TRACELESS REDUCTIVELY CLEAVABLE LINKER MOLECULES FOR PEPTIDE PURIFICATIONThe present invention relates to linker molecules of formula (1), X-Tb-Va-U-Y-Z (1) and a method for purifying peptides by using the linker molecules. The linker molecule can be coupled to a purification resin via the moiety X and to a peptide via the moiety Y under the release of the leaving group Z. T is an optional spacer moiety and V is an optional electron withdrawing moiety. U is an aryl or 5- or 6-membered heteroaryl moiety bound to at least one electron withdrawing moiety V, W or E. The linker is stable under acidic conditions and releases the peptide upon addition of a reducing agent.A method of formula 1: x-tb-va-u-y-z (1), wherein,-x is selected from a moiety of formula 2, 2a, 3a or 4, in particular a moiety of formula 2, 2a, 3 or 3a, more in particular a moiety of formula 2 or 2a,wherein the content of the first and second substances,each r1and r2independently of one another, selected from h or b, wherein at least r1or r2is a compound of formula (i) and (ii),- r3is selected from the group consisting of h and b,- r4selected from h, c1-c12an alkyl or aryl group, wherein the aldehyde or ketone group may be protected by an acid-labile protecting group,-b is an acid-labile amine protecting group,-t is a linear or branched spacer comprising at least one, in particular 1 to 5, of the following moieties: -c1-12-alkyl-, (-c)2h4o-)1-12、-c(＝o)-、-c(＝o)-jr9-、-jr9-c(＝o)-、-jr9-, phenyl, 5-or 6-membered heteroaryl, where,j is ch or n, in particular n,in particular t is a spacer selected from-c1-c12-alkyl-, in particular c1-6alkyl, more particularly c1-3-alkyl, -r5-c(＝o)-，-r5-c(＝o)-nr9-r6-，-r5-c(＝o)-nr9-，-c(＝o)-nr9-r6-，-r5-nr9-c(＝o)-r6-，-r5-nr9-r5’-nr9’c(＝o)-r6-，-r5-c(＝o)-nr9-r5’-nr9’-c(＝o)-r6-，-r5-nr9-，-r5-nr9-r6-，-r5-nr9-r5’-nr9’-r6-，-r5-c(＝o)-nr9-r5’-nr9’-r6-，-r5-c(＝o)-o-r6-，-c(＝o)-o-r6-，-r5-phenyl-r6-，-r5-phenyl-, -phenyl-r6-, - (o-phenyl-) -, -r5-pyrrolyl, -r5-pyrazolyl, -r5imidazolyl radical, r5-piperazinyl-, -r5-pyridyl, -r5-pyrimidinyl, -r5-pyrazinyl, -r5-pyridazinyl, -r5-pyrrolyl-r6-，-r5-pyrazolyl-r6-，-r5-imidazolyl-r6-，-r5-piperazinyl-r6-，-r5-pyridyl-r6-，-r5-pyrimidinyl-r6-，-r5-pyrazinyl-r6-，-r5-pyridazinyl-r6-, pyrrolyl-r6-, pyrazolyl-r6-, imidazolyl-r6-piperazinyl-r6-, pyridinyl-r6-, pyrimidinyl-r6-, pyrazinyl-r6-, pyridazinyl-r6pyrrolyl, pyrazolyl, imidazolyl, piperazinyl, pyridyl, pyrimidinyl, pyrazinyl