TIA-1 jest białkiem wiążącym RNA, które promuje tworzenie granulek stresu (SG), dyskretnych cytoplazmatycznych inkluzji, do których dynamicznie rekrutowane są kompleksy inicjacji translacji są dynamicznie rekrutowane w komórkach poddanych stresowi środowiskowemu. Motywy rozpoznawania RNA TIA-1 są połączone z bogatą w glutaminę domeną związaną z prionami (PRD). (PRD). Mutanty skrócone pozbawione domeny PRD nie indukują spontanicznych spontanicznych SG i nie są rekrutowane do SG indukowanych arsenitem, podczas gdy PRD tworzy agregaty, które są rekrutowane do SG w komórkach o niskim poziomie ekspresji, ale zapobiegają gromadzeniu się SG w komórkach o wysokim poziomie ekspresji. PRD TIA-1 wykazuje wiele cech charakterystycznych dla prionów: agregację zależną od stężenia, która jest hamowana przez białko szoku cieplnego (HSP)70; odporność na trawienie proteazą trawienie proteazą; sekwestracja HSP27, HSP40 i HSP70; oraz indukcja HSP70, regulatora sprzężenia zwrotnego dezagregacji PRD. Zastąpienie PRD domeną agregacyjną domeną agregacyjną prionu drożdży, SUP35-NM, odtwarza montaż SG, potwierdzając, że domena prionowa może pośredniczyć w montażu SG. Fibroblasty zarodkowe myszy fibroblasty (MEF) pozbawione TIA-1 wykazują upośledzoną zdolność do tworzenia SG, chociaż wykazują normalną fosforylację eukariotycznego czynnika inicjacji (eIF) 2alfa w odpowiedzi na arsenin. Nasze wyniki ujawniają, że prionopodobna agregacja TIA-1 reguluje tworzenie SG w następstwie fosforylacji eIF2alfa w odpowiedzi na stres. --- Granule stresu wspomagają przeżycie komórek w odpowiedzi na stresory środowiskowe poprzez działając jako miejsca represji translacji. Zgłaszamy nieoczekiwany związek między granulkami stresu a kinazą serynowo-treoninową RSK2. W zestresowanych komórkach piersi endogenna RSK2 kolokalizuje w ziarnistościach z TIA-1 i białkiem wiążącym poli(A) białkiem 1, a sekwestracja RSK2 i TIA-1 wykazuje współzależność. The N-końcowa domena kinazy RSK2 kontroluje bezpośrednią interakcję z domeną prionową domeną TIA-1. Wyciszenie RSK2 zmniejsza przeżywalność komórek w odpowiedzi na stres. w odpowiedzi na stres. Mitogen uwalnia RSK2 z granulek stresowych i umożliwia jego import jądrowy poprzez nukleocytoplazmatyczną sekwencję wahadłową w C-końcowej domenie domenie. Akumulacja jądrowa jest zależna od TIA-1. Co zaskakujące, jądrowa lokalizacja RSK2 jest wystarczająca do zwiększenia proliferacji poprzez indukcję cykliny D1, przy braku innych aktywnych szlaków sygnałowych. W związku z tym RSK2 jest kluczowym czynnikiem łączącym odpowiedź na stres z przeżyciem i proliferacją. --- Tia1/Pub1 jest składnikiem ziarnistości stresu niosącym domenę prionową bogatą w Q/N. My dostarczamy bezpośrednich dowodów na to, że Tia1 tworzy prion w drożdżach. Co więcej, Tia1/Pub1 działa kooperatywnie z czynnikiem uwalniającym Sup35/eRF3 w celu ustanowienia dwubiałkowego samoreplikujący się stan. Ten dwubiałkowy prion napędzany przez domeny prionowe bogate w Q/N domeny Sup35 i Tia1/Pub1 można wizualizować jako charakterystyczne struktury liniowe wzdłuż cytoszkieletu tubuliny. Ponadto stwierdziliśmy, że kompleks związany z tubuliną zawierający oligomery Pub1 i Sup35 normalnie istnieje w drożdżach, a jego montaż zależy od domen prionowych Pub1 i Sup35. Ten kompleks Sup35/Pub1, który również zawiera również mRNA TUB1 i składniki maszynerii translacyjnej, jest ważny dla integralności cytoszkieletu tubulinowego: Zakłócenie PUB1 i wyczerpanie Sup35 z kompleksu z kompleksu prowadzi do defektów cytoszkieletu. Proponujemy, aby kompleks był zaangażowany w syntezę białek w miejscu składania mikrotubul. Tak więc nasze badanie identyfikuje rolę domen prionowych w montażu kompleksów wielobiałkowych kompleksów wielobiałkowych.
Która domena TIA-1 jest niezbędna do montażu granulek stresu?
TIA-1 jest białkiem wiążącym RNA, które promuje tworzenie granulek stresowych (SGs), dyskretnych cytoplazmatycznych inkluzji, w których zatrzymane kompleksy inicjacji translacji są dynamicznie rekrutowane w komórkach poddanych stresowi środowiskowemu. Motywy rozpoznawania RNA TIA-1 są połączone z bogatą w glutaminę domeną związaną z prionami (PRD). Mutanty pozbawione domeny PRD nie indukują spontanicznych SG i nie są rekrutowane do SG indukowanych arsenitem, podczas gdy PRD tworzy agregaty, które są rekrutowane do SG w komórkach o niskim poziomie ekspresji, ale zapobiegają gromadzeniu się SG w komórkach o wysokim poziomie ekspresji.