki meningokokowej czteroskładnikowej meningokokowe serogrupy B (4CMenB), geny antygenów czynnika wiążącego białko H (fHb) i białka wiążącego żelazo (fHb). H (fHbp), antygenu Neisseria wiążącego heparynę (nhba) i adhezyny A (nadA) Neisseria adhezyny A (nadA) i docelowych genów oporności przeciwdrobnoustrojowej na penicylinę (białko wiążące penicylinę 2, penA), cyprofloksacyny (podjednostka A gyrazy DNA, gyrA) i ryfampicyny (podjednostka β polimerazy RNA, rpoB). Etest został wykorzystany do fenotypowo określić wrażliwość przeciwdrobnoustrojową wyizolowanych meningokoków. meningokoków. Głównymi kombinacjami grup serologicznych/kompleksów klonalnych były MenB cc41/44, MenC/cc11, MenW/cc174 i MenY/cc23. PorA P1.7-2, FetA F5-5 i F1-5 były najliczniej reprezentowanymi serogrupami. najbardziej reprezentowane przez grupy serologiczne. Meningokoki o zmniejszonej wrażliwością na penicylinę (38,9%) i jednym szczepem opornym na cyprofloksacynę. i jeden szczep oporny na ciprofloksacynę. Czterdzieści dwa procent MenB wykazało obecność co najmniej jednego z antygenów szczepionkowych 4CMenB (fHbp, NHBA, NadA i PorA). Nasze wyniki podkreślają zmienność genetyczną meningokoków wywołujących IMD w Chorwacji, Szczególnie w przypadku serogrupy B. Molekularna charakterystyka meningokoków ma kluczowe znaczenie dla poprawy nadzoru nad IMD i ochrony zdrowia. ma kluczowe znaczenie dla poprawy nadzoru IMD i lepszego planowania krajowych programów immunizacji. programów szczepień. --- Specyficzne białka powierzchniowe Neisseria meningitidis zostały zaproponowane do stymulują leukocyty podczas inwazji tkanek i wstrząsu septycznego. W tym badaniu wykazać, że adhezyna N. meningitidis Adhesin A (NadA) zaangażowana w kolonizację nabłonka oddechowego kolonizację nabłonka oddechowego przez hiperwirulentne szczepy N. meningitidis B wiąże się również z ludzkimi monocytami/makrofagami i aktywuje je. Ekspresja NadA na powierzchni Escherichia coli nie zwiększa asocjacji bakterii z monocytami. monocytów, ale szczep NadA-pozytywny indukował znacząco wyższą ilość TNF-alfa i IL-8 w porównaniu z rodzicielskim szczepem NadA-ujemnym, co sugeruje, że że NadA ma wewnętrzne działanie stymulujące na te komórki. Konsekwentnie, wysoce czysty, rozpuszczalny NadA (Delta351-405), proponowany składnik szczepionki szczepionki przeciw meningokokom, skutecznie stymuluje monocyty/makrofagi do wydzielania wybranego wzorca cytokin i czynników chemotaktycznych charakteryzujących się wysokim poziomem IL-8, IL-6, MCP-1 i MIP-1alfa oraz niskim poziomem głównych mediatorów wazoaktywnych mediatorów TNF-alfa i IL-1. NadA(Delta351-405) również hamował apoptozę monocytów i determinował ich różnicowanie do fenotypu podobnego do makrofagów. fenotyp makrofagów. --- Nowa szczepionka (4-składnikowa szczepionka białkowa 4CMenB [Bexsero], która obejmuje PorA, białko wiążące czynnik H [fHbp], neisseriański antygen wiążący heparynę [NHBA] i neisseriańską adhezynę A [NadA]. [NHBA] i adhezynę Neisseria A [NadA]) przeciwko meningokokom serogrupy B została ostatnio został niedawno zatwierdzony do stosowania u osób w wieku powyżej 2 miesięcy w Europie, Australii i Kanadzie, Australii i Kanadzie. Badania skuteczności klinicznej przed zatwierdzeniem są niewykonalne w przypadku inwazyjnej choroby meningokokowej, ponieważ częstość jej występowania