Topotecan hæmmer topoisomerase- I ved at stabilisere det kovalente kompleks af enzym og strengkløvet DNA, som er et intermediært produkt af den katalytiske mekanisme.
Topotécan inhibe la topoisomérase I en stabilisant le complexe covalent enzyme/ ADN (ayant une cassure monobrin), étape intermédiaire du mécanisme catalytique.