Hlavním mechanismem jeho účinku je ukončení řetězce při reverzní transkripci HIV.
Tas intracelulāri metabolizējas līdz aktīvajai daļai - lamivudīna 5 '- trifosfātam; tas darbojas galvenokārt kā vīrusu atgriezeniskās transkriptāzes ķēdes noslēdzējs.