jest niska/bardzo niska, oraz miano przeciwciał bakteriobójczych w surowicy (SBA) (lub miano ludzkiego SBA [hSBA], gdy w teście stosuje się ludzkiego dopełniacza) zostało użyte jako zastępczy marker ochrony. ochrony. Jednak test hSBA nie może być stosowany na dużą skalę, a zatem dlatego opracowano system typowania antygenów meningokokowych (MATS). MATS łączy konwencjonalne genotypowanie PorA z enzymatycznym testem immunosorbcyjnym (ELISA), który określa ilościowo zarówno ekspresję, jak i reaktywność krzyżową wariantów antygenowych. wariantów antygenowych. Test został wykorzystany do oceny potencjału meningokoków 4CMenB szczepionki przeciwko meningokokom grupy B w celu pokrycia szczepów grupy B w kilku krajach. krajach. Niektóre najnowsze dane sugerują, że MATS jest konserwatywnym predyktorem pokrycia szczepu. pokrycia szczepu. Użyliśmy połączonych surowic od nastolatków i niemowląt do przetestowania za pomocą testu hSBA 10 szczepów meningokoków grupy B wyizolowanych w Hiszpanii, które były ujemne dla 3 antygenów (n = 9) lub które miały bardzo niski poziom 3 antygenów (n = 1). przez MATS. Stwierdziliśmy, że wszystkie szczepy zostały zabite przez surowice nastolatków i że 5 z 10 szczepów zostało również zabitych, choć w niskim mianie, przez surowice od niemowląt. niemowląt. Nasze dane potwierdzają, że MATS niedoszacowuje pokrycia szczepionką. --- Fizykochemiczna charakterystyka NadADelta(351-405), rekombinowanego białka białko odkryte przez odwrotną wakcynologię, składnik kandydującej szczepionki przeciwko Neisseria meningitidis serotyp B. Metody analityczne, takie jak spektrometria mas, elektroforeza, spektroskopia optyczna i SEC-MALLS. zastosowane do odsłonięcia struktury NadADelta(351-405) i oceny substancji związanych z produktem. Substancje związane z produktem. Ponadto zastosowano analizę białka po celowej denaturacji została zastosowana w celu zakwestionowania wybranych metod i do określić ich adekwatność i specyficzność. Wszystkie uzyskane wyniki zostały umieszczone w modelu umożliwiającym dogłębne zrozumienie antygenu NadADelta(351-405): występuje w roztworze jako homo-trimer, zachowując wysoki procent wtórnej helisy alfa. procent struktury drugorzędowej alfa-helisy i jest w stanie ponownie złożyć się z monomerycznych podjednostek po denaturacji termicznej; ta organizacja strukturalna jest zgodna z tą przewidzianą dla MenB NadA (Neisseria Adhesin A). Zestawy analityczne uzyskane podczas opracowywania procesu dla faz klinicznych I-III materiału I-III potwierdzają jakość produktu i spójność produkcji. --- Neisseria adhesin A (NadA) jest jednym z antygenów Bexsero, niedawno licencjonowanej wieloskładnikowej szczepionki przeciwko serogrupie wieloskładnikowej szczepionki przeciwko Neisseria meningitidis serogrupy B (MenB). (MenB). NadA należy do klasy oligomerycznych adhezyn o zwiniętej cewce i jest w stanie pośredniczyć w adhezji i inwazji ludzkich komórek nabłonkowych. Jako antygen szczepionkowy jako antygen szczepionkowy, NadA indukuje wysoki poziom przeciwciał bakteriobójczych; Jednak domeny ważne dla odpowiedzi ochronnej są nadal nieznane. W celu w celu dalszego zbadania jego właściwości immunogennych, scharakteryzowaliśmy mysie IgG1 mAb (6E3), które było w stanie rozpoznać 2 główne warianty antygenowe warianty NadA na powierzchni szczepów MenB. Epitop