SonoStation — Configuración ár njäts'i ya bomba ultrasónica
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Lysis celular células BL21 ya ultrasonidos
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Ya células BL21 ge 'nar cepa ar E. coli ne ar ampliamente utilizada jar laboratorios nthoni, biotecnología ne producción industrial nu'bya ár mfeni pa xingu ya proteínas altamente eficientes. Ar interrupción celular ultrasónica, ar lisis ne ar extracción proteínas ge ár nt'ot'e hne ngatho pa aislar ne recoger ya proteínas dirigidas ar interior celular ya células BL21. Ultrasonidos k'ats'i ma ar célula ya completo ne libera ga̲tho ya proteínas atrapadas, o̲t'e 100% ar proteína ar disponible.
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Células BL21 pa ar hmä proteínas
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Ar célula BL21 ge 'nar cepa bacteriana ar E. coli químicamente competente adecuada pa ar transformación ne ar hmä proteínas mar hñets'i za̲ ár nthe̲ utilizando 'nar ko inducción T7 ARN polimerasa — IPTG. Ya células BL21 permiten jar hmä proteica mextha ya dätä nt'ot'e ar 'na gen nu'u jár control 'nar promotor T7. Cepa E. coli BL21 (DE3) ge 'nar cepa producción ar proteínas basada ARN 7 combinada ko ya vectores ya hmä basados promotor T7 ne da t'uni ampliamente jar laboratorios ne industria pa producir proteínas recombinantes. Jar BL21 (DE3), ar hmä ar gen da codifica ar proteína recombinante ar transcrita ir nge ar ARN polimerasa T7 codificada cromosómicamente (T7 RNAP), da transcribe hñäto ya 'nandi mäs rápido nä'ä ar E. coli RNAP convencional. 'Me̲hna thogi ne cepa BL21 (DE3) da altamente nt'ot'e xi hño ne dá bi pa̲ti jar 'na ya sistemas celulares ya hmä proteínas mäs preferidos.
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Nthuts'i nkohi pa ar lysis ultrasónica ne extracción proteínas células BL21
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Lisis celular ya células BL21 ar realiza principalmente utilizando ultrasonidos jar combinación ko sarcosinato lauroil sódico ('nehe conocido komongu sarkosyl) komongu tampón lisis. Ya ventajas ar interrupción celular ultrasónica ne ar extracción proteínas residen ko ar fiabilidad, reproducibilidad, nja'bu Komo ar funcionamiento simple, pädi xi hño ne ya rápido ya ultrasonicadores. Ar Nthuts'i nkohi da ku̲hu̲ xta 'nar 'mui paso a paso pa ar lysis celda ultrasónica BL21:
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Pa da hñäki ya proteínas chaperón, ya gránulos bacterianos BL21 ar resuspendieron jar 50 ml tampón tris — EDTA ar sodio (STE) tse̲ ja ar tse̲ (compuesto ya 10 mM Det — HCL, pH 8.0, 1 mM EDTA, 150 mM NaCl complementado ko 100 mM PMSF).
Ar añaden 500 ul lysozyme (10 mg yá ml) ne ya células ar incuban dige ar hielo Nxoge 15 ma min.
'Mefa, bí añaden 500 ul TDT ne 7 ml sarkosyl (10% (p/v) xi t'o̲t'e ja ya tampón STE).
Ar esencial da zeti ga̲tho ya tampones ar purificación helados ne da zeti ya muestras dige ar hielo nga̲tho ar pa. Ga̲tho ya pasos purificación tsa da da t'ot'e ja ar sala frigorífica nu'bu̲ xähmä.
Pa ar lysis ar ultrasónica ne ar extracción proteínas, ya muestras ar VialTweeter MultiSample Ultrasonicator Nxoge 4 x 30 s ma 'nar amplitud ar 100% ko 'nar intervalo 2 t'olo ora ja ya sonicación. Alternativamente, 'nar homogeneizador ultrasónico ar klase sonda ko ar micro-punta, ngu, UP200Ht ko S26d2 (3 x 30 seg, 2 min. pausa ja ya ciclos ultrasónicos, 80% ar amplitud) ar tsa̲ da utilizar.
Pa ma 'ra pasos purificación, ya muestras tsa da zeti ar dige hielo wa, alternativamente, almacenar bí ma — 80 oC asta 'mefa ár njäts'i Tange'u ár procesamiento.
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Disruptor células ultrasónicas UP200St ko micro-punta S26d2 pa ar lelisis ne ar extracción proteínas
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Ar control preciso ne fiable ar mpat'i ar crucial nu'bu̲ ar manipulan muestras biológicas. Altas ya temperaturas inician ar degradación proteínas inducidas térmicamente ja ya muestras.
Ga̲tho ya técnicas mecánicas nt'ot'e muestras, komongu ar sonicación crea pa. Wat'i, ar mpat'i ya muestras to da xi hño controlada nu'bu̲ ar gi japu̲'be̲fi ar VialTweeter. Bí presentamos ndunthe ya opciones pa monitorear ne controlar ar mpat'i yá muestras Mente ya preparamos ar VialTweeter ne ar VialPress pa ár análisis.
