CEL: Celem tego badania było kompleksowe określenie częstości występowania mutacji PIK3CA we wszystkich eksonach mutacji we wszystkich eksonach PIK3CA zarówno w endometrioidalnym raku endometrium (EEC) i nieendometrioidalnym raku endometrium (NEEC). PROJEKT EKSPERYMENTALNY: Przeprowadziliśmy resekwencjonowanie wszystkich kodujących eksonów PIK3CA i PTEN oraz eksony 1 i 2 KRAS, ze 108 pierwotnych guzów endometrium. Mutacje somatyczne zostały potwierdzone przez sekwencjonowanie dopasowanego normalnego DNA. Właściwości biochemiczne podzbioru nowych mutacji PIK3CA zostały określone przez egzogenną ekspresję typu dzikiego i zmutowanych konstruktów w komórkach U2OS i mierząc poziomy fosforylacji fosforylacji AKT(Ser473). WYNIKI: Somatyczne mutacje PIK3CA wykryto w 52,4% z 42 EEC i 33,3% z 66 NEEC. 66 NEEC. Połowa (29 z 58) wszystkich niesynonimicznych mutacji PIK3CA znajdowała się w eksonach 1-7, a połowa w eksonach 9 i 20. Mutacje w eksonach 1-7 zlokalizowane były w obszarach ABD, łącznika ABD-RBD i domen C2 p110α. W tych regionach Arg88, Arg93, Gly106, Lys111, Glu365 i Glu453, były rekurencyjnie zmutowane; Arg88, Arg93 i Lys111 tworzyły hotspoty mutacji. P110α-R93W, -G106R, -G106V, -K111E, -delP449-L455 i -E453K prowadziły do zwiększonych poziomów fosfo-AKT (Ser473) w porównaniu do p110α typu dzikiego. Ogólnie rzecz biorąc, 62% mutantów eksonów 1-7 PIK3CA i 64% mutantów mutacji w eksonach 9-20 PIK3CA było aktywujących; 72% mutacji w eksonach 1-7 nie zostało wcześniej nie zostały wcześniej zgłoszone w raku endometrium. WNIOSKI: Nasze badanie zidentyfikowało nową podgrupę pacjentek z rakiem endometrium z aktywującymi mutacjami w amino-końcowych domenach p110α; ci pacjenci mogą być odpowiednie do rozważenia w badaniach klinicznych terapii celowanych skierowanych przeciwko szlakowi PI3K. --- Diagnostyka molekularna nowotworów u ludzi może zwiększyć dokładność prognozowania, ułatwić wybór optymalnego schematu terapeutycznego, poprawić wyniki leczenia, obniżyć koszty wyniki, obniżyć koszty leczenia i sprzyjać rozwojowi spersonalizowanego spersonalizowanego podejścia do opieki nad pacjentem. Ponadto czułość i swoistość są podstawowymi cechami każdej metody diagnostycznej. Opracowaliśmy wysoce czułą mikromacierz do wykrywania powszechnych mutacji onkogennych KRAS i BRAF. W raka jelita grubego wykazano, że mutacje KRAS i BRAF identyfikują klaster pacjentów, którzy nie reagują na terapie anty-EGFR; identyfikacja tych mutacji jest zatem tych mutacji jest zatem niezwykle ważna z klinicznego punktu widzenia. Aby zweryfikować charakterystykę techniczną systemu mikromacierzy dla prawidłowej identyfikacji statusu mutacji KRAS w dwóch kodonach hotspot 12 i 13 oraz mutacji BRAF(V600E) w nowotworach jelita grubego, wybraliśmy 75 próbek wcześniej scharakteryzowanych przez konwencjonalną i CO-amplifikację w niższej temperaturze denaturacji-PCR (COL temperaturę denaturacji-PCR (COLD-PCR), a następnie analizę topnienia w wysokiej rozdzielczości i bezpośrednie sekwencjonowanie. Spośród tych próbek, 60 zostało pobranych podczas chirurgii i natychmiast zanurzono w wodzie