Оценка компетентности к развитию ооцитов Bos taurus после интраили экстраовариальной витрификации
Исследования проводили с целью сравнения функционирование митохондрий в ооцитах Bos taurus, подвергшихся экстра- и интраовариальной витрификации, а также оценки их способности к созреванию и оплодотворению in vitro. Анализировали функциональное состояние митохондрий и статус хроматина в нативных, экстра- и интраовариально витрифицированных ооцитах - в среднем по 31.. .40 ооциту в группе в 3 повторах. Для получения эмбрионов использовали 462 ооцита, в среднем 44.. .54 ооцита в каждой группе в 3 повторах. При экстраовариальной витрификации ооциты поэтапно обрабатывали криопротекторами (КПА) на основе среды Т-199 с добавлением 10 % фетальной бычьей сыворотки (ФБС): 30 с в КПА-1 - 0,7 M диметилсульфоксид (ДМСО) + 0,9 M этиленгликоля (ЭГ); 30 с в КПА-2 - 1,4 M ДМСО + 1,8 M ЭГ; 20 с в КПА-3 - 2,8 M ДМСО + 3,6 M ЭГ + 0,65 M трегалозы. При интраовариальной витрификации фрагменты яичников 15 х 20 мм поэтапно выдерживали в КПА на основе фосфатного буферного раствора Дюльбекко с добавлением 20 % ФБС: КПА-1 - 7,5 % ЭГ + 7,5% ДМСО (25 мин), затем в КПА-2 - 15 % ЭГ + 15 % ДМСО + 0,5 М сахарозы (15 мин). Растворы КПА и среды для размораживания содержали 0,001 % наночастиц высокодисперсного кремнезёма. По интенсивности флуоресценции Mito Tracker Orange CMTMRos функциональная активность митохондрий экстраовариально витрифицированных ооцитов была достоверно выше, чем у интраовариально витрифицированных: 411,0 ± 17,8 и 198,0 ± 10,5цА соответственно. Доля раздробившихся клеток после экстраовариальной витрификации составила 52 %, что существенно больше, чем при интраовариальной витрификации - 32 %. Достоверных различий по выходу эмбрионов на стадиях поздней морулы-бластоцисты из девитрифицированных ооцитов (11 и 6 % соответственно) и доле дегенерированных зародышей (24 и 29 % соответственно) не выявлено.