Nietolerancja ortostatyczna to wyniszczający zespół charakteryzujący się tachykardią po przyjęciu pozycji pionowej. Transporter noradrenaliny (NE) (NET) został został powiązany z genetyczną postacią tego zaburzenia. Oceniliśmy połączone centralne i obwodowe skutki farmakologicznej blokady NET na regulację układu sercowo-naczyniowego regulację i wrażliwość na barorefleks u szczurów. Wychwyt zwrotny NE został zablokowany przewlekle u samic szczurów Sprague-Dawley przez antagonistę NET desipraminę (DMI). Leczone zwierzęta wykazywały podwyższoną częstość akcji serca na wznak, zmniejszoną reaktywność na tyraminę i zmniejszony stosunek osocza wewnątrzneuronalnego metabolitu NE metabolitu dihydroksyfenyloglikolu w stosunku do NE, z których wszystkie są zgodne z obserwacjami z obserwacjami dotyczącymi niedoboru NET u ludzi. Analiza spektralna ujawniła dramatyczny spadek mocy widmowej o niskiej częstotliwości po DMI, który był zgodny z zmniejszonym odpływem współczulnym. Stymulacja baroreceptorów za pomocą rozszerzającym naczynia nitroprusydkiem ujawniła osłabioną tachykardię u zwierząt leczonych DMI. zwierząt. Wskazuje to, że wywołane przez DMI działanie sympatykomimetyczne NE w pniu mózgu dominuje nad funkcjonalnym wzrostem NE stymulacji celów obwodowych. W ten sposób osłabiona funkcja baroreceptorów i i zmniejszony odpływ współczulny mogą przyczyniać się do nietolerancji ortostatycznej ciężkiego niedoboru NET. --- Transporter noradrenaliny (NET) pośredniczy w wychwycie zwrotnym noradrenaliny uwalnianej z neuronów i jako taki jest ważnym regulatorem neuroprzekaźnictwa neuroprzekaźnictwa noradrenergicznego. Niedawno nasze laboratorium zgłosiło polimorfizm w ludzkim genie NET (hNET) A457P u osoby z zaburzeniem autonomicznym nietolerancją ortostatyczną (OI). Obecność allelu hNET-A457P była związana z podwyższonym tętnem i poziomem NE w osoczu u członków rodziny. hNET-A457P nie wykazuje >98% aktywności transportowej w kilku heterologicznych systemach ekspresji. systemach ekspresji. W niniejszej pracy przeprowadzono analizy Western blot i biotynylacji w przejściowo transfekowanych komórkach COS-7 wykazały upośledzenie przetwarzania hNET-A457P do postaci w pełni glikozylowanej oraz spadek ekspresji powierzchniowej do około 30% hNET typu dzikiego (hNET-wt). Ponieważ mutacja hNET-A457P jest przenoszona na pojedynczym allelu u pacjentów z OI, zbadaliśmy wpływ kotransfekcji hNET-wt i hNET-A457P i stwierdziliśmy, że hNET-A457P wywiera dominująco-ujemny wpływ na aktywność wychwytu hNET-wt. Eksperymenty mające na celu określenie oligomeryzacji jako potencjalnego mechanizmu efektu dominująco-ujemnego wykazały, że hNET-A457P koimmunoprecypituje z i zmniejsza ekspresję powierzchniową Wyniki te pokazują, że hNET-A457P powoduje zaburzenie konformacyjne, które zakłóca ekspresję hNET-wt. zaburzenie konformacyjne, które zakłóca biosyntezę transportera progresję i przemieszczanie się zarówno zmutowanego transportera, jak i hNET-wt. wyniki wyjaśniają molekularny mechanizm zaburzonej homeostazy NE i układu sercowo-naczyniowego u pacjentów z OI z mutacją hNET-A457P. --- CEL: Zespół tachykardii posturalnej (POTS) ma wiele objawów, wśród których głównymi są tachykardia i osłabienie. z których głównymi są tachykardia, osłabienie i nawracające omdlenia podczas stania. Wcześniejsze badania wskazywały na dysfunkcję transportera noradrenaliny. Mutacja kodująca w sekwencji genu transportera noradrenaliny (SLC6A2) została została zgłoszona tylko w 1 rodzinie. Celem niniejszego badania było dalsze scharakteryzowanie roli i regulacji genu SLC6A2 w