RNA, podczas gdy 15 pozostałych było tkanki utrwalone w formalinie i zatopione w parafinie (FFPE). Granica wykrywalności proponowanej metody proponowanej metody była różna dla 7 badanych mutacji KRAS i dla mutacji V600E BRAF. W szczególności, system mikromacierzy był w stanie wykryć minimum około 0,01% zmutowanych alleli na tle DNA typu dzikiego. A ślepa walidacja wykazała pełną zgodność wyników. Doskonała zgodność wyników wykazała, że nowe podłoże mikromacierzy jest wysoce wysoce specyficzne w przypisywaniu prawidłowego genotypu bez żadnej strategii wzbogacania. --- Rak rdzeniasty tarczycy (MTC) występuje sporadycznie (sMTC) lub jako część dziedzicznego zespołu nowotworowego, mnogiej gruczolakowatości wewnątrzwydzielniczej typu 2 (MEN 2). Podczas gdy występowanie zespołu MEN 2 jest związane z mutacjami w protoonkogenie RET protoonkogenu RET, przyczyna karcynogenezy w sMTC nadal pozostaje niejasna. Ras jest często zmutowanym onkogenem w szerokim spektrum ludzkich nowotworów i został w około 50% raków pęcherzykowych, brodawkowatych lub anaplastycznych tarczycy. tarczycy. Celem tego badania było ustalenie, czy mutacje w onkogenie ras mogą odgrywać potencjalną rolę w kancerogenezie sMTC. W tym przeanalizowaliśmy 15 sMTC pod kątem mutacji w gorących punktach kodonów 12, 13 i 61 onkogenów H- i K-ras. onkogenów H- i K-ras. Wykorzystaliśmy technikę bezpośredniego sekwencjonowania. W żadnym z badanych guzach nie byliśmy w stanie wykryć mutacji w kodonach 12, 13 i 61 onkogenu H-ras i K-ras. Na podstawie tych wyników stwierdzamy, że H- i K-ras nie odgrywają istotnej roli w kancerogenezie sMTC. --- W lutym 2010 r. Medical Advisory Secretariat (MAS) rozpoczął prace nad opartych na dowodach przeglądach literatury dotyczącej trzech testów farmakogenomicznych farmakogenomicznych. Projekt ten powstał, gdy organizacja Cancer Care Ontario (CCO) poprosiła MAS o dostarczenie opartych na dowodach analiz dotyczących skuteczności i opłacalności i opłacalności trzech onkologicznych testów farmakogenomicznych stosowanych obecnie w Ontario. Analizy oparte na dowodach zostały przygotowane dla każdej z tych technologii. Zostały one Zostały one ukończone we współpracy z wewnętrznymi i zewnętrznymi interesariuszami, w tym z Prowincjonalnym Panelem Ekspertów ds. Prowincjonalny Panel Ekspertów ds. Farmakogenomiki (PEPP). W ramach PEPP utworzono podgrupy podgrupy dla każdego obszaru chorobowego. Dla każdej technologii przeprowadzono analiza ekonomiczna została również przeprowadzona przez Toronto Health Economics and Technology Assessment Collaborative (THETA). Toronto Health Economics and Technology Assessment Collaborative (THETA) i została podsumowana w raportach. NASTĘPUJĄCE RAPORTY SĄ DOSTĘPNE PUBLICZNIE NA STRONIE INTERNETOWEJ MAS pod adresem: www.health.gov.on.ca/mas lub pod adresem www.health.gov.on.ca/english/providers/program/mas/mas_about.htmlGENE EKSPRESJA PROFILOWANIE W CELU UKIERUNKOWANIA DECYZJI DOTYCZĄCYCH CHEMIOTERAPII UZUPEŁNIAJĄCEJ U KOBIET Z WCZESNYM RAKIEM PIERSI Wczesny rak piersi: analiza ekonomiczna oparta na dowodachEpidermal Growth Factor Receptor Badanie mutacji (EGFR) w celu przewidywania odpowiedzi na inhibitor kinazy tyrozynowej (TKI) ukierunkowany na EGFR Inhibitor kinazy (TKI) u pacjentów z zaawansowanym niedrobnokomórkowym rakiem płuca raka płuca: analiza ekonomiczna oparta na dowodachK-RAS w decyzjach dotyczących leczenia zaawansowanego raka jelita grubego w leczeniu zaawansowanego raka jelita grubego: analiza ekonomiczna oparta na dowodach naukowych. Analiza. CEL: Celem niniejszego przeglądu systematycznego jest określenie wartości predykcyjnej badania KRAS w leczeniu przerzutowego raka jelita grubego (mCRC) dwoma lekami anty-EGFR, cetuksymabem i panitumumabem. Analizy ekonomiczne ekonomiczne są również przeprowadzane w celu oceny opłacalności testów KRAS KRAS. POTRZEBY KLINICZNE: WARUNEK I POPULACJA DOCELOWA Przerzutowy rak jelita grubego (mCRC) jest zwykle definiowany jako choroba w IV stadium zaawansowania według American Joint Committee on Cancer. Committee on Cancer tumour node metastasis (TNM) lub stadium D w systemie klasyfikacji Duke'a. Duke'a. Pacjenci z zaawansowanym rakiem jelita grubego (mCRC) albo występują u nich przerzuty lub rozwijają się one w wyniku progresji choroby. KRAS (Kristen-RAS, członek rodziny onkogenów wirusa mięsaka szczurzego (ras)) jest często zmutowany w nowotworach nabłonkowych, takich jak rak jelita grubego, z mutacjami mutacje występują w gorących punktach mutacji (kodony 12 i 13) białka KRAS białko. Zaangażowany w sygnalizację procesów komórkowych, w których pośredniczy EGFR, takich jak proliferacja komórek proliferacja komórek, oporność na apoptozę, zwiększona ruchliwość komórek i neoangiogeneza. neoangiogeneza, uważa się, że mutacja w genie KRAS jest zaangażowana w patogenezę raka. patogenezie raka. Przypuszcza się również, że taka mutacja jest zaangażowana w oporność na ukierunkowane terapie anty-EGFR (receptor naskórkowego czynnika wzrostu z aktywnością kinazy tyrozynowej), takie jak (receptor naskórkowego czynnika wzrostu o aktywności kinazy tyrozynowej), takie jak cetuksymab i panitumumab. ważne w ocenie dowodów na wartość predykcyjną testów KRAS w tym kontekście. w tym kontekście. TESTOWANIE MUTACJI KRAS W ZAAWANSOWANYM RAKU KOLOROWYM: Zarówno zarówno cetuksymab, jak i panitumumab są wskazane przez Health Canada w leczeniu pacjentów z przerzutowym rakiem jelita grubego, których guzy są WT dla genu KRAS genu KRAS. Cetuksymab może być stosowany w monoterapii u pacjentów nietolerujących chemioterapii opartej na chemioterapię opartą na irynotekanie lub u pacjentów, u których nie powiodły się schematy oparte na irynotekanie i oksaliplatynie. oksaliplatyny i którzy otrzymywali fluoropirymidynę. Może być również w skojarzeniu z irynotekanem u pacjentów opornych na inne schematy chemioterapii oparte na schematy chemioterapii oparte na irynotekanie. Panitumumab jest wskazany wyłącznie jako po niepowodzeniu chemioterapii zawierającej fluoropirymidynę, oksaliplatynę i irynotekan. schematów chemioterapii zawierających irynotekan. W Ontario pacjenci z zaawansowanym zaawansowanym rakiem jelita grubego, którzy są oporni na chemioterapię, mogą otrzymać terapię celowaną