celowany przez mAb 6E3 został zmapowany za pomocą spektrometrii mas z wymianą wodoru-deuteru i wykazano, że jest zlokalizowany w regionie łodygi NadA (aa 206-249). Chociaż nie zaobserwowano aktywności bakteriobójczej w surowicy dla mysiej IgG1 mAb 6E3, aktywność funkcjonalną została przywrócona przy użyciu chimerycznych przeciwciał, w których zmienne regiony mysiego mAb 6E3 zostały połączone z ludzkimi stałymi regionami IgG3, potwierdzając w ten sposób ochronny charakter epitopu mAb 6E3. Zastosowanie chimerycznych cząsteczek przeciwciał umożliwi przyszłe badania funkcjonalności przeciwciał za pośrednictwem dopełniacza niezależnie od różnic w aktywacji dopełniacza za pośrednictwem Fc. --- TŁO: Przez dziesięciolecia szeroko skuteczna szczepionka przeciwko serogrupie B Neisseria meningitidis (MenB) pozostawała nieuchwytna. Niedawno opracowano czteroskładnikową rekombinowana szczepionka (4CMenB) została opracowana i jest obecnie zatwierdzona w Europie, Kanadzie, Australii i niektórych krajach Ameryki Łacińskiej, Kanadzie, Australii i niektórych krajach Ameryki Łacińskiej. To randomizowane badanie fazy III fazy oceniano konsystencję partii, wczesne odpowiedzi immunologiczne i bezpieczeństwo 4CMenB u młodzieży w wieku od 11 do 17 lat w Australii i Kanadzie (NCT01423084). METODY: Łącznie 344 nastolatków otrzymało dwie dawki jednej z 2 serii szczepionki 4CMenB w odstępie 1 miesiąca. Immunogenność oceniano przed, 2 tygodnie i 1 miesiąc po drugim szczepieniu. Aktywność bakteriobójczą surowicy przy użyciu ludzkiego dopełniacza (hSBA) wobec trzech szczepów referencyjnych 44/76-SL, 5/99 i NZ98/254, wybranych w celu ekspresji jednego z antygenów szczepionkowych; adhezyny Neisseria A (NadA), białka wiążącego czynnik H (fHbp) i poriny A (PorA) zawierającej pęcherzyk błony zewnętrznej (OMV). pęcherzyk błony zewnętrznej (OMV). Odpowiedzi na antygen wiążący heparynę Neisseria (NHBA) oceniano za pomocą testu immunoenzymatycznego (ELISA). Reakcje miejscowe i ogólnoustrojowe rejestrowano przez 7 dni po każdym szczepieniu. szczepieniu; niezamówione zdarzenia niepożądane były monitorowane przez cały czas trwania badania. WYNIKI: Równoważność immunologiczna dwóch serii szczepionki 4CMenB została ustalona po 1 miesiącu. 1 miesiącu. Na początku badania ≤7% uczestników miało miana hSBA ≥5 dla wszystkich trzech szczepów referencyjnych. szczepów referencyjnych. Dwa tygodnie po podaniu drugiej dawki 4CMenB u wszystkich uczestników uczestnicy mieli miana hSBA ≥5 przeciwko fHbp i NadA w porównaniu z 84-96% przeciwko szczepom referencyjnym przeciwko szczepom referencyjnym PorA. Po 1 miesiącu odpowiednie odsetki wynosiły odpowiednio 99%, 100% i 70-79%. Obie partie były ogólnie dobrze tolerowane i miały podobne profile zdarzeń niepożądanych. WNIOSKI: Dwie dawki 4CMenB miały akceptowalny profil bezpieczeństwa i indukowały silną odpowiedź immunologiczną u nastolatków. silną odpowiedź immunologiczną u nastolatków. Szczytową odpowiedź przeciwciał zaobserwowano 14 dni po szczepieniu. Podczas gdy znaczny niejednorodny, zależny od antygenu wczesny spadek miana przeciwciał, znaczny odsetek uczestników nadal utrzymywał ochronne miano hSH. uczestników nadal utrzymywał ochronne miana hSBA po 1 miesiącu. --- Eksponowana na powierzchni adhezyna NadA wytwarzana przez podzbiór otoczkowych szczepów serogrupy B