POTS. METODY I WYNIKI: Odpowiedzi współczulnego układu nerwowego na pochylenie głowy były przez połączenie pomiarów kinetyki noradrenaliny w osoczu i zapisów aktywności nerwów współczulnych mięśni współczulnego układu nerwowego u pacjentów z POTS w porównaniu z pacjentami w grupie kontrolnej. Sekwencja genu SLC6A2 została zbadana w leukocytach od pacjentów z POTS pacjentów z POTS i zdrowych osób z grupy kontrolnej przy użyciu genotypowania polimorfizmów pojedynczego nukleotydu, sekwencjonowanie dwusiarczynowe i testy immunoprecypitacji chromatyny dla modyfikacji histonów i wiązania transkrypcyjnego kompleksu regulatorowego, białka wiążącego metylo-CpG 2. Ekspresja transportera noradrenaliny była niższa u pacjentów z POTS w porównaniu ze zdrowymi ochotnikami. pacjentów z POTS w porównaniu ze zdrowymi ochotnikami. W przypadku braku zmienionej sekwencji genu SLC6A2 lub metylacji promotora, ta zmniejszona ekspresja była bezpośrednio bezpośrednio skorelowana z modyfikacjami chromatyny. WNIOSKI: Proponujemy, aby zdarzenia modyfikujące chromatynę związane z supresją genu SLC6A2 mogą stanowić mechanizm POTS. --- TŁO: Nietolerancja ortostatyczna (OI) to zespół charakteryzujący się światłowstrętem, kołataniem serca, zmęczeniem, niewyraźnym widzeniem, zawrotami głowy, dyskomfortem w klatce piersiowej dyskomfort w klatce piersiowej, zaburzenia poznawcze, a czasami omdlenia. Objawy te zwykle występują po przyjęciu pozycji pionowej i są związane z tachykardią i wysokim stężeniem noradrenaliny w osoczu. stężeniem noradrenaliny w osoczu. Zaproponowano, że mutacja w eksonie w eksonie 9 genu transportera noradrenaliny (Ala457Pro), powodująca ponad 98% utratę funkcji w porównaniu do ponad 98% utratę funkcji w porównaniu z typem dzikim, może stanowić mechanizm patogenetyczny wyjaśniający objawy kliniczne pacjentów z OI. METODY: Przebadaliśmy 46 młodych mężczyzn ze służby wojskowej, którzy zgłosili się do lekarza z powodu porady lekarskiej z powodu zawrotów głowy podczas stania. Każdy pacjent został poddany testowi z monitorowaniem ciśnienia krwi, częstości akcji serca i stężenia katecholamin w osoczu w pozycji leżącej i podczas 30 minut stania. Czternastu pacjentów wykazujących w pełni rozwinięty zespół OI (wzrost częstości akcji serca o 30 uderzeń na minutę i poziom noradrenaliny w osoczu 600 pg/ml noradrenaliny w osoczu podczas stania) poddano bezpośredniemu sekwencjonowaniu DNA eksonu 9 genu transportera noradrenaliny. WYNIKI I WNIOSKI: Specyficzna mutacja (Ala457Pro) nie została wykryta u żadnego z 14 pacjentów z OI. u żadnego z 14 pacjentów z OI. Na podstawie tych ustaleń wątpimy, że ten specyficzny genetyczny defekt transportu jest częstą przyczyną upośledzonego wychwytu noradrenaliny u pacjentów z OI. Jego rutynowe oznaczanie nie będzie zatem pomocne w ustaleniu klinicznej diagnozy OI. --- Nietolerancja ortostatyczna (OI) lub zespół tachykardii posturalnej (POTS) to zespół dotykający głównie młode kobiety. zespół dotykający głównie młode kobiety i charakteryzujący się zawrotami głowy, kołataniem serca, zmęczeniem, zaburzeniami myślenia i omdleniami występującymi głównie występujące głównie w pozycji pionowej i ustępujące po położeniu się. Występuje tachykardia i podwyższony poziom noradrenaliny w osoczu przy wyprostowanej w pozycji pionowej, ale niewielkie lub żadne niedociśnienie ortostatyczne. Patofizjologia OI jest jest uważana za bardzo niejednorodną. Większość badań nad tym zespołem koncentrowała się na nieprawidłowościach w uwalnianiu noradrenaliny. W tym przypadku hipoteza, że nieprawidłowy funkcja transportera noradrenaliny (NET) może przyczyniać się do patofizjologii u niektórych pacjentów z OI. U probanta z ze znacznymi objawami ortostatycznymi i tachykardią, nieproporcjonalnie podwyższone stężenie noradrenaliny noradrenaliny w osoczu w pozycji stojącej, upośledzonym klirensem ogólnoustrojowym i miejscowym norepinefryny, upośledzoną reaktywnością na tyraminę i dysocjacją między stymulowaną norepinefryną Stwierdzono dysocjację między stymulowaną norepinefryną w osoczu a wzrostem DHPG. stwierdzono. Badania struktury genu NET u probanda ujawniły mutację kodującą która przekształca wysoce konserwatywną resztę Ala domeny transbłonowej w Pro. Analiza białka wytwarzanego przez zmutowany cDNA w transfekowanych komórkach wykazała ponad 98% zmniejszenie aktywności w stosunku do normy. NE, DHPG/NE i częstość akcji serca korelowały ze zmutowanym allelem w tej rodzinie. WNIOSEK: Wyniki te stanowią pierwszą identyfikację specyficznego defektu genetycznego defektu genetycznego w OI i pierwszą chorobę związaną ze zmianą kodowania w Na+/Cl(-)-zależnym transporterze neuroprzekaźników. Identyfikacja tego mechanizmu mechanizmu może ułatwić nam zrozumienie genetycznych przyczyn OI i doprowadzić do do opracowania bardziej skutecznych metod terapeutycznych. --- Rola noradrenaliny (NE) w uwadze, pamięci, afektach, stresie, częstości akcji serca i ciśnieniu krwi i ciśnienie krwi wiąże NE z chorobami psychiatrycznymi i sercowo-naczyniowymi. i układu krążenia. Transporter noradrenaliny (NET) pośredniczy w wychwycie zwrotnym uwolnionych katecholamin, odgrywając w ten sposób rolę w ograniczaniu siły sygnalizacji w ośrodkowym i obwodowym układzie nerwowym. w ośrodkowym i obwodowym układzie nerwowym. Niesynonimiczne polimorfizmy pojedynczego nukleotydu polimorfizmów (SNP) w ludzkim genie NET (hNET), które wpływają na funkcję transportera mogą przyczyniać się do chorób, takich jak niefunkcjonalny transporter, A457P, zidentyfikowany w nietolerancji ortostatycznej. Tutaj badamy dodatkowe warianty aminokwasowe które zostały zidentyfikowane, ale nie zostały scharakteryzowane w populacjach które obejmują fenotypy sercowo-naczyniowe. Warianty hNET ulegały ekspresji w komórkach COS-7 i zostały zbadane pod kątem ekspresji białek i traffickingu przy użyciu powierzchni komórek biotynylacji i analizy Western blot, transportu radioznakowanego substratu, interakcji z antagonistą i regulacji poprzez szlaki związane z kinazą białkową C (PKC) przez ester forbolowy beta-phorbol-12-myristate-13-acetate. Zaobserwowaliśmy perturbacje funkcjonalne w 6 z 10 badanych mutantów. Kilka wariantów było wadliwe w handlu i transporcie, z najbardziej dramatycznym efektem zaobserwowanym dla A369P, który był całkowicie pozbawiony w pełni glikozylowanej formy białka transportera glikozylowanej formy białka transportera, została zatrzymana wewnątrzkomórkowo i nie wykazywała żadnej aktywności transportowej. aktywności transportowej. Co więcej, A369P i inny wariant transportu, N292T, hamowały powierzchniową ekspresję hNET podczas koekspresji. F528C wykazał zwiększony transport i, co godne uwagi, wykazywał zarówno niewrażliwość na regulację w dół przez PKC i spadek siły działania trójpierścieniowego leku przeciwdepresyjnego desipraminy. Odkrycia te ujawniają deficyty funkcjonalne, które prawdopodobnie upośledzają sygnalizację NE u nosicieli SNP w populacji i identyfikują kluczowe regiony NET przyczyniające się do biosyntezy, aktywności i regulacji transportera.
Czy gen SLC6A2 jest związany z nietolerancją ortostatyczną?
Tak, warianty genu SLC6A2 (lub NET) są związane z nietolerancją ortostatyczną.