Reumatoidalne zapalenie stawów (RZS) jest symetryczną chorobą wielostawową o nieznanej etiologii. o nieznanej etiologii, która atakuje głównie chrząstkę stawową i kości. Charakterystycznymi cechami patogenezy RZS są uporczywy stan zapalny, przerost błony maziowej i erozja chrząstki. i erozja chrząstki, którym towarzyszy obrzęk i zniszczenie stawów. zniszczenie stawów. Kilka linii dowodów wykazało kluczową rolę aktywowanych aktywowanych synowiocytów fibroblastopodobnych (FLS) w patogenezie RZS. MikroRNA (miRNA) to endogenne, jednoniciowe, niekodujące RNA o długości około 21 nukleotydów. długości i zostały wykryte w różnych źródłach, w tym w tkankach, surowicy, i innych płynach ustrojowych, takich jak ślina. W świetle kluczowej roli miRNA w regulacji ekspresji genów, miRNA regulacji ekspresji genów, miRNA wpływają na szeroki zakres procesów fizjologicznych i patologicznych. i procesów patologicznych. Na przykład, miRNA są widoczne w różnych chorobach złośliwych i niezłośliwych. i niezłośliwych chorobach, a gromadzone dowody wskazują również, że miRNA mają ważną rolę w patogenezie RZS. Wykazano, że miRNA mogą ulegać nieprawidłowej ekspresji nawet na różnych etapach rozwoju RZS, co pozwala miRNA pomóc zrozumieć patogenezę choroby, działać jako jako ważne biomarkery oraz monitorować nasilenie choroby i efekty leczenia farmakologicznego. leczenia farmakologicznego. Ponadto, miRNA pojawiają się jako potencjalne cele dla nowych strategii terapeutycznych tego rodzaju zaburzeń autoimmunologicznych. Ostatecznym celem jest identyfikacja celów miRNA, którymi można manipulować poprzez specyficzne terapie, mające na celu aktywację lub zahamowanie określonych miRNA odpowiedzialnych za rozwój RZS. W niniejszym przeglądzie omówiono znaczenie miRNA w patogenezie RZS. miRNA w patogenezie RZS jest systematycznie omawiane, ze szczególnym naciskiem na rolę przesłuchów między metylacją DNA a maszynerią mikroRNA. --- CEL: Aby wyjaśnić rolę mikroRNA (miRNA) w patogenezie reumatoidalnego zapalenia stawów (RZS) reumatoidalnego zapalenia stawów (RZS), przeanalizowaliśmy synowiocyty od pacjentów z RZS pod kątem ich ekspresji miRNA. ekspresji miRNA. METODY: Synowiocyty pochodzące z próbek chirurgicznych uzyskanych od pacjentów z RZS zostały porównane z tymi uzyskanymi od pacjentów z chorobą zwyrodnieniową stawów (OA) pod kątem ich ekspresji panelu 156 miRNA z ilościową reakcją łańcuchową odwrotnej Reakcja łańcuchowa odwrotnej transkrypcji-polimerazy. MiRNA, których ekspresja zmniejszyła się lub wzrosła w synowiocytach RZS w porównaniu z synowiocytami OA, a ich geny docelowe przewidziano za pomocą analizy komputerowej. Zastosowaliśmy system in vitro system zwiększania ekspresji określonych miRNA poprzez transfekcję prekursorów do synowiocytów prekursorów do synowiocytów, a następnie przeprowadziliśmy testy proliferacji, cyklu komórkowego i apoptozy, i apoptozy, a także testy immunoenzymatyczne na produkcję cytokin. produkcję cytokin. Wpływ transfekcji na przewidywane białko docelowe i RNA (mRNA) zbadano następnie za pomocą analizy Western blot i testu reporterowego lucyferazy. test reporterowy. WYNIKI: Stwierdziliśmy, że poziomy miR-124a znacząco spadły w synowiocytach RA w porównaniu z synowiocytami OA. Transfekcja prekursora miR-124a do synowiocytów RA znacząco hamowała ich proliferację i zatrzymała cykl komórkowy w fazie G1. Zidentyfikowaliśmy przypuszczalne miejsce konsensusu dla wiązania miR-124a w 3'-nietranslowanym regionie kinazy zależnej od cyklin 2 (CDK-2) i białka chemoatraktanta monocytów 1 (MCP-1) mRNA. Indukcja miR-124a w synowiocytach RZS znacząco hamowała produkcję białek CDK-2 i białka MCP-1. Test reporterowy lucyferazy wykazał, że miR-124a specyficznie hamował aktywność reporterową napędzaną przez 3'-nietranslowane regiony regiony CDK-2 i MCP-1 mRNA. WNIOSEK: Wyniki tego badania sugerują, że miR-124a jest kluczowym miRNA w posttranskrypcyjnych mechanizmach regulacyjnych potranskrypcyjnych mechanizmach regulacyjnych synowiocytów RZS. --- CEL: Aby wyjaśnić, czy klaster mikroRNA (miRNA) miR-17-92 przyczynia się do aktywowanego fenotypu fibroblastów reumatoidalnego zapalenia stawów (RASF). fibroblastów (RASF). METODY: Fibroblasty RASF stymulowano czynnikiem martwicy nowotworów α (TNFα) oraz badano ekspresję i regulację miR-17-92. ekspresję i regulację klastra miR-17-92 badano przy użyciu ilościowego PCR (PCR) i testów aktywności promotora. RASF były transfekowane pojedynczymi cząsteczkami prekursorowymi miRNA z miR-17-92 i ekspresją enzymów degradujących macierz i cytokin mierzono za pomocą ilościowego PCR i test immunoenzymatyczny. Potencjalne cele miRNA zostały zidentyfikowane przez obliczeniowe i zostały zweryfikowane przy użyciu testów genów reporterowych i Western blotting. Aktywność sygnalizacji NF-κB określono za pomocą reportera testy genów reporterowych. WYNIKI: Stwierdziliśmy, że TNFα indukuje ekspresję miR-17-92 w RASF w sposób zależny od sposób