Влияние витрификации на статус хроматина ооцит-кумулюсных комплексов <i>SusScrofaDomesticus</i>
Успешное решение проблемы сохранения жизнеспособности девитрифицированных донорских ооцитов свиней позволит значительно интенсифицировать инновационные клеточные репродуктивные и ДНК-технологии, благодаря созданию криобанка женских гамет с положительными качественными характеристиками. Создание эффективной модели витрификации и сред для культивирования замороженно-оттаянных ооцит-кумулюсных комплексов - важная задача крио- и эмбриотехнологов. Наночастицы высокодисперсного кремнезема (нВДК) обладающие, в силу своих структурных особенностей, рядом важных свойств (высокая сорбционная емкость белков, отсутствие аллергенного и токсического воздействия на клетки, активация репаративных процессов, антиоксидантные эффекты), могут быть предложены в качестве потенциальных составляющих криопротекторов и сред для культивирования девитрифицированных клеток. В исследовании идентифицированы эффекты 0,001% нВДК на статус хроматина нативных и девитрифицированных ооцит-кумулюсных комплексов Sus Scrofa Domesticus при культивировании in vitro. 0,001% нВДК не оказывали цито- и генотоксического действия как на нативные, так и на девитрифицированные ооцит-кумулюсные комплексы в процессе культивирования, более того, снижали уровень деструктивных процессов (апоптоз, пикноз), спровоцированных воздействием сверхнизких температур (витрификация). Выявлен криопротекторный эффект 0,001% нВДК на девитрифицированные соматические (кумулюс) и половые (ооциты) клетки овариальных фолликулов SusScrofaDomesticus после процедуры замораживания/оттаивания и культивирования в течение 44 часов. Введение 0,001% нВДК в состав криопротекторных и культуральных сред положительно сказывалось на морфофункциональном состоянии клеток кумулюса после процедуры витрификации и культивирования. Доля клеток с компактным кумулюсом, обработанных 0,001% нВДК, после девитрификации возрастает с 33 % до 48 %, P<0,01. А доля ооцитов с кумулюсом в высокой степени экспансии после 44 часов культивирования с 0,001% нВДК составила 61 % против 39 %, P<0,05 в контроле. Использование нВДК в этапах технологии витрификации ооцит-кумулюсных комплексов вызывало снижение доли апоптотических клеток (TUNEL-тест) в кумулюсе с 54 % до 35 %, P<0,05. Уровень созревших девитрифицированных ооцитов, подвергшихся воздействию нВДК, увеличился с 33% в контроле до 59 %, P<0,001. Полученные результаты позволяют рекомендовать использование 0,001% нВДК в этапах технологии витрификации ооцитов свиