ФЛУОРИМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ КАТАЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ CYP51b1 (СТЕРОЛ-14α-ДЕМЕТИЛАЗЫ) С ПРОИЗВОДНЫМИ КУМАРИНА
Предложен метод прямой регистрации активности CYP51b1 (стерол-14α-деметилазы) с использованием производных кумарина в качестве субстрата. Определение каталитической активности фермента с 7-аминокумарин-4-уксусной кислотой (АСАС) основано на регистрации увеличения флуоресценции (λexitation = 360 nm и λemission = 435 nm) при 30°С. Показано, что BMR (флавиновый домен бактериального цитохрома Р450ВМ-3) может служить донором электронов в модельной системе для определения активности CYP51b1. Разработанный метод отличается чувствительностью, точностью простотой и может быть использован для скрининга ингибиторов стерол-14α-деметилазы