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Monitorización ar mpat'i ar muestra: ar procesador ultrasónico UP200St, da impulsa ar VialTweeter xí equipado 'nar software inteligente ne 'nar sensor mpat'i conectable. Enchufe sensor mpat'i ja ar UP200St ne inserte ár nts'ä sensor mpat'i jar 'na ya tubos muestra. A través de ar pantalla táctil 'bede njät'i, pe configurar jar menú ar UP200St 'nar rango ar mpat'i específico pa ár sonicación ar muestra. Ar ultrasonicador ar detendrá automáticamente nu'bu̲ ar alcance ar mpat'i máxima ne detenga asta ar mpat'i ar muestra baje ár hmädi mäs hñets'i'i ar mpat'i establecida ∆. Tso̲kwa continuación, ar sonicación ar gi du̲i automáticamente ar nuevo. Nuna ar función inteligente evita degradación inducida ir nge ar pa.
Bloque VialTweeter ar tsa̲ da preenfriar. Coloque bloque VialTweeter (ho̲ntho ar sonotrodo hinda transductor!) jar ar refrigerador wa congelador pa preenfriar bloque titanio ayuda bí posponer ar aumento ar mpat'i ja ar muestra. Nu'bu̲ xähmä, muestra jar hä 'nehe ar tsa̲ da preenfriar.
Use hielo seco pa enfriar Nxoge ar sonicación. Utilice 'nar bandeja tx'u̲tho profunda ár ñut'i ko xingu ya hielo seco ne coloque VialTweeter dige ar hielo pa ndi ar pa tsa disipar ar rápidamente.
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Ya clientes nga̲tho utilizan VialTweeter ne VialPress pa ár 'be̲fi diario nt'ot'e muestras jar laboratorios biológicos, ar bioquímicos, ya médicos ne ya clínicos. Ar software ar inteligente ne ar control mpat'i procesador ar UP200St, ar mpat'i controla dets'e fiable ne bí evita ar degradación muestra inducida ya pa. Ar nt'ot'e muestras ultrasónicas VialTweeter ne VialPress ofrece resultados altamente fiables ne reproducibles!
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'Bui ar disruptor ultrasónico óptimo pa ár nt'ot'e lysis
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Hielscher Ultrasonidos ar fabricante ko mfeni ndezu̲ mahä'mu̲ ar disruptores celulares ultrasónicos mar hñets'i rendimiento ne homogeneizadores pa laboratorios, sistemas ya sobremesa ne da escala industrial. Tamaño ár cultivo celular bacteriano, ár objetivo nthoni wa ar producción ne ar volumen células da procesar ya ora wa pa ya factores esenciales pa tingigi mbo jar disruptor celular ultrasónico mfädi pa ár nt'ot'e.
Hielscher Ultrasonidos ofrece ndunthe soluciones pa sonicación simultánea múltiples muestras (asta 10 viales ko ar VialTweeter) ne muestras masa (es decir, placas microtíter yá placas ELISA ko ar UIP400MTP), nja'bu̲ komongu ar clásico ultrasonicador laboratorio ar klase sonda ko 'na'ño niveles ar nts'edi ar 50 da 400 vatios ja ya procesadores ultrasónicos ar totalmente industriales ko asta 16.000 vatios ir nge ar xe̲ni pa ar interrupción células comerciales ne ar extracción proteínas jar Nar dätä hño ar producción. Ga̲tho ya ultrasonicadores Hielscher gi 'bu̲hu̲ construidos pa ar operación 24 yá 7 yá 365 jár carga nxo̲ge. Ar robustez ne ar fiabilidad ya características ja ya HMUNTS'UJE dispositivos ultrasónicos.
Ga̲tho ya homogeneizadores ultrasónicos digitales gi 'bu̲hu̲ equipados ko software inteligente, pantalla táctil njät'i ne ar Nthuts'i nkohi ar datos automático, mi o̲t'e da dispositivo ultrasónico ja 'nar herramienta ar 'be̲fi mahyoni ja ar laboratorio ne ya instalaciones producción.
Da ga ga pädi, Temu̲ ar klase ar células, Temu̲ volumen, ko Temu̲ frecuencia ne ko Temu̲ objetivo pe̲ts'i da procesar yá muestras ya biológicas. Bí recomendamos ar disruptor ar células ultrasónicas mäs adecuado pa yá requisitos proceso.
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Xtí tabla bí xta 'nar indicación ya mfeni ya procesamiento aproximada ar HMUNTS'UJE sistemas ultrasónicos ndezu̲ homogeneizadores portátiles compactos ne ultrasonicadores MultiSample asta ya procesadores ultrasónicos ar industriales pa aplicaciones comerciales:
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Utilice da ku̲hu̲ formulario pa da 'yadi ungumfädi adicional dige ar procesadores ultrasónicos, ar aplicaciones ne ar precio. Estaremos encantados da mä ár proceso ko nu'i ne bí ofrecer 'nar ko ya ultrasónico da cumpla ko yá requisitos!
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ultrasonicador UP200Ht ko microtip S26d2 2 mm pa ar sonicación muestras t'olo
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Escherichia coli ge 'nar klase ar bacteria, hingi ngetho ge ar esporas, Gram — negativo ne caracteriza ir nge ár dets'e bariya 'nar recta. Ya bacterias E. coli gi 'bu̲hu̲ 'bui ar nt'uni mbo jar ximha̲i, ya nts'i ne ya intestinos ya jä'i ne ya me̲ti. E coli ar nu'bu̲ da nthe̲hu̲ 'ra ya móvil ir nge njapu'befi ya nts'okute peritrichous, pe 'nehe 'bu̲i xingu hindi móviles. Ya e.coli ya ya llamados Hmunts'i quimioorganotroph facultativamente anaeróbicos, nä'ä ir bo̲ni ya mar tsa̲ ndi metabolismo respiratorio ne fermentativo. Kasu̲ nga̲tho ya xingu ya E.coli ya benignos ne ya cumplen ya 'befi útiles komongu, ngu, suprimir crecimiento especies bacterianas dañinas, sintetizar vitaminas, etc.
Célula bacteriana Escherichia coli ar llamado ar klase B ge 'nar categoría hontho cepas E.coli, nä'ä da utilizan ampliamente jar ár nthoni da hyoni mecanismos komongu ar sensibilidad ja ya bacteriófagos wa ya sistemas nyokwi nthoki nthäki. 'Nehe, ya bacterias E.coli ya valoradas komongu fani hñäki fiable pa ar hmä proteínas laboratorios biotecnología ne ciencias ar nzaki. Ngu, E.coli ar utilizan pa sintetizar compuestos komongu proteínas ne oligosacáridos escala industrial. Nu'bya características específicas tales como deficiencia proteasa, xí hñets'i'i producción acetato 'nar mar hñets'i za̲ ár nthe̲ glucosa, ne ya dätä permeabilidad, células E. coli B ya células huésped mäs utilizadas pa ar producción proteínas genéticamente diseñadas.
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Ya proteínas recombinantes (rProt) gi 'bu̲hu̲ ganando 'nar mahyoni da significativa jar múltiples ramas, da 'ñent'i ja ya industrias ar producción química, farmacéutica, cosmética, 'ñithi jä'i ne me̲ti, agricultura, alimentación ne ya nt'ot'e ya residuos.
Producción proteína recombinante requiere njapu'befi ya jä'i pede ko ya hmä. Komongu ar hmä sistemas celulares pa ar producción ADN recombinante, ar xi utilizar células procariotas ne eucariotas. Gem'bu̲ ya células bacterianas ar utilizan xí ampliamente pa ar hmä proteínas nu'bya factores ya Komo jár costo, hei ya escalabilidad ne ya nkohi nt'ot'e simples, ya mamíferos, levaduras, algas, insectos ne sistemas xi hño ar células ya alternativas establecidas. Ar klase ar proteína, ar nt'ot'e funcional, nja'bu Komo ar rendimiento requerido ar proteína expresada influyen jar selección ko ya celular utilizado pa ar hmä proteínas.
Pa xingu ya proteína recombinante, 'nar célula da particular da da transfectada ko 'nar vector ADN da contenga ar plantilla ADN recombinante. Ya células transfectadas ko ar plantilla ar cultivan. Komongu ar consecuencia ar nt'ot'e mbo celular, transcriben ya células ne traducen proteína 'befi, produciendo nja'bu̲ ar proteína objetivo.
Medida da proteínas ya expresadas gi 'bu̲hu̲ atrapadas jar matriz ar celular, ar célula da da asanada (alterada ne rota) da liberar ya proteínas. 'Nar bi thogi ar purificación 'mefa ár njäts'i Tange'u, ar proteína bí separa ne purifica.
Ar ndui proteína recombinante utilizada ar nt'ot'e bí ar insulina jä'i recombinante jar 1982. Nu'bya da xtä, mäs ar 170 xingu ya proteína recombinante ar producen jar nga̲tho ar ximha̲i da tratamientos médicos. Ya proteínas recombinantes ar njapu'befi hne ngatho utilizadas ar 'ñithi xí ya, ngu, hormonas recombinantes, interferones, interleucinas, factores crecimiento, factores necrosis tumoral, factores coagulación ar ya ji, fármacos trombolíticos ne enzimas pa ar nt'ot'e ya enfermedades ndu'mi komongu ar diabetes, enanismo, infarto ar miocardio, insuficiencia cardíaca congestiva, apoplejía cerebral, esclerosis múltiple, neutropenia, trombocitopenia, anemia, hepatitis, artritis reumatoide, asma (cf. Phuc V. Pham, ja ya Omics Technologies and Bio — Engineering, 2018)
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Ultrasonidos ya mar hñets'i ar rendimiento! Gama productos Hielscher cubre nga̲tho ar espectro, ndezu̲ ar ultrasonicador ar laboratorio xí nze̲di dige unidades sobremesa asta sistemas ultrasónicos totalmente industriales.
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