zależny od NF-κB. Transfekcja RASF cząsteczkami prekursorowymi pojedynczych miR-17-92 ujawniła znacząco zwiększony poziom ekspresji enzymów degradujących macierz, pro enzymów degradujących macierz, cytokin prozapalnych i chemokin w prekursorze miR-18a (pre-miR-18a) - transfekowanych RASF. Wykorzystując testy genów reporterowych zidentyfikowaliśmy inhibitor szlaku NF-κB białko 3 indukowane TNFα jako nowy cel miR-18a. Ponadto, RASF transfekowane pre-miR-18a wykazywały silniejszą aktywację NF-κB, zarówno konstytutywnie, jak i w odpowiedzi na stymulację TNFα. WNIOSEK: Nasze dane sugerują, że pochodzący z miR-17-92 miR-18a przyczynia się do niszczenia chrząstki i przewlekłego stanu zapalnego w stawie poprzez pozytywną pętlę pętlę sprzężenia zwrotnego w sygnalizacji NF-κB, z jednoczesną regulacją w górę enzymów degradujących macierz i mediatorów stanu zapalnego w RASF. --- Podwyższona ekspresja specyficznych mikroRNA (miRNA) w komórkach jednojądrzastych pochodzących z krwi obwodowej (PBMC) komórek jednojądrzastych (PBMC), w szczególności miR-146a i miR-155, jest związana z reumatoidalnym zapaleniem stawów (RZS). Krew pełna nie była badana jako potencjalny materiał materiał kliniczny do monitorowania ekspresji miRNA w RZS. Staraliśmy się czy poziomy miRNA wykryte w próbkach krwi pełnej korelują z poziomami miRNA z tymi wykrytymi w jednocześnie izolowanych jednojądrzastych komórkach krwi obwodowej (PBMC) (PBMC) od tych samych osób, ustalając w ten sposób wykonalność wykorzystania krwi pełnej jako realnego materiału klinicznego do monitorowania ekspresji miRNA w RZS i innych schorzeniach. Wykazaliśmy wysoce znaczącą liniową liniową korelację między ekspresją miR-146a i miR-155 w PBMC i krwi pełnej, zarówno od osób zdrowych, jak i pacjentów z RZS. Próbki krwi pełnej dokładnie odzwierciedlają poziomy miRNA w PBMC i byłyby przydatne w monitorowaniu ekspresji miRNA jako biomarkerów. miRNA jako biomarkerów. Wykrywanie poziomów miRNA w próbkach, które są łatwo w rutynowej praktyce klinicznej, takich jak krew pełna, zwiększa ich potencjalną użyteczność w wykrywaniu zmian ich potencjalną użyteczność w wykrywaniu zmian w mechanizmach immunologicznych immunologicznych leżących u podstaw chorób autoimmunologicznych, takich jak RZS. --- Ostatnio stwierdzono deregulację różnych mikro(mi)RNA w reumatoidalnym zapaleniu stawów (RZS). reumatoidalnego zapalenia stawów (RZS), ale ich rola w patogenezie tej choroby pozostaje przedmiotem dyskusji. pozostaje przedmiotem dyskusji. W międzyczasie coraz więcej dowodów wskazuje na wadliwą funkcję limfocytów T regulatorowych (Treg) w RZS. W niniejszym przeglądzie omówiono istotne badania dotyczące funkcji limfocytów Treg i cytotoksycznego antygenu limfocytów T Antygen 4 w RZS, przedstawia najnowsze dane dotyczące roli miRNA dla homeostazy Tregs homeostazy Treg i koncentruje się na roli miR-155 w Treg. W końcowej perspektywie omawiamy potencjalny wpływ terapeutycznej modulacji miR-155 w RZS. --- WPROWADZENIE: MikroRNA to małe niekodujące cząsteczki RNA, które negatywnie regulują ekspresję genów poprzez degradację lub represję translacji ich docelowych mRNA. Wiadomo, że nieprawidłowa ekspresja mikroRNA może odgrywać ważną rolę w nowotworach. w chorobach nowotworowych, ale rola mikroRNA w chorobach autoimmunologicznych dopiero zaczyna się pojawiać. dopiero zaczyna się pojawiać. W tym badaniu ekspresja wybranych mikroRNA jest w reumatoidalnym zapaleniu stawów. METODY: Całkowity RNA został wyizolowany z komórek jednojądrzastych krwi obwodowej uzyskanych od pacjentów z reumatoidalnym zapaleniem stawów oraz od osób zdrowych i kontrolujących chorobę. oraz ekspresję miR-146a, miR-155, miR-132, miR-16 i mikroRNA let-7a. mikroRNA let-7a analizowano przy użyciu ilościowego PCR w czasie rzeczywistym. WYNIKI: Komórki jednojądrzaste krwi obwodowej w reumatoidalnym zapaleniu stawów wykazywały między 1,8-krotnym a 2,6-krotnym wzrostem ekspresji miR-146a, miR-155, miR-132 i miR-16, podczas gdy ekspresja let-7a nie różniła się znacząco w porównaniu ze zdrowymi osobami kontrolnymi. Ponadto, dwa cele miR-146a, mianowicie czynnik związany z receptorem czynnika martwicy nowotworów 6 (TRAF6) i kinaza związana z receptorem IL-1 kinazy związanej z receptorem IL-1 (IRAK-1), były podobnie wyrażone między pacjentów z reumatoidalnym zapaleniem stawów i osób z grupy kontrolnej, pomimo zwiększonej ekspresji ekspresji miR-146a u pacjentów z reumatoidalnym zapaleniem stawów. Represja TRAF6 i/lub IRAK-1 w komórkach THP-1 skutkowała nawet 86% redukcją produkcji czynnika martwicy nowotworu czynnika martwicy nowotworów alfa, co sugeruje, że normalna funkcja miR-146a jest ma kluczowe znaczenie dla regulacji produkcji czynnika martwicy nowotworów alfa. WNIOSKI: Ostatnie badania wykazały, że tkanka maziowa i fibroblasty maziowe fibroblasty od pacjentów z reumatoidalnym zapaleniem stawów wykazują zwiększoną ekspresję niektórych mikroRNA. niektórych mikroRNA. Nasze