Neisseria meningitidis jest obecnie rozważana jako kandydat na szczepionkę w celu zapobiegania chorobom inwazyjnym wywoływanym przez hiperwirulentną linię meningokoków. meningokoków. Wiadomo, że poziomy NadA są kontrolowane zarówno przez transkrypcyjne czynniki regulacyjne, jak i składnik i składnik ludzkiej śliny, kwas 4-hydroksyfenylooctowy. W tym przypadku potwierdziliśmy zdolność białka wiążącego DNA o nazwie FarR do negatywnie kontrolować ekspresję nadA. Odkryliśmy również, że znany regulator transkrypcji regulator transkrypcji farR w N. gonorrhoeae określany jako MtrR może mieć negatywny wpływ regulacyjny na ekspresję farR i nadA. wpływ na ekspresję farR i nadA, szczególnie w przypadku nadekspresji. Stwierdzono, że represja nadA, w której pośredniczy MtrR, jest bezpośrednia, a jego wiązanie z sekwencją DNA docelową sekwencją DNA zawierającą promotor nadA wpływało na tworzenie i/lub stabilność kompleksów FarR::nadA. Złożoność wielowarstwowej regulacji nadA odkryta podczas tego badania sugeruje, że N. meningitidis moduluje poziomy białka adhezyny NadA w celu interakcji z komórkami gospodarza, a jednocześnie unikając przeciwciał skierowanych przeciwko powierzchni odsłoniętym epitopom. --- TŁO: Izolaty meningokoków serogrupy B (MenB) stanowią obecnie około 90% inwazyjnej choroby meningokokowej (IMD) w Grecji. około 90% inwazyjnej choroby meningokokowej (IMD) w Grecji, z dominującym kompleksem klonalnym ST-162 z dominującym kompleksem klonalnym. Potencjał wieloskładnikowej szczepionki przeciwko meningokokom B (4CMenB), która została niedawno dopuszczona do obrotu w Europie, w celu ustalenia, czy czy wspomniana szczepionka obejmie szczepy MenB krążące w Grecji. Grecji. Panel 148 inwazyjnych szczepów meningokoków serogrupy B został scharakteryzowano za pomocą typowania sekwencji multilocus (MLST) i podtypowania PorA. Składniki szczepionki składniki szczepionki były typowane przez sekwencjonowanie białka wiążącego czynnik H (fHbp), antygenu wiążącego heparynę (NHBA) i adhezyny A Neisseria (NadA). Ich ekspresja została zbadana przez Meningococcal Antigen Typing System (MATS). WYNIKI: Globalne pokrycie szczepów przewidywane przez MATS wyniosło 89,2% (95% CI 63,5%-98,6%) z 44,6%, 38,5% i 6,1% szczepów objętych odpowiednio jednym, dwoma i trzema antygenami szczepionkowymi. antygenami szczepionkowymi. NHBA był antygenem odpowiedzialnym za najwyższe pokrycie (78,4%). (78,4%), a następnie fHbp (52,7%), PorA (8,1%) i NadA (0,7%). Pokrycie głównych genotypów nie różniło się znacząco. Najbardziej rozpowszechnionym genotypem MLST MLST był kompleks klonalny ST-162, stanowiący 44,6% szczepów w panelu z przewidywanym pokryciem wynoszącym 86,4%, głównie ze względu na NHBA i fHbp. WNIOSKI: 4CMenB może potencjalnie chronić przed znaczną znaczną częścią greckich inwazyjnych szczepów MenB.
Co to jest adhezyna A Neisseria?
Adhezyna A Neisseria (NadA) jest jednym z antygenów Bexsero, niedawno licencjonowanej wieloskładnikowej szczepionki przeciwko serogrupie B Neisseria meningitidis (MenB). NadA należy do klasy oligomerycznych adhezyn typu coiled-coil i może pośredniczyć w adhezji i inwazji ludzkich komórek nabłonkowych. Wykazano, że jako antygen szczepionkowy, NadA indukuje wysoki poziom przeciwciał bakteriobójczych. Opisano ponad 89 różnych sekwencji alleli NadA i 43 różne peptydy.