Разработка усовершенствованной методики выделения и очистки IgE человека
Целью работы было создание и оценка приемлемости усовершенствованной методики выделения IgE человека высокой степени чистоты, пригодного для применения в высокочувствительных иммуноаналитических методах. Для достижения поставленной цели, во-первых, было проведено обобщение физико-химических и биологических свойств иммуноглобулинов различных классов, и, во-вторых, был сделан анализ основных методологических приемов, применяемых для выделения и очистки IgE человека (ионообменная хроматография на ДЭАЭ-целлюлозе, гель-фильтрация на сефадексе G-200 и сефакриле S-300, различные варианты иммуноаффинной хроматографии. Обоснование схемы выделения и очистки IgE человека проведено с учетом как результатов собственных исследований, так и данных других авторов. Усовершенствованная методика основывается на использовании комбинации следующих методологических приемов: последовательное удаление из сыворотки IgG человека (с помощью аффинной хроматографии на протеине G), IgA и IgM человека (с помощью иммуноаффинной хроматографии на основе сорбентов с анти-IgA и анти-IgM моноклональными антителами), выделение IgE человека путем двухэтапной гельфильтрации на супердексе 200. Контроль качества полученного иммуноглобулина проводили в иммунодиффузии по Оухтерлони и электрофорезе в ПААГ в редуцирующих условиях. Использование предлагаемой схемы позволяет получать IgE человека высокой степени чистоты. Выход IgE человека после всех этапов очистки составил около 42 % от исходного количества иммуноглобулина Е в сыворотке крови.