anty-EGFR cetuksymab lub panitumumab. Kwalifikowalność do tych terapii jest oparta na statusie KRAS ich guza, uzyskanym z tkanki pobranej z próbek chirurgicznej lub biopsji. Uważa się, że leczenie nie ma wpływu na status KRAS. leczenie, dlatego u pacjentów, u których tkanka chirurgiczna jest dostępna do badania KRAS, dodatkowe biopsje przed leczeniem tymi środkami celowanymi nie są konieczne. nie jest konieczna. W przypadku pacjentów, którzy nie przeszli operacji lub dla których tkanka chirurgiczna nie jest dostępna, wymagana jest biopsja pierwotnego lub przerzutowego w celu określenia ich statusu KRAS. Jest to możliwe, ponieważ status przerzutów i guza pierwotnego jest uważany za podobny. PYTANIE BADAWCZE: Określenie, czy istnieje wartość predykcyjna badania KRAS w kierowaniu decyzjami dotyczącymi leczenia terapiami celowanymi anty-EGFR u pacjentów z zaawansowanym u pacjentów z zaawansowanym rakiem jelita grubego opornym na chemioterapię. WYSZUKIWANIE LITERATURY: Medyczny Sekretariat Doradczy postępował zgodnie ze swoimi standardowymi i 18 maja 2010 roku przeszukał następujące elektroniczne bazy danych: Ovid MEDLINE, EMBASE, Ovid MEDLINE In-Process & Other Non-Indexed Citations, Cochrane Central Register of Controlled Trials, Cochrane Database of Systematic Reviews oraz baza danych The International Network of Agencies for Health Technology Health Technology Assessment. Wyszukiwane hasła tematyczne i słowa kluczowe obejmowały rak jelita grubego, cetuksymab, panitumumab i badanie KRAS. Wyszukiwanie zostało ograniczone do anglojęzycznych artykułów opublikowanych między 1 stycznia 2009 r. a 18 maja 2010 r, 2009 r. i 18 maja 2010 r., w wyniku czego uzyskano 1335 artykułów do przeglądu. Wykluczono opisy przypadków przypadki, komentarze, artykuły redakcyjne, niesystematyczne przeglądy i listy. Badania opublikowane od 1 stycznia 2005 r. do 31 grudnia 2008 r. zostały zidentyfikowane w ramach oceny technologii przeprowadzonej przez Agencję Badań i Jakości Opieki Zdrowotnej (AHRQ), opublikowanej przez Agencję ds. Jakości Opieki Zdrowotnej (AHRQ), opublikowanej w 2010 roku. Łącznie zidentyfikowano 14 badań obserwacyjnych zidentyfikowanych do włączenia do niniejszej EBA: 4 dla monoterapii cetuksymabem, 7 dla terapii monoterapii cetuksymabem, 7 dla terapii skojarzonej cetuksymabem i irynotekanem oraz 3 do włączenia do przeglądu dla monoterapii panitumumabem KRYTERIA WŁĄCZENIA: artykuły w języku angielskim oraz w języku angielskim lub francuskim HTA opublikowane od stycznia 2005 r. do maja 2010 r. włącznie. badania kontrolowane z randomizacją (RCT) lub badania obserwacyjne, w tym badania z pojedynczym ramieniem Badania z danymi na temat głównych wyników zainteresowania, przeżycie całkowite i przeżycie wolne od progresji.badania dotyczące leczenia trzeciej linii cetuksymabem lub panitumumabem u pacjentów z zaawansowanym rakiem jelita grubego opornym na chemioterapię. W przypadku oceny cetuksymabu i irynotekanu, badania, w których co najmniej 70% pacjentów w badaniu otrzymało cetuksymab. co najmniej 70% pacjentów w badaniu otrzymywało tę terapię skojarzoną. KRYTERIA