Алкогольдегидрогеназная активность в изолированных вакуолях клеток корнеплодов столовой свеклы
Основным местом локализации алкогольдегидрогеназы (АДГ, КФ 1.1.1.1) в клетках растений считается цитозоль. Однако довольно высокая активность этого фермента в реакции восстановления ацетальдегида обнаружена нами во фракциях вакуолей, изолированных из клеток корнеплодов столовой свеклы. Несмотря на то что в вакуолях активность АДГ (рассчитана на 1 мг белка) в реакции восстановления альдегида была довольно высокой (в среднем 160 нМ НАДН/мг), та же активность АДГ экстрактов ткани ее заметно превосходила (в среднем 300 нМ НАДН/мг). На специфичность ферментативной реакции указывали результаты ингибиторного анализа. Полное подавление активности АДГ происходило в присутствии 1.10-фенантролина, ингибирующее действие оказывали также парахлормеркурибензоат и 2-меркаптоэтанол. Оптимум рН для фермента в реакции восстановления альдегида составлял 8.0, а в реакциях окисления этанола - 9.0. Результаты исследования ферментативной активности в ПААГ после электрофореза продемонстрировали две изоформы АДГ в вакуолярных фракциях и три изоформы в тканевом экстракте. Лимитирующим фактором для активности АДГ может быть отсутствие косубстрата НАД(Н). Для изолированных вакуолей концентрация НАД(Н) оказалась относительно высокой (3.01 нМ НАД(Н) на 1 мг белка) по сравнению с тканевым экстрактом (2.75 нМ на 1 мг белка). Полученные результаты свидетельствуют о возможном функционировании АДГ в вакуолях клеток растений главным образом в качестве фермента, восстанавливающего альдегиды.