dane pokazują zatem, że ekspresja mikroRNA w reumatoidalnym zapaleniu stawów w komórkach jednojądrzastych krwi obwodowej naśladuje ekspresję w tkance maziowej/fibroblastach. tkanki/fibroblastów. Zwiększona ekspresja mikroRNA u pacjentów z reumatoidalnym zapaleniem stawów u pacjentów z reumatoidalnym zapaleniem stawów jest potencjalnie przydatna jako marker diagnozy choroby, progresji, lub skuteczności leczenia, ale będzie to wymagało potwierdzenia przy użyciu dużej i dobrze dobrze zdefiniowanej kohorty. Nasze dane sugerują również możliwy mechanizm przyczyniający się do patogenezę reumatoidalnego zapalenia stawów, w którym ekspresja miR-146a jest zwiększona, ale ale nie jest w stanie prawidłowo funkcjonować, co prowadzi do przedłużonej produkcji czynnika martwicy nowotworów alfa u pacjentów z reumatoidalnym zapaleniem stawów. --- CEL: MikroRNA (miRNA) pojawiły się ostatnio jako nowa klasa modulatorów ekspresji genów. ekspresji genów. W tym badaniu zbadaliśmy ekspresję, regulację, i funkcję miR-155 i miR-146a w reumatoidalnym zapaleniu stawów (RZS) w maziówce fibroblastach (RASF) i tkance maziowej RZS. METODY: Zablokowana mikromacierz kwasów nukleinowych została wykorzystana do zbadania różnic w ekspresji miRNA w RASF leczonych czynnikiem martwicy nowotworów alfa (TNFalfa). Reakcja łańcuchowa polimerazy w czasie rzeczywistym oparta na TaqMan została zastosowana do pomiaru poziomów poziomów miR-155 i miR-146a. Wymuszona nadekspresja miR-155 została wykorzystana do zbadania funkcji miR-155 w RASF. WYNIKI: Analiza mikromacierzy miRNA wyrażonych w RASF traktowanych TNFalfa ujawniła znaczącą regulację w górę miR-155. Konstytutywna ekspresja zarówno miR-155 i miR-146a była wyższa w RASF niż u pacjentów z chorobą zwyrodnieniową stawów (OA), a ekspresja miR-155 może być dalej indukowana przez TNFalfa, interleukinę-1beta, lipopolisacharyd, poli(I-C) i bakteryjne lipoproteiny. lipoproteiny bakteryjne. Ekspresja miR-155 w tkance maziowej RZS była wyższa niż w tkance maziowej OA. Stwierdzono, że wymuszona ekspresja miR-155 w RASF tłumi poziomy metaloproteinazy macierzy 3 (MMP-3) i zmniejszają indukcję MMPs 3 i 1 przez ligandy receptora Toll-podobnego i cytokiny. Ponadto, w porównaniu z monocytami z krwi obwodowej RZS, monocyty płynu maziowego RZS wykazywały wyższy poziom miR-155. WNIOSEK: Niniejsze badanie dostarcza pierwszego opisu zwiększonej ekspresji miRNA miRNA miR-155 i miR-146a w RZS. Na podstawie tych ustaleń postulujemy, że środowisko środowisko zapalne może zmieniać profile ekspresji miRNA w rezydentnych komórkach stawów reumatoidalnych. reumatoidalnych stawów. Biorąc pod uwagę represyjny wpływ miR-155 na ekspresję ekspresję MMPs 3 i 1 w RASF, stawiamy hipotezę, że miR-155 może być zaangażowany w w modulację destrukcyjnych właściwości RASF. --- Szeroko zakrojone badania wykazały, że nieprawidłowa ekspresja mikroRNA (miRNA) odgrywa ważną rolę we wrodzonych i adaptacyjnych odpowiedziach immunologicznych. Polimorfizm rs2910164 został zidentyfikowany jako wariant funkcjonalny, który wpływa na transkrypcję i poziom ekspresji miRNA. transkrypcję i poziom ekspresji miR-146a, a tym samym przyczynia się do patogenezę kilku chorób zapalnych i autoimmunologicznych. Aby zbadać czy polimorfizm rs2910164 G/C był związany z astmą, toczniem rumieniowatym układowym toczniem rumieniowatym układowym (SLE) lub młodzieńczym reumatoidalnym zapaleniem stawów (JRA). badanie asocjacyjne w meksykańskiej kohorcie pediatrycznej. Uwzględniliśmy 979 pacjentów pediatrycznych pacjentów (astma: 402, SLE: 367 i JRA: 210) i 531 osób z grupy kontrolnej bez chorób zapalnych lub immunologicznych. Genotypowanie przeprowadzono przy użyciu techniki 5' techniką egzonukleazy. Rozkład genotypów polimorfizmu rs2910164 był w równowadze Hardy'ego-Weinberga w każdej grupie. Nie wykryto znaczących różnic wykryto w rozkładzie tego polimorfizmu między przypadkami i kontrolami (P = 0,108, 0,609 i 0,553 dla osób z astmą, JRA i SLE, odpowiednio). Jednak stratyfikacja według płci wykazała statystycznie statystycznie istotną różnicę między astmatycznymi i kontrolnymi kobietami, gdzie allel C był istotnie związany z ochroną przed astmą (iloraz szans = 0,694, 95% przedział ufności przedział ufności 0,519-0,929, P = 0,0138). Nasze wyniki dostarczają dowodów na to, że rs2910164 może odgrywać rolę w podatności na astmę występującą w dzieciństwie, ale ale nie SLE lub JRA u Meksykanów. Dalsze badania asocjacyjne mogą przyczynić się do określenia roli polimorfizmów pojedynczego nukleotydu miR-146a w chorobach immunologicznych. chorobach o podłożu immunologicznym. --- WPROWADZENIE: Coraz więcej dowodów wskazuje, że mikroRNA (miRNA) odgrywają kluczową rolę w patogenezie chorób zapalnych. kluczową rolę w patogenezie chorób zapalnych. Celem badania było zbadanie wzorca ekspresji i funkcji miRNA w limfocytach T CD4+ od pacjentów z reumatoidalnym zapaleniem stawów (RZS). METODY: Profil ekspresji miRNA w