WYŁĄCZENIA: Badania, których cała próba została uwzględniona w kolejnych publikacjach, które zostały włączone do niniejszego w kolejnych publikacjach, które zostały włączone do niniejszego EBA. Opisy przypadków, komentarze, artykuły redakcyjne lub listy. WYNIKI BĘDĄCE PRZEDMIOTEM ZAINTERESOWANIA: Przeżycie całkowite (OS), medianaPrzeżycie wolne od progresji (PFS), mediana. (PFS), mediana.wskaźniki odpowiedzi.wskaźniki zdarzeń niepożądanych.jakość życia (QOL). PODSUMOWANIE WYNIKÓW PRZEGLĄDU SYSTEMATYCZNEGO: MONOTERAPIA CETUXIMABEM LUB PANITUMUMABEM: Na podstawie umiarkowanych danych obserwacyjnych GRADE, obserwuje się poprawę PFS i OS na korzyść pacjentów bez mutacji KRAS (KRAS wildtype lub KRAS WT) w porównaniu z pacjentami z mutacją w porównaniu do pacjentów z mutacją. TERAPIA SKOJARZONA CETUKSYMABEM I IRYNOTEKANEM: Istnieją niskie dowody GRADE na to, że badanie KRAS może zoptymalizować korzyści w zakresie przeżycia u pacjentów bez mutacji KRAS (KRAS wildtype lub KRAS WT) w porównaniu z pacjentami z mutacją. Jednak leczenie skojarzone cetuksymabem i irynotekanem w oparciu o status KRAS dyskontują jakikolwiek wpływ cetuksymabu na ewentualne odwrócenie oporność na irynotekan u pacjentów z mutacją, ponieważ obserwowane efekty były niższe niż u pacjentów bez mutacji. Eksperci kliniczni zgłosili obawy co do biologicznej wiarygodności tej obserwacji, a zatem wniosek ten dlatego wniosek ten należy uznać za generujący hipotezę. ANALIZA EKONOMICZNA: Przeprowadzono analizy efektywności kosztowej i wpływu na budżet z uwzględnieniem szacunków skuteczności z tego przeglądu systematycznego. Ocena względnej efektywności kosztowej, w oparciu o analizę kosztów i użyteczności opartą na analizie decyzyjnej w porównaniu z brakiem badań w kontekście leczenia cetuksymabem. kontekście leczenia monoterapią cetuksymabem, monoterapią panitumumabem, cetuksymabem w skojarzeniu z irynotekanem i najlepszym leczeniem wspomagającym. Istotne należy zauważyć, że analiza efektywności kosztowej koncentrowała się na wpływie badania na obecność mutacji KRAS w porównaniu z brakiem badania w kontekście różnych w kontekście różnych opcji leczenia, a nie na ocenie efektywności kosztowej samego leczenia samego leczenia farmakologicznego. WNIOSKI: Status KRAS jest czynnikiem predykcyjnym wyników leczenia cetuksymabem i panitumumabem w monoterapii oraz w terapii skojarzonej cetuksymabem i irynotekanem. Podczas gdy badanie KRAS KRAS jest opłacalne dla wszystkich rozważanych strategii, nie jest jednakowo równie opłacalne dla wszystkich opcji leczenia. --- Nasze poprzednie badanie wykazało, że gorące punkty mutacji protoonkogenu K-ras w ludzkich funkcjonalnych guzach kory nadnerczy znajdują się w kodonach 15, 16, 18 i 31, a zatem różniące się od miejsc w innych nowotworach. Ponadto, analizując białko K-Ras za pomocą techniki rekombinacji DNA wykazała, że aktywność endogennej GTPazy i zdolność wiązania białka aktywującego GTPazę (GAP) były znacznie zmniejszona u pacjentów z tymi nowotworami. Celem tego badania było zrozumienie, czy te mutanty K-ras, które znaleziono tylko w ludzkich guzach