Спектрофотометрический метод для оценки уровня содержания гликогена в модельной нематоде Caenorhabditis elegans
Модельная нематода Caenorhabditis elegans широко используется в исследованиях метаболической регуляции и процессах старения, в биологии развития, клеточной биологии, нейробиологии и генетике. В последних работах показана решающая роль гликогена, полимера глюкозы, в стрессоустойчивости, поддержании запасов энергии и старении организмов. В настоящее время основными способами определения гликогена в нематоде C. elegans являются окрашивание йодом, ферментный анализ и Рамановская микроспектроскопия, описанная в 2019 году A. Cherkas. Предлагаемый в данной работе спектрофотометрический метод позволяет дать количественную оценку уровня гликогена, в отличие от используемых в современной практике. Нематод выращивали на агаре NGM, засеянном E. coli в качестве источника пищи, в течение 7 суток в термостате при температуре 20±2 0С. Затем смывали буфером М9 и отделяли от бактерий центрифугированием 10 мин при 9 000 g. Помещали образцы в ледяную баню и проводили подсчет нематод в каждой пробе при увеличении микроскопа х10. Концентрацию гликогена определяли спектрофотометрическим методом. Данное значение является средним для разных стадий развития нематоды и составляет 0,001821+0,000009 мкг.