Endocytoza E-kadheryny pojawiła się ostatnio jako ważna determinanta funkcji kadheryny z potencjałem do udziału w remodelowaniu adhezyjnych kontaktów kontaktów. W tym badaniu skupiliśmy się na początkowym losie E-kadheryny, gdy przeważnie istnieje swobodnie na powierzchni komórki przed wiązaniem adhezyjnym lub włączeniem do połączeń. Techniki znakowania powierzchniowego zostały wykorzystane do określenia endocytarnego szlaku E-kadheryny w komórkach MCF-7 i komórkach jajnika chomika chińskiego komórek jajnika chomika chińskiego ze stabilną ekspresją ludzkiej E-kadheryny. Stwierdziliśmy, że w tym eksperymentalnym systemie E-kadheryna weszła do przedziału ujemnego dla transferyny przed transportem do wczesnego przedziału endosomalnego, gdzie łączyła się z klasycznym szlakami wychwytu, w których pośredniczy klatryna. Endocytoza E-kadheryny była hamowana przez zmutowaną dynaminę, ale nie przez mutanta Eps15, który skutecznie blokował internalizację transferyny internalizację transferyny. Ponadto wydaje się, że podtrzymywana sygnalizacja przez GTPazę ARF6 uwięziła endocytowaną E-kadherynę w dużych strukturach obwodowych. Wnioskujemy, że w izolowanych komórkach niezwiązana E-kadheryna na powierzchni komórki jest głównie endocytowana przez szlak niezależny od klatryny, przypominający makropinocytotyczną internalizację internalizację, która następnie łączy się z wczesnym systemem endosomalnym. W połączeniu z wcześniejszymi doniesieniami, sugeruje to możliwość istnienia wielu ścieżek dla E-kadheryny do komórek, które prawdopodobnie odzwierciedlają kontekst i regulację komórki. regulację. --- E-kadheryna odgrywa kluczową rolę w morfogenezie nabłonka. Kontroluje ona adhezję międzykomórkową wymaganą do kohezji tkanek i kotwiczy Napięcie napędzane aktomiozyną potrzebne do zmiany kształtu komórki. We wczesnym zarodku Drosophila zarodka Drosophila, miozyna-II (Myo-II) kontroluje planarną polaryzację przebudowy połączeń komórkowych i rozbudowę tkanek. połączeń komórkowych i wydłużanie tkanek. Dystrybucja E-kadheryny jest również planarna spolaryzowana i komplementarna do dystrybucji miozyny-II. Tutaj pokazujemy, że polaryzacja E-kadheryny jest kontrolowana przez spolaryzowaną regulację klatryny i endocytozy, w której pośredniczy dynamina. Zablokowanie endocytozy E-kadheryny spowodowało defekty interkalacji komórek. defekty interkalacji. Określiliśmy szlak, który kontroluje inicjację endocytozy endocytozę E-kadheryny poprzez regulację AP2 i rekrutację płaszcza klatryny przez E-kadherynę. Wymaga to skoordynowanego działania forminy Diaphanous (Dia) i miozyny II. Ich aktywność jest kontrolowana przez czynnik wymiany guaniny guaniny RhoGEF2, który jest spolaryzowany planarnie i nieobecny w regionach regionach nieinterkalacyjnych. Wreszcie, dostarczamy dowodów na to, że Dia i Myo-II kontrolują inicjację endocytozy E-kadheryny poprzez regulację bocznej klastrowanie E-kadheryny. --- TŁO: E-kadheryna jest cząsteczką adhezyjną komórka-komórka, której dysfunkcja jest powszechną cechą która jest powszechną cechą ponad 70% wszystkich inwazyjnych raków, w tym raka żołądka. Mechanizmy stojące za utratą funkcji E-kadheryny w raku żołądka obejmują mutacje i wyciszanie na poziomie DNA lub RNA. Niemniej jednak, w wysokim odsetku przypadków raka żołądka wykazujących dysfunkcję dysfunkcję E-kadheryny, mechanizm odpowiedzialny za dysregulację E-kadheryny jest nieznany. jest nieznany. Wcześniej wykazaliśmy istnienie dwukierunkowego między E-kadheryną a dwoma głównymi enzymami przetwarzającymi N-glikany, N-acetyloglukozaminylotransferazą-III lub -V (GnT-III lub GnT-V). METODY: W niniejszym badaniu scharakteryzowaliśmy funkcjonalne implikacje N-glikanów katalizowanych przez GnT-III i GnT-V na regulację E-kadheryny funkcji biologicznych oraz w montażu molekularnym i stabilności adherens-junctions w modelu raka żołądka. Wyniki zostały zweryfikowane w próbki ludzkiego raka żołądka. WYNIKI: Wykazaliśmy, że GnT-III indukował stabilizujący wpływ na E-kadherynę w błonie komórkowej poprzez indukowanie opóźnienia w szybkości obrotu białka, przyczyniając się do tworzenia stabilnych i funkcjonalnych połączeń adhezyjnych oraz dalsze zapobieganie endocytozie E-kadheryny zależnej od klatryny. I odwrotnie, GnT-V promuje destabilizację E-kadheryny, prowadząc do jej błędnej lokalizacji i niestabilnych połączeń adhezyjnych z upośledzeniem adhezji komórka-komórka. WNIOSKI: Potwierdza to rolę GnT-III w supresji guza, w której pośredniczy E-kadheryna i GnT-V w inwazji guza za pośrednictwem E-kadheryny. ZNACZENIE OGÓLNE: Wyniki te przyczyniają się do wypełnienia luki w wiedzy na temat przypadków ludzkiego raka z dysfunkcją E-kadheryny, otwierając nowe wgląd w mechanizmy molekularne leżące u podstaw regulacji E-kadheryny w raka żołądka z potencjalnym przełożeniem na zastosowania kliniczne.
Czy klatryna bierze udział w endocytozie E-kadheryny?
E-kadheryna jest centralnym składnikiem połączenia adhezyjnego w komórkach nabłonkowych i stale podlega endocytozie przez pęcherzyki pokryte klatyną i / lub jaskinie w zależności od typu komórki.