guzy kory nadnerczy, odgrywają ważną rolę w tych nowotworach. W związku z tym skonstruowano zmutowany K-ras cDNA skonstruowano za pomocą ssaczych wektorów ekspresyjnych i transfekowano do normalnych komórek kory nadnerczy. Ilość kortyzolu wydzielanego przez transfekowane komórki transfekowane komórki była od 20 do 30 razy większa niż w normalnych komórkach. Ponadto, analiza Northern wykazała, że ekspresja trzech genów związanych ze steroidogenezą genów P450(scc) (enzym rozszczepiający łańcuch boczny cholesterolu), P450(C17) (17alfa-hydroksylaza/17, 20-liaza) i P450(C21) (21-hydroksylaza steroidowa) wzrosła w transfekowanych komórkach. wzrosła w transfekowanych komórkach. Onkogen K-ras znacząco zwiększa wydzielanie kortyzolu przez normalne komórki kory nadnerczy. --- Nieprawidłowa sygnalizacja za pośrednictwem receptorów płytkowego czynnika wzrostu (PDGFR) i szlaku Szlak RAS/MAPK został zaangażowany w rozwój rdzeniaka, najczęstszego złośliwego guza mózgu w dzieciństwie. Aby ustalić, czy mechanizmy genetyczne odgrywają rolę w aktywacji sygnalizacji PDGFR-RAS/MAPK w rdzeniakach medulloblastoma, przeprowadziliśmy bezpośrednią analizę sekwencji ustalonych mutacyjnych "gorących punktów" znanych celów aktywujących mutacji w obrębie szlaku (PDGFRA, NRAS, KRAS, HRAS i BRAF) oraz PDFRFB w kohorcie 28 pierwotnych guzów. guzów pierwotnych. Synonimiczna zmiana sekwencji w PDGFRA (CCG do CCA; PRO 567 PRO) wykryto w dwóch przypadkach (około 7%), ale nie w 150 ocenianych prawidłowych chromosomach. chromosomach, co sugeruje, że locus PDGFRA może być związany z rozwojem rozwojem medulloblastoma w niektórych przypadkach. Brak dowodów na obecność mutacji onkogennych mutacji wpływających na NRAS, KRAS, HRAS, BRAF lub PDFRFB. Dane te pokazują, że mutacje aktywujące w ustalonych punktach mutacyjnych w obrębie szlaku PDGFR-RAS/MAPK są rzadkimi zdarzeniami w rozwoju rdzeniaka i sugerują, że alternatywne mechanizmy są odpowiedzialne za aktywację szlaku aktywację szlaku RAS/MAPK w tej chorobie. --- TŁO: Anaplastyczny rak tarczycy (ATC), rzadki i wysoce złośliwy nowotwór, od dawna uważany był za nowotwór i wysoce złośliwy nowotwór, od dawna uważa się, że powstaje z dobrze zróżnicowanego raka (WDC) takich jak rak pęcherzykowy tarczycy (FTC) i rak brodawkowaty tarczycy (PTC). Celem tego badania było sprawdzenie tego pojęcia poprzez zbadanie, czy a jeśli tak, to jak często ATC jest nosicielem onkogenów, które są powszechnie związane z WDC, takich jak z WDC, takie jak RAS w FTC i BRAF w PTC. METODY: Przeanalizowaliśmy gorące punkty mutacji BRAF (kodon 600) oraz N-, K- i H-RAS (kodony 12, K i H-RAS). H-RAS (kodony 12, 13 i 61) w 16 ATC. Zbadaliśmy również dwa geny, PIK3CA (eksony 9 i 20) i TP53 (eksony 5-9), z których oba zostały zgłoszone w ATC. WYNIKI: Wyniki wykazały, że około 31% (5 z 16) ATC zawierało mutację mutację N-RAS, 6% (1 z 16) miało zmutowany BRAF, a około 56% (9 z 16) miało zmutowany TP53. Jeśli chodzi o trzy ATC, które współistniały z PTC, zmutowany BRAF był wykryto we wszystkich składnikach PTC, ale tylko w jednym ATC, podczas gdy zmutowany PIK3CA był wykryto tylko