Иммобилизация гидролитических ферментов на анионитах
Химические методы иммобилизации ферментов в настоящее время являются доминирующим способом получения гетерогенных биокатализаторов. При подборе условий иммобилизации препарата выявлено, что наиболее предпочтительным носителем является анионообменная смола АВ-17-2П, отработавшая в условиях сахаро-рафинадного производства в течение 400 циклов, изменение физико-химических свойств которой обусловлено многократными процессами сорбции-десорбции меланоидинов и других продуктов щелочного распада инвертного сахара. Оптимальным методом иммобилизации является модифицированный глутаральдегидный способ ковалентного связывания фермента с носителем, заключающийся в процессе наращивания связывающего звена между липазой и анионитом при обработке рядом органических реагентов. Показано, что в процессе ковалентной и адсорбционной иммобилизации глюкоамилазы происходит многоточечное связывание как с крахмалосвязующим, так и с каталитическим доменом, что сопровождается увеличением Км, уменьшением Vmax и значительным снижением величины константы конформационного перехода (L0). Кинетика реакции гидролиза крахмала не соответствует уравнению Михаэлиса.