komórkach T CD4+ z płynu maziowego (SF) i krwi obwodowej (SF) i krwi obwodowej 33 pacjentów z RZS określono za pomocą testu mikromacierzy i zweryfikowano za pomocą analizy qRT-PCR. Korelacja między zmienioną ekspresją miRNA a poziomem cytokin określono za pomocą analizy regresji liniowej. The nadekspresji miR-146a w regulacji apoptozy komórek T oceniano za pomocą cytometrii przepływowej. cytometrii przepływowej. Następnie przeprowadzono analizę ekspresji genów w całym genomie w celu zidentyfikować geny regulowane przez miR-146a w komórkach T. WYNIKI: Analiza profilu ekspresji miRNA ujawniła, że ekspresja miR-146a była znacząco wzrosła, podczas gdy miR-363 i miR-498 uległy obniżeniu w komórkach T CD4+ pacjentów z RZS. pacjentów z RZS. Poziom ekspresji miR-146a był dodatnio skorelowany z poziomami z poziomem czynnika martwicy nowotworów alfa (TNF-alfa), a badania in vitro wykazały, że TNF-alfa zwiększał ekspresję miR-146a w komórkach T. Co więcej, nadekspresja miR-146a hamuje apoptozę komórek T Jurkat. Wreszcie, analiza transkryptomu nadekspresji miR-146a w komórkach T zidentyfikowała Fas 1 (FAF1) jako gen regulowany przez miR-146a, który był krytycznie zaangażowany w modulowanie apoptozy komórek T. WNIOSKI: Wykryliśmy zwiększone stężenie miR-146a w komórkach T CD4+ pacjentów z RZS i jego ścisłą korelację z poziomami TNF-alfa. Nasze odkrycia, że nadekspresja miR-146a hamuje apoptozę limfocytów T wskazują na rolę miR-146a w patogenezie RA w patogenezie RZS i dostarczają potencjalnych nowych celów terapeutycznych. --- CEL: Identyfikacja nowych związków mikroRNA (miR) w fibroblastach maziowych (SF), poprzez profilowanie ekspresji miR na komórkach wyizolowanych z ludzkiego transgenicznego modelu myszy transgenicznego mysiego modelu czynnika martwicy nowotworów (TNF) (TghuTNF, Tg197) i biopsjach pacjentów. biopsji pacjentów. METODY: Ekspresja miR w SF od myszy TghuTNF i myszy kontrolnych typu dzikiego (WT) została przez głębokie sekwencjonowanie miR (miR-seq), a profil artretyczny został ustalono przez porównania parami. Ilościowa analiza PCR została wykorzystana do walidacji profilu, miR i kwantyfikacji genów w SF pacjentów. Dysregulowane geny docelowe miR i szlaki zostały przewidziane za pomocą algorytmów bioinformatycznych i zweryfikowano za pomocą eksperymentów z wykorzystaniem funkcji wzmocnienia połączonych z testami reporterowymi. WYNIKI: miR-seq wykazał, że TghuTNF-SF wykazują odrębny profil patogenetyczny z 22 istotnie regulowanymi w górę i 30 istotnie regulowanymi w dół miR. miR. Testy walidacyjne potwierdziły dysregulację miR-223, miR-146a i miR-155, wcześniej związanych z patologią ludzkiego reumatoidalnego zapalenia stawów (RZS), jak również a także miR-221/222 i miR-323-3p. Warto zauważyć, że te ostatnie zostały również istotnie podwyższony poziom miR-221/222 i miR-323-3p, co po raz pierwszy sugeruje ich związek z patologią RZS. związek z patologią RZS. Analiza bioinformatyczna zasugerowała sygnalizację Wnt/cadherin Nadekspresja miR-323-3p zwiększała aktywację szlaku Wnt i zmniejszała jego aktywność. zwiększa aktywację szlaku Wnt i obniża poziomy jego przewidywanego celu β-transducyny zawierającej powtórzenia, inhibitora β-kateniny. WNIOSKI: Wykorzystanie profilowania opartego na miR-seq w SF z mysiego modelu TghuTNF i walidacji w biopsjach pacjentów z RZS, autorzy zidentyfikowali miR-221/222 i miR-323-3p jako nowe dysregulowane miR w RZS SF. Ponadto autorzy wykazali, że że miR-323-3p jest pozytywnym regulatorem sygnalizacji WNT/kadheryny w RZS SF sugerując jego potencjalny udział w patogenezie i przyszłe zastosowanie jako celu terapeutycznego w RZS. cel terapeutyczny w RZS. --- CELE: Reumatoidalne zapalenie stawów (RZS) jest przewlekłą chorobą zapalną z wieloma czynnikami genetycznymi wiele czynników genetycznych predysponujących do podatności na chorobę. MikroRNA są nową odkrytą klasą cząsteczek, które uczestniczą w posttranskrypcyjnej regulacji ekspresji genów. regulacji ekspresji genów. Stwierdzono, że mikroRNA-146a jest zwiększony w fibroblastach fibroblastach błony maziowej, tkance maziowej i PBMC od pacjentów z RZS. Celem niniejszego badania było ujawnienie, czy istnieje jakikolwiek związek wariantu miRNA-146a wariantu rs2910164 i dwóch kinaz związanych z receptorem interleukiny (IL) 1 (IRAK1, gen docelowy mir-146a) rs3027898 i rs1059703 z predyspozycją do RZS. predyspozycją. METODY: Do badania włączono stu trzydziestu sześciu pacjentów z RZS i 147 osób z grupy kontrolnej. w badaniu. WYNIKI: Zaobserwowano silną statystycznie istotną różnicę w IRAK1 rs3027898 A > C między pacjentami z RZS i grupą kontrolną (p = 0,044), która była wyższa porównując rozkład allelu A vs. allelu C pomiędzy badanymi grupami (p = 0,017). WNIOSEK: Jest to pierwsze badanie, które dotyczy powiązania wariantu w celu celu miR-146a, genie IRAK1, z podatnością na RZS. Dalsze badania w innych grupach etnicznych pacjentów mogłyby pomóc w zrozumieniu zakresu