w jednym składniku PTC, ale nie w ATC. WNIOSEK: Wiele ATC powstaje z WDC, częściej z guzów z mutacją RAS niż z guzów z mutacją BRAF, co sugeruje, że należy zwrócić szczególną uwagę na na WDC z mutacją RAS. --- Niepalące kobiety w hrabstwie Xuan Wei w prowincji Yunnan w Chinach, które używają dymiącego węgla do gotowania i ogrzewania w słabo wentylowanych domach mają najwyższy wskaźnik umieralności na raka płuc w Chinach. w Chinach, a ich rak płuc jest powiązany epidemiologicznie z używaniem przez nie węgla z używaniem przez nich dymiącego węgla. Emisje zawierają 81% materii organicznej, z czego 43% to wielopierścieniowe węglowodory aromatyczne (WWA). Ocena narażenia i analiza molekularna i analiza molekularna guzów płuc niepalących kobiet, które używają dymiącego węgla, silnie wskazują, że WWA w emisjach są główną przyczyną podwyższonego zachorowania na raka płuc w tej populacji. raka płuc w tej populacji. W tym przypadku określiliśmy widma mutacji ekstraktu z emisji dymu węglowego w Salmonella TA98 i TA100; ekstrakt nie był mutagenny w TA104. nie był mutagenny w TA104. Ekstrakt był 8,7 x bardziej mutagenny w TA100 z S9 niż bez (8,7 rev/microg w porównaniu do 1,0 rev/microg) i był >3 x bardziej mutagenny w TA100 niż w TA98 - co jest zgodne z istotną rolą WWA w mutagenności ekstraktu, ponieważ WWA mutagenności ekstraktu, ponieważ WWA są ogólnie bardziej mutagenne w TA100 niż w szczepie TA98 z przesunięciem ramki. Ekstrakt indukował tylko mutację hotspot w TA98; inna emisja spalania, kondensat dymu papierosowego (CSC) kondensat dymu papierosowego (CSC), również indukuje tę pojedynczą klasę mutacji. W TA100, widma mutacji ekstraktu nie różniły się znacząco w obecności lub nieobecności obecności lub nieobecności S9 i były głównie (78-86%) GC --> TA. Mutacja ta jest indukowana w podobnym stopniu przez CSC (78%) i PAH benzo[a]piren (B[a]P) (77%). Częstotliwość konwersji GC --> TA indukowanych w Salmonelli przez ekstrakt (78-86%) jest podobna do częstotliwości tej mutacji w TP53 (76%). mutacji w genach TP53 (76%) i KRAS (86%) guzów płuc u niepalących kobiet kobiet narażonych na emisję dymu węglowego. Widma mutacji w ekstrakcie odzwierciedlają obecność WWA w mieszaninie i wspierają rolę WWA w indukcji mutacji i nowotworów. w indukcji mutacji i nowotworów w wyniku narażenia na emisje dymu węglowego. --- Mutacje C742T, G746T, G747T w genie TP53 i G35T w genie KRAS były wielokrotnie wykrywane w sektorach ludzkich nowotworów za pomocą bezpośredniego sekwencjonowania DNA. Mutacja G508A w genie HPRT1 była wielokrotnie wykrywana wśród obwodowych limfocytów T przez klonalne sekwencjonowanie DNA. limfocytów T poprzez ekspansję klonalną w warunkach selektywnych. Aby odkryć, czy mutacje te występują również często w normalnych tkankach, z których powstają nowotwory, opracowaliśmy i zwalidowaliśmy specyficzne dla alleli mutacje amplifikacji niedopasowania (MAMA) dla każdej mutacji. Eksperymenty z rekonstrukcją wykazały liniowość w zakresie 9-3000 zmutowanych alleli wśród 3 x 10(6) alleli typu dzikiego. alleli typu dzikiego. Skumulowane rozkłady wszystkich kontroli