and pyridazinyl, wherein,r5、r5’and r6independently of one another, from c1-c12-alkyl or (-c)2h4o-)1-12in particular c1-c6alkyl, especially c1-c3an alkyl group, and wherein,r9and r9’are independently selected from h, c1-4-alkyl, -c1-6-alkyl-nh2、-c1-6alkyl-nhb, -c1-6-alkyl-nb2、-r15、-c1-6-alkyl-r15、-c1-6-alkyl-nh-r15in particular selected from h and c1-2-alkyl, more particularly r9is a compound of formula (i) wherein,b is an independently selected acid-labile amine protecting group,r15are blocking agents capable of reacting with aldehyde moieties, in particular r15selected from the group consisting of cysteinyl, threonyl, 2-mercaptoethanol, cysteamine, ethanedithiol, hydroxylamine, o-methylhydroxylamine, n-methylhydroxylamine, dithiothreitol, hydrazine, in particular cysteinyl and n-methylhydroxylamine, more in particular cysteinyl, wherein,the amine and/or thiol moiety of the blocking agent may be protected by an independently selected acid-labile amine protecting group b, particularly boc, and/or an acid-labile thiol protecting group, particularly trityl,b is 0 or 1, in particular 1,-v is an electron withdrawing moiety selected from-nr11-c(＝o)-、-c(＝o)-nr11-、-s(＝o)-、-nr12-(ch2)p-, -piperazinyl- (ch)2)p-, -pyridyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, pyridazinyl, pyridinyl, and the like,-c (═ o) -, -c (═ o) -o-, in particular-nr11-c(＝o)-、-c(＝o)-nr11-、-s(＝o)-、-nr12-(ch2)p-, -piperazinyl- (ch)2)p-, - (pyridyl) -pyrimidinyl, more particularly chosen from-nh-c (═ o) -, -c (═ o) -nh-, -n- (ch) -, -c (═ o) -nh-, -c- (ch) -, and3) -, -piperazinyl- (ch)2)p-, -pyridyl-, pyrimidyl, wherein,r11selected from h and c1-4-alkyl, especiallyselected from h and c1-2-alkyl, more particularly r11is a compound of formula (i) wherein the compound is h,r12selected from h and c1-4-alkyl, in particular selected from h and c1-2-alkyl, more particularly r12is a methyl group, and the compound is,p is 0, 1 or 2, in particular 0 or 1,a is 0 or 1, where the sum of a and b is 1 or 2,-u is phenyl or a five or six membered heteroaryl moiety, in particular phenyl or a six membered heteroaryl moiety, more in particular phenyl, which is bound to moiety v, wqand enand may optionally be