proponowanego związku. związku. --- CEL: Kilka mikroRNA, które są około 22-nukleotydowymi niekodującymi RNA, wykazuje ekspresję specyficzną dla tkanki lub etapu rozwoju. RNA, wykazują ekspresję specyficzną dla tkanki lub etapu rozwoju i są związane z chorobami człowieka. Celem tego badania było zidentyfikowanie wzorca ekspresji mikroRNA-146 (miR-146) w tkance maziowej od pacjentów z reumatoidalnym zapaleniem stawów (RZS). METODY: Ekspresja miR-146 w tkance maziowej od 5 pacjentów z RZS, 5 pacjentów z chorobą zwyrodnieniową stawów (OA) i 1 osoby zdrowej analizowano metodą ilościową reakcję łańcuchową odwrotnej transkrypcji-polimerazy (RT-PCR) oraz hybrydyzację in hybrydyzację in situ i immunohistochemię skrawków tkanek. Indukcja miR-146 po stymulacji czynnikiem martwicy nowotworów alfa (TNFalfa) i interleukiną-1beta (IL-1beta) hodowli ludzkich fibroblastów reumatoidalnego zapalenia stawów (RASF). (RASF) zbadano za pomocą ilościowego PCR i RT-PCR. WYNIKI: Dojrzały miR-146a i pierwotny miR-146a/b ulegały wysokiej ekspresji w tkance maziowej RA tkance maziowej, która również wyrażała TNFalfa, ale 2 mikroRNA były mniej w OA i normalnej tkance maziowej. Hybrydyzacja in situ wykazała pierwotną ekspresję miR-146a w komórkach warstwy powierzchownej i podścieliska w tkance maziowej pacjentów z RZS. w tkance maziowej pacjentów z RZS. Komórki pozytywne dla miR-146a były przede wszystkim CD68+ makrofagi, ale obejmowały kilka podgrup komórek T CD3+ i komórek B CD79a+. Ekspresja miR-146a/b była znacznie zwiększona w RASF po stymulacji TNFalfa i IL-1beta. WNIOSEK: Badanie to pokazuje, że miR-146 ulega ekspresji w tkance maziowej RZS oraz że jego ekspresja jest indukowana przez stymulację TNFalfa i IL-1beta. Konieczne są dalsze badania w celu wyjaśnienia funkcji miR-146 w tych tkankach. tkankach. --- miRNA pojawiły się ostatnio jako kluczowe regulatory układu odpornościowego, będąc zaangażowane w selekcję i proliferację limfocytów, różnicowanie komórek T(reg) i ogólnie w hematopoezie. Reumatoidalne zapalenie stawów (RZS) jest autoimmunologiczną patologią, której etiologia jest wciąż niejasna. Chociaż wieloczynnikową patogenezę, dokładne mechanizmy prowadzące do choroby są nadal słabo poznane. prowadzące do choroby są nadal słabo poznane na poziomie molekularnym. miRNA wykazała, że miR-223 jest jedynym miRNA, który jest w obwodowych limfocytach T od pacjentów z RZS w porównaniu ze zdrowymi dawcami. ze zdrowymi dawcami. Dalsza analiza za pomocą ilościowej analiza łańcucha odwrotnej transkrypcji-polimerazy potwierdziła, że miR-223 ulega nadekspresji w limfocytach T od pacjentów z RZS (n = 28) w porównaniu ze zdrowymi dawcami (n = 10). Ponadto, oczyszczanie różnych populacji limfocytów T od pacjentów z RZS podkreśla, że miR-223 ulega ekspresji na wyższych poziomach w naiwnych limfocytach CD4(+) limfocytach, podczas gdy jego ekspresja jest ledwo wykrywalna w komórkach T(h)-17. Podsumowując Podsumowując, nasze dane dostarczają pierwszej charakterystyki ekspresji miRNA obwodowych limfocytów T pacjentów z RZS, identyfikując miR-223 jako nadekspresję w naiwnych limfocytach T CD4(+) od tych osób. Głębsza głębsza analiza funkcji biologicznych i skutków ekspresji miR-223 w limfocytach T limfocytach T jest potrzebna, aby wyjaśnić dokładny związek między naszą obserwacją a chorobą. chorobą. --- Polimorfizmy pojedynczych nukleotydów w pre-mikroRNA (miRNA) mogą zmieniać poziomy ekspresji lub przetwarzania miRNA poziomy ekspresji lub przetwarzania i przyczyniać się do podatności w szerokim zakresie chorób. Niniejsze badanie miało na celu ocenę możliwego związku między polimorfizmami rs2910164 i rs3746444 pre-miRNA (hsa-mir-146a i hsa-mir-499) a podatnością na wiele chorób. a podatnością na reumatoidalne zapalenie stawów (RZS) w irańskiej populacji. populacji. Badanie kliniczno-kontrolne przeprowadzono na 104 pacjentach z RZS i 110 zdrowych osobach. 110 zdrowych osób. Mutacja oporna na tetra amplifikację reakcja łańcuchowa polimerazy została wykorzystana do genotypowania hsa-mir-499 rs3746444 i polimorfizmu hsa-mir-146a rs2910164. Polimorfizm hsa-mir-499 rs3746444 był czynnikiem ryzyka predyspozycji do RZS w kodominacji [TT vs. TC: iloraz szans (OR), 2,11; 95% przedział ufności (CI), 1,08-4,11; p=0,029; TT vs. CC: OR, 3,88; 95% CI, 1,68-8,98; p=0,002], dominujący (TT vs. TC-CC: OR, 2,64; 95% CI, 1,48-4,72; p=0,001) i recesywną (TC-CC vs. CC: OR, 3,05; 95% CI, 1,36-6,83; p=0,007) badanych modeli dziedziczenia. Ponadto rs3746444 C był czynnikiem ryzyka RZS (OR, 2,49; 95% CI, 1,63-3,81; p<0.0001). Nie stwierdzono istotnej różnicy między grupami w odniesieniu do polimorfizmu rs2910164 (χ2=0,348, p=0,841). Nasze wyniki wykazały, że polimorfizm hsa-mir-499 rs3746444, ale nie mir-146a rs2910164, polimorfizm jest związany ze zwiększonym ryzykiem RZS w próbie populacji irańskiej. Większe badania z różnymi grupami etnicznymi są wymagane do potwierdzenia naszych ustaleń. --- WPROWADZENIE: MikroRNA (miRNA) to grupa niekodujących RNA o długości 20-22 nukleotydów. nukleotydów, które hamują ekspresję genów docelowych poprzez degradację mRNA degradację i hamowanie translacji. Gen kodujący miR-323-3p, który jest biomarkerem biomarkerem w odpowiedziach immunologicznych i zapalnych, istnieje w klastrze miRNA w regionie chromosomalnym 14q32.31. Wykazano, że miR-323-3p wiąże się z patogenezą kilku chorób. patogenezą kilku chorób, takich jak reumatoidalne zapalenie stawów, choroba Alzheimera i ciąża pozamaciczna. choroba Alzheimera i ciąża pozamaciczna. OBSZARY OBJĘTE PRZEGLĄDEM: Niniejszy przegląd przedstawia aktualny pogląd na związek miR-323-3p z kilkoma chorobami człowieka i koncentruje się na ostatnich badaniach nad regulacją miR-323-3p, omawiając jego potencjał jako biomarkera epigenetycznego i celu terapeutycznego w tych chorobach. cel terapeutyczny dla tych chorób. W szczególności, mechanizmy miR-323-3p w tych chorobach i w jaki sposób miR-323-3p jest regulowany. OPINIA EKSPERTA: Chociaż dokładna rola miR-323-3p w tych chorobach nie została w pełni wyjaśniona. nie została w pełni wyjaśniona, celowanie w miR-323-3p może służyć jako obiecująca strategia terapeutyczna. strategia. --- Biomarkery to wskaźniki warunków biologicznych, które można wykryć i zmierzyć w płynach ustrojowych lub tkankach. mierzone w płynach ustrojowych lub tkankach. Biomarkery mogą być wykrywalne przed klinicznym początkiem choroby, a zatem są przydatne w prognozowaniu; mogą być mierzone na wczesnych etapach choroby i są przydatne do stratyfikacji i klasyfikacji choroby i pacjentów. klasyfikacji choroby i pacjentów; mogą być monitorowane wzdłuż i wykorzystywane jako wskaźniki czynników ryzyka i odpowiedzi farmakologicznej na leczenie. czynników ryzyka i odpowiedzi farmakologicznej na leczenie. W idealnej sytuacji biomarkery powinny być czułe, specyficzne, mieć wysoką moc predykcyjną i być łatwo dostępne. Reumatoidalne zapalenie stawów (RZS) jest najczęstszą przewlekłą chorobą zapalną, dotykającą miliony ludzi na całym świecie i prowadzącą do na całym świecie i prowadzi do uszkodzenia stawów i znacznej zachorowalności. RZS jest heterogenicznym zaburzeniem o zmiennym przebiegu klinicznym i nieprzewidywalnym rokowaniu. nieprzewidywalnym rokowaniem. I chociaż klinicyści mają do dyspozycji duży panel leków biologicznych, głównym wyzwaniem pozostaje jak najwcześniejsze leczenie pacjentów za pomocą najbardziej spersonalizowanej terapii. spersonalizowaną terapią. Obecnie największym wyzwaniem w RZS jest identyfikacja biomarkerów do wczesnego diagnozowania choroby i przewidywania odpowiedzi na leki. odpowiedzi na leki. Wśród cząsteczek, które mogą spełnić te oczekiwania, mikro(mi)-RNA z pewnością stanowią jedną z opcji. Potencjalną wartość miRNA jako nowej klasy biomarkerów biomarkerów jest dobrze udokumentowana w nowotworach. Co więcej, obecność i stabilność miRNA w płynach ustrojowych zapewniają odciski palców, które mogą służyć jako molekularne molekularne biomarkery do diagnozowania chorób i wyników terapeutycznych. Ponieważ rosnąca liczba dowodów ujawnia nieprawidłową ekspresję określonych miRNA w tkankach RZS, zastosowanie sygnatury miRNA miRNA we krwi dla optymalnej diagnozy i leczenia staje się realną opcją. i leczenia staje się realistyczną opcją. --- Wstęp: Interleukina (IL)-17 jest ważnym czynnikiem w patogenezie reumatoidalnego zapalenia stawów (RZS). (RZS). MikroRNA (miRNA) to rodzina niekodujących RNA i są związanych z chorobami ludzkimi, w tym RZS. Celem tego badania jest zidentyfikowanie miRNA w różnicowaniu komórek wytwarzających IL-17 i przeanalizowanie ich wzoru ekspresji w komórkach jednojądrzastych krwi obwodowej (PBMC) i maziówce pacjentów z RZS. błony maziowej pacjentów z RZS. METODY: Komórki produkujące IL-17 zostały wyhodowane z komórek CD4+T. Mikromacierz miRNA przeprowadzono w celu identyfikacji miRNA w różnicowaniu komórek produkujących IL-17 komórek. Przeprowadzono ilościową reakcję łańcuchową polimerazy w celu zbadania wzorców ekspresji wzorców ekspresji zidentyfikowanych miRNA w PBMC i błonie maziowej z RZS i pacjentów z chorobą zwyrodnieniową stawów (OA). Podwójne barwienie łączące hybrydyzację in situ hybrydyzację in situ i immunohistochemię IL-17 w celu przeanalizowania wzoru ekspresji ekspresji zidentyfikowanych miRNA w błonie maziowej. WYNIKI: Sześć miRNA, let-7a, miR-26, miR-146a/b, miR-150 i miR-155 było znacząco regulowanych znacząco regulowane w limfocytach T produkujących IL-17. Ekspresja miR-146a i IL-17 była wyższa niż w PBMC u pacjentów z niską oceną stopnia Larsena i krótkim czasem trwania choroby. MiR-146a ulegał intensywnej ekspresji w maziówce RA w porównaniu do OA. MiR-146a ulegał intensywnej ekspresji w błonie maziowej z i wysoką ekspresją IL-17 u pacjentów z wysoką aktywnością choroby. aktywnością choroby. Podwójne barwienie ujawniło, że miR-146a ulega ekspresji w komórkach wyrażających IL-17 komórek. WNIOSEK: Wyniki te wskazują, że miR-146a był związany z ekspresją IL-17 w PBMC i błonie maziowej u pacjentów z RZS. Istnieje możliwość że miR-146a uczestniczy w ekspresji IL-17. --- Reumatoidalne zapalenie stawów (RZS) jest ogólnoustrojową, zapalną chorobą autoimmunologiczną z postępującym uszkodzeniem stawów. postępującym uszkodzeniem stawów, które może prowadzić do niepełnosprawności na całe życie. Chociaż Chociaż poczyniono znaczne postępy w zrozumieniu choroby, patogeneza RZS nie została jeszcze w pełni wyjaśniona. RZS nie została jeszcze w pełni wyjaśniona. Wczesne leczenie może zapobiec niepełnosprawności i prowadzić do znacznych korzyści dla pacjentów, chociaż brak brak skuteczności terapeutycznej u znacznej liczby pacjentów. MikroRNA (miRNA) to małe, niekodujące RNA, które w zależności od parowania zasad z informacyjnym RNA (mRNA), pośredniczą w rozszczepianiu mRNA, represji translacji lub destabilizacji mRNA. destabilizację. Jako precyzyjne regulatory ekspresji genów, miRNA są zaangażowane w kluczowe procesy komórkowe, a ich dysregulacja została opisano w wielu typach komórek w różnych chorobach. W płynach ustrojowych, miRNA są obecne w mikropęcherzykach lub wbudowane w kompleksy z Argonaute 2 (Ago2) lub lipoproteinami o dużej gęstości i wykazują wysoką stabilność. Dlatego są one jako potencjalne biomarkery chorób w codziennych zastosowaniach diagnostycznych. Ukierunkowanie miRNA poprzez podejście zysku lub utraty funkcji przyniosło efekty terapeutyczne w różnych modelach zwierzęcych. terapeutyczne w różnych modelach zwierzęcych. W ciągu ostatnich kilku lat stało się stało się jasne, że istnieją zmiany w ekspresji miRNA u pacjentów z RZS. Rosnąca liczba badań wykazała, że dysregulacja miRNA w komórkach jednojądrzastych krwi obwodowej komórkach jednojądrzastych krwi obwodowej lub izolowanych limfocytach T, w tkance maziowej i fibroblastach maziowych, które są uważane za kluczowe komórki efektorowe w niszczeniu stawów przyczynia się do stanu zapalnego, degradacji macierzy zewnątrzkomórkowej i inwazyjnego zachowania komórek rezydentnych. W ten sposób miRNA utrzymują proces patofizjologiczny typowy dla RZS. Celem niniejszego przeglądu jest omówienie dostępnych dowodów łączących ekspresję miRNA z odpowiedzią zapalną i odpowiedzią immunologiczną w RZS oraz ich potencjału jako biomarkerów i nowych w leczeniu pacjentów z RZS. --- MikroRNA (miRNA) reprezentują klasę niekodujących cząsteczek RNA odgrywających kluczową rolę w procesach komórkowych i rozwojowych. miRNA modulują ekspresję wielu genów docelowych na poziomie posttranskrypcyjnym i przewiduje się, że odgrywają kluczową rolę w procesach komórkowych i rozwojowych. wielu genów docelowych na poziomie posttranskrypcyjnym i przewiduje się, że wpływać nawet na jedną trzecią wszystkich ludzkich genów kodujących białka. Ostatnio, miRNA w adaptacyjnym i wrodzonym układzie odpornościowym. Reumatoidalne zapalenie stawów jest przykładem przewlekłej choroby zapalnej, w której w którym miRNA modulują proces zapalny w stawach, z potencjałem służyć jako biomarkery zarówno procesu zapalnego, jak i potencjalnej odpowiedzi terapeutycznej. odpowiedzi terapeutycznej. W niniejszym przeglądzie omówiono badania, które doprowadziły do odkrycia miRNA miRNA, biogenezę miRNA i sposób ich działania, a także różnorodne role miRNA w modulowaniu odpowiedzi immunologicznej i zapalnej. Na zakończenie przedstawiamy biologii miRNA w reumatoidalnym zapaleniu stawów i innych chorobach autoimmunologicznych. innych zaburzeniach autoimmunologicznych. --- CEL: Zbadanie ekspresji i wpływu rodziny mikroRNA-34 (miR-34) na apoptozę w fibroblastach błony maziowej reumatoidalnego zapalenia stawów (RASF). METODY: Ekspresja rodziny miR-34 w fibroblastach maziowych z lub bez stymulacją ligandami receptora Toll-podobnego (TLR), czynnikiem martwicy nowotworów α (TNFα), interleukiną-1β (IL-1β), niedotlenieniem lub 5-azacytydyną analizowano za pomocą reakcję łańcuchową polimerazy w czasie rzeczywistym (PCR). Metylacja promotora była badana przez połączoną analizę restrykcji bisiarczynowej. Efekty nadekspresji i miR-34a i miR-34a* na apoptozę analizowano za pomocą aneksyny V/barwienie jodkiem propidyny. Produkcję białka X-linked inhibitor of apoptosis (XIAP) oceniano za pomocą PCR w czasie rzeczywistym i analizy immunohistochemicznej. Test genów reporterowych został wykorzystany do zbadania szlaków sygnałowych miR-34a*. WYNIKI: Stwierdzono, że podstawowe poziomy ekspresji miR-34a* są obniżone w fibroblastach maziowych fibroblastów maziowych od pacjentów z RZS w porównaniu do pacjentów z chorobą zwyrodnieniową stawów, podczas gdy poziomy miR-34a, miR-34b/b* i miR-34c/c* nie różniły się. Ani TNFα, IL-1β, ligandy TLR, ani hipoksja nie zmieniały ekspresji miR-34a*. Jednakże wykazaliśmy, że promotor miR-34a/34a* był metylowany i wykazaliśmy, że transkrypcja dupleksu miR-34a była indukowana po leczeniu środkami demetylującymi. Wymuszona ekspresja miR-34a* prowadziła do zwiększonego wskaźnika apoptozy za pośrednictwem FasL i TRAIL w RASF. Co więcej, poziomy miR-34a* były silnie skorelowane z ekspresją XIAP, który okazał się być w komórkach maziowych RZS. Wreszcie, zidentyfikowaliśmy XIAP jako bezpośredni cel miR-34a*. WNIOSEK: Nasze dane dostarczają dowodów na specyficzną dla metylacji regulację w dół proapoptotycznego miR-34a* w RASF. Zmniejszona ekspresja miR-34a* skutkuje w górę jego bezpośredniego celu XIAP, przyczyniając się w ten sposób do oporności RASF na apoptozę. --- Mechanizmy epigenetyczne w regulacji ekspresji genów wydają się być kolejnym obszarem badań dziedziną badań, która zyskuje na znaczeniu w genetycznych badaniach asocjacyjnych czynników czynników podatności na reumatoidalne zapalenie stawów (RZS). Niedawno odkryto nową klasę cząsteczek, mikroRNA. mikroRNA (miRNA). miRNA są związane z posttranskrypcyjną regulacją genów. potranskrypcyjną regulacją ekspresji genów. Różne wzorce ekspresji mir-146a, miRNA-155, miRNA-124a, mir-203, mir-223, mir-346, mir-132, mir-363, mir-498, mir-15a i mir-16 udokumentowano w kilku próbkach tkanek pacjentów z RZS. próbek tkanek pacjentów z RZS. Polimorfizmy tych miRNA i ich docelowych genów, które wcześniej były związane z RZS lub innymi chorobami autoimmunologicznymi. zostały również przeanalizowane. Wreszcie, korzystając z narzędzi internetowych, proponujemy polimorfizmy miRNA i ich celów genowych, które warto zbadać pod kątem ich roli w predyspozycji do RZS. w predyspozycji do RZS. --- MikroRNA (miRNA) to małe niekodujące cząsteczki RNA, które negatywnie regulują ekspresję genów na poziomie posttranskrypcyjnym. ekspresję genów na poziomie potranskrypcyjnym. Obecnie istnieje 939 dojrzałych ludzkich sekwencji miRNA wymienionych w zaktualizowanym rejestrze miRNA Sangera. Istnieje miRNA w ludzkim genomie, które mogą regulować ekspresję jednej trzeciej naszych genów. ekspresję jednej trzeciej naszych genów. Poprzez kontrolowanie akumulacji białek docelowych w komórkach, te regulatorowe cząsteczki RNA uczestniczą w kluczowych funkcjach w wielu sieciach fizjologicznych. funkcje w wielu sieciach fizjologicznych, a ich deregulacja została w patogenezie poważnych zaburzeń u ludzi, takich jak rak i infekcje. infekcje. Znaczenie miRNA w zaburzeniach o podłożu immunologicznym, takich jak reumatoidalne zapalenie stawów (RZS), co sugeruje, że podejścia terapeutyczne oparte na miRNA mogą mieć obiecujące skutki. mogą mieć obiecujący potencjał w leczeniu tych chorób. Tutaj, przedstawiamy przegląd aktualnego stanu wiedzy na temat miRNA w RZS, koncentrując się zarówno na zarówno na ogólnoustrojowych, jak i lokalnych cechach patologii. --- CEL: MikroRNA (miRNA) są uznawane za ważne regulatory różnych podstawowych procesów biologicznych. podstawowych procesów biologicznych. Wcześniej opisaliśmy zwiększoną ekspresję miR-155 i miR-146a w reumatoidalnym zapaleniu stawów (RZS) i wykazaliśmy represyjny miR-155 na ekspresję metaloproteinazy macierzy (MMP) w fibroblastach błony maziowej RZS (RASF). fibroblastów (RASF). Niniejsze badanie zostało podjęte w celu zbadania zmian w ekspresji miR-203 w RASF i przeanalizowania jego roli w aktywacji fibroblastów. METODY: Zróżnicowana ekspresja miRNA w fibroblastach RASF w porównaniu z fibroblastami osteoarthritis synovial fibroblastów (OASF) zidentyfikowano za pomocą łańcuchowej reakcji polimerazy w czasie rzeczywistym (PCR) 260 poszczególnych miRNA. Transfekcję prekursora miR-203 została wykorzystana do analizy funkcji miR-203 w RASF. Poziomy interleukiny-6 (IL-6) i MMP mierzono metodą PCR w czasie rzeczywistym i testem immunoenzymatycznym. test. RASF stymulowano IL-1β, czynnikiem martwicy nowotworów α (TNFα), lipopolisacharydem (LPS) i 5-azacytydyną (5-azaC). Aktywność kinazy IκB 2 była hamowana przez SC-514. WYNIKI: Ekspresja miR-203 była wyższa w RASF niż w OASF lub fibroblastach od zdrowych dawców. Poziomy miR-203 nie zmieniły się po stymulacji IL-1β, TNFα lub LPS; jednak demetylacja DNA za pomocą 5-azaC zwiększyła ekspresję miR-203. ekspresję miR-203. Wymuszona ekspresja miR-203 doprowadziła do znacząco zwiększonego poziomu MMP-1 i IL-6. Indukcja IL-6 przez nadekspresję miR-203 była hamowana przez blokowanie szlaku NF-κB. Podstawowe poziomy ekspresji IL-6 korelowały z podstawowymi poziomami ekspresji miR-203. WNIOSEK: Obecne wyniki wskazują na zależną od metylacji regulację ekspresji miR-203 w RASF. Co ważne, pokazują one również, że podwyższone poziomy miR-203 prowadzą do zwiększonego wydzielania MMP-1 i IL-6 poprzez szlak NF-κB, a tym samym przyczyniają się do przyczyniając się tym samym do aktywacji fenotypu fibroblastów maziowych w RZS.
Które mikro-RNA zostały powiązane w patogenezie reumatoidalnego zapalenia stawów?
Różne wzorce ekspresji mir-146a, miRNA-155, miRNA-124a, mir-203, mir-223, mir-346, mir-132, mir-363, mir-498, mir-15a i mir-16 zostały udokumentowane w kilku typach próbek tkanek pacjentów z RZS.