negatywnych ustanowiły solidne granice wykrywalności (P<0,05) 34-125 mutantów na 10(6) badanych kopii w zależności od mutacji. Sto siedemdziesiąt siedem próbek mikroanatomicznych próbek około (0,5-6)x10(6) komórek nabłonka tchawiczo-oskrzelowego od dziewięciu osób niepalących, reprezentujących łącznie odpowiednik około 1,6 ludzkiego drzewa oskrzelowego do piątego rozwidlenia. Statystycznie statystycznie istotne liczby kopii mutantów znaleziono w 257 z 463 testów. Klastry zmutowanych kopii wahały się od 10 do 1000 w 239/257 pozytywnych próbkach. Ponieważ wszystkie pięć mutacji punktowych wykryto we frakcjach mutantów >10(-5) w dwóch lub więcej płucach. płucach, wnioskujemy, że są to mutacyjne hotspoty generowane w komórkach macierzystych nabłonka płuc. komórkach macierzystych nabłonka płuc. Ponieważ mutacje związane z rakiem nie różniły się pod względem wielkości klastra od mutacji HPRT1, wnioskujemy, że żadna z mutacji nie dawała przewagi wzrostu somatycznym komórkom macierzystym. zapewniała przewagę wzrostu somatycznym heterozygotycznym klastrom lub jednostkom obrotu jednostek obrotu. Specyficzne mutacje pojawiły się w bardzo dużej liczbie kopii, 1000-35,000, w 18/257 pozytywnych testach. Zaproponowano różne hipotezy wyjaśniające zaobserwowane rozkłady wielkości klastrów. --- Aktywujące mutacje genów BRAF i KRAS powodują konstytutywną stymulację ważnego szlaku sygnalizacji komórkowej promującego nowotworzenie i są coraz częściej uznawane za determinanty odpowiedzi na celowane terapie przeciwnowotworowe. terapie przeciwnowotworowe. Mutacja V600E odpowiada za większość mutacji BRAF w nowotworach, a mutacje KRAS są głównie kodowane przez substytucje nukleotydów w kodonach 12 i 13. kodonów 12 i 13. Zaprojektowaliśmy nowe testy pirosekwencjonowania do wykrywania powszechnych mutacji "hotspot" w tych genach, które wykazały analityczną czułość analityczną <lub=10% w miareczkowaniu zmutowanych linii komórkowych. Test pirosekwencjonowania KRAS ma możliwość jednoczesnej identyfikacji wszystkich potencjalnych zmian nukleotydowych w obrębie zmutowanych linii komórkowych. zmian nukleotydów w obrębie klastra mutacji w kodonach 12 i 13, z sekwencją sekwencji w kierunku sensownym, aby ułatwić interpretację wyników. Testy te zostały wykorzystane do określenia statusu mutacji w prospektywnej serii 1198 sporadycznych raków jelita grubego. Mutacja BRAF V600E została wykryta w 13,2% raków jelita grubego. Częstość występowania mutacji KRAS w naszej kohorcie wynosiła 32,4%, przy czym najbardziej rozpowszechnione były zmiany G>A w pozycji 2 kodonów 12 i 13. i 13. Oba testy okazały się wysoce czułe i specyficzne, gdy zastosowano je do klinicznych i miały zastosowanie zarówno do świeżo mrożonych, jak i utrwalonych w formalinie utrwalonych w formalinie tkanek archiwalnych. Testy te mogłyby służyć jako odpowiednia platforma do wykrywania mutacji na dużą skalę w próbkach raka, w których dostępne jest narzędzie do pirosekwencjonowania.
Jakie są gorące punkty mutacji ludzkiego onkogenu KRAS?
Onkogen KRAS ma cztery główne hotspoty mutacyjne zlokalizowane w kodonach 12, 13, 61 i 146.