c1-6alkyl, especially c1-3-alkyl substitution, wherein,v is defined as described above in the specification,w is selected from-n3、-no2、-s(＝o)-r8、-s-s-r8、-o-ch2-n3、-o-c(＝o)-o-ch2-n3-n ═ n-phenyl, -n ═ n-r8、in particular-n3、-n＝n-r8、-o-ch2-n3、-s-s-r8wherein, in the step (a),r8is pyridyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, pyridazinyl, -c1-c6-alkyl or- (ch)2)p-nme2in particular pyridyl or-c1-c6-alkyl, wherein p is 1,2, 3 or 4,e is an electron withdrawing group under acidic conditions,n is an integer between 0 and 4, in particular an integer between 0 and 2, more in particular 0 or 1, and q is an integer between 0 and 4, in particular an integer between 0 and 2, more in particular 0 and 1, wherein the sum of n and q is equal to or less than 4, and wherein,in which u is a phenyl moiety and y is-(ch2)m-o-c (═ o) -, the sum of the hammett constants of v, w, e under acidic conditions is greater than 0.45, and wherein,w is in the ortho or para position relative to y,-y is- (ch)2)m-c (═ o) -or- (ch)2)m-o-c (═ o) -, where m is 1,2 or 3, in particular 1 or 2, more particularly 1...
펩티드 정제를 위한 흔적 없이 환원적으로 절단 가능한 링커 분자본 발명은 화학식 1, X-Tb-Va-U-Y-Z (1)의 링커 분자 및 상기 링커 분자를 사용하여 펩티드를 정제하는 방법에 관한 것이다. 링커 분자는 모이어티 X를 통해 정제 수지에 그리고 이탈기 Z의 방출 하에 모이어티 Y를 통해 펩티드에 커플링될 수 있다. T는 선택적 스페이서 모이어티고 V는 선택적 전자－흡인 모이어티다. U는 하나 이상의 전자－흡인 모이어티 V, W 또는 E에 결합된 아릴 또는 5 원 또는 6-원 헤테로 아릴 모이어티이다. 링커는 산성 조건하에서 안정하며 환원제를 첨가하면 펩티드를 방출한다.[화학식 1] X-Tb-Va-U-Y-Z의 화합물, 여기서- X는 화학식 2, 2a, 3, 3a 또는 4, 특히 화학식 2, 2a, 3 또는 3a, 보다 특히 화학식 2 또는 2a의 모이어티로부터 선택되고, [화학식 2][이미지][화학식 2a][이미지][화학식 3][이미지][화학식 3a][이미지][화학식 4][이미지], 여기서- 각각의 R1 및 R2는 서로 독립적으로 H 또는 B로부터 선택되고, 여기서 적어도 R1 또는 R2는 B이고,- R3은 H 또는 B에서 선택되며,- R4는 H, C1-C12-알킬 또는 아릴에서 선택되며, 여기서 알데히드 또는 케토 작용기는 산에 불안정한 보호 작용기에 의해 보호될 수 있으며,- B는 산에 불안정한 아민 보호 작용기이고,- T는 -C1-12-알킬-, (-C2H4O-)1-12, -C(=O)-, -C(=O)-JR9-, -JR9-C(=O)-, -JR9-, 페닐, 5- 또는 6-원 헤테로아릴 모이어티의 적어도 하나， 특히 １ 내지 ５개를 포함하는 선형 또는 분지형 스페이서이고, 여기서J는 CH 또는 N, 특히 N이고, 특히 T는- C1-C12-알킬-, 특히 C1-6-알킬, 보다 특히 C1-3-알킬, -R5-C(=O)-, -R5-C(=O)-NR9-R6-, -R5-C(=O)-NR9-, -C(=O)-NR9-R6-, -R5-NR9-C(=O)-R6-, -R5-NR9-R5'-NR9'C(=O)-R6-, -R5-C(=O)-NR9-R5'-NR9'-C(=O)-R6-, -R5-NR9-, -R5-NR9-R6-, -R5-NR9-R5'-NR9'-R6-, -R5-C(=O)-NR9-R5'-NR9'-R6-, -R5-C(=O)-O-R6-, -C(=O)-O-R6-, -R5-페닐-R6-, -R5-페닐-, -페닐-R6-, -페닐-, -R5-피로일, -R5-피라조일, -R5-이미다조일, R5-피페라지닐-, -R5-피리디닐, -R5-피리미디닐, -R5-피라지닐, -R5-피리다지닐, -R5-피로일-R6-, -R5-피라조일-R6-, -R5-이미다조일-R6-, -R5-피페라지닐-R6-, -R5-피리디닐-R6-, -R5-피리미디닐-R6-, -R5-피라지닐-R6-, -R5-피리다지닐-R6-, 피로일-R6-, 피라조일-R6-, 이미다조일-R6-피파라지닐-R6-, 피리디닐-R6-, 피리미디닐-R6-, 피라지닐-R6-, 피리다지닐-R6-, 피로일, 피라조일, 이미다조일, 피페라지닐, 피리디닐, 피리미디닐, 피라지닐 및 피리다지닐로부터 선택되고, 여기서R5, R5' 및 R6은 서로 독립적으로 C1-C12-알킬 또는 (-C2H4O-)1-12, 특히 C1-C6 알킬, 특히 C1-C3 알킬로부터 선택되고, 여기서 R9 및 R9'는 서로 독립적으로 H, C1-4-알킬, -C1-6-알킬-NH2, -C1-6-알킬-NHB, -C1-6-알킬-NB2, -R15, -C1-6-알킬-R15, -C1-6-알킬-NH-R15로부터, 특히 H 및 C1-2-알킬로부터 선택되고, 보다 특히 R9는 H이고, 여기서B는 독립적으로 선택된 산에 불안정한 아민 보호 작용기이고, R15 는 알데히드 모이어티와 반응할 수 있는 차단제이고， 특히 R15는 시스테인일, 트레오니닐, 2-메르캅토에탄올, 시스테아민, 에탄디티올, 히드록실아민, O-메틸히드록실아민, N-메틸히드록실아민, 디티오트레이톨, 히드라진, 특히 시스테인일 및 N-메틸히드록실아민, 보다 특히 시스테인일로부터 선택되고, 여기서상기 차단제(blocking agent)의 아민 및/또는 티올 모이어티는 독립적으로 선택된 산에 불안정한 아민 보호 작용기 B, 특히 Boc 및/또는 산에 불안정한 티올 보호 작용기, 특히 트리틸에 의해 보호될 수 있고, - b는 0 또는 1, 특히 1이고,- V는 -NR11-C(=O)-, -C(=O)-NR11-, -S(=O)-, -NR12-(CH2)p-, -피페라지닐-(CH2)p--, -피리디닐, 피리미디닐, 피라지닐, 피리다지닐, [이미지], - -C(=O)-, -C(=O)-O-, 특히 -NR11-C(=O)-, -C(=O)-NR11-, -S(=O)-, -NR12-(CH2)p-, -피페라지닐-(CH2)p-, -피리디닐-, 피리미디닐, 보다 특히 -NH-C(=O)-, -C(=O)-NH-, -N-(CH3)-, -피페라지닐-(CH2)p-, -피리디닐-, 피리미디닐로부터 선택되는 전자-흡인(electron-withdrawing) 모이어티이고, 여기서R11은 H 및 C1-4-알킬로부터, 특히 H 및 C1-2-알킬로부터 선택되고, 더욱 특히 R11은 H이고, R12는 H 및 C1-4-알킬로부터, 특히 H 및 C1-2-알킬로부터 선택되고, 더욱 특히 R12은 메틸이고,P는 0, 1 또는 2, 특히 0 또는 1이고,- a는 0 또는 1이고, 여기서 a와 b의 합은 1 또는 2이고,- U는 V, Wq 및 En 모이어티 중 적어도 하나에 결합되고C1-6-알킬, 특히 C1-3-알킬에 의해 임의로 치환될 수 있는， 페닐 또는 5- 또는 6-원 헤테로아릴 모이어티, 특히 페닐 또는 6-원 헤테로아릴 모이어티, 보다 특히 페닐이고, 여기서V는 상기 설명한 대로 정의되고, W 는 -N3, -NO2, -S(=O)-R8, -S-S-R8, -O-CH2-N3, -O-C(=O)-O-CH2-N3,-N=N-페닐, -N=N-R8, [이미지], [이미지], [이미지], [이미지], [이미지], [이미지], [이미지], 특히 -N3, -N=N-R8, -O-CH2-N3, -S-S-R8로부터 선택되고, 여기서R8은 피리딜, 피리미디닐, 피라지닐, 피리다질, -C1-C6--알킬 또는 -(CH2)p-NMe2, 특히 피리딜 또는 -C1-C6--알킬이고, p는 1, 2, 3 또는 4이고,E는 산성 조건에서 전자 흡인 작용기(electron withdrawing group)이고, n은 0 내지 4 사이, 특히 0 내지 2 사이의 정수, 보다 특히 0 또는 1이고, 및 q는 0 내지 4 사이, 특히 0 내지 2 사이의 정수, 보다 특히 0 또는 1이고, 여기서 n과 q의 합은 4보다 작거나 같고， 여기서U가 페닐 모이어티이고 및 Y가 -(CH2)m-O-C(=O)-인 경우, 산성 조건에서 V, W, E의 Hammett 상수의 합이 0.45보다 크고， 여기서W는 Y와 관련하여 오르소(ortho) 또는 파라(para) 위치에 있으며,- Y는 -(CH2)m-C(=O)- 또는 -(CH2)m-O-C(=O)-이고 m은 1, 2 또는 3, 특히 1 또는 2, 보다 특히 1이고,- Z는 전자-흡인 이탈 작용기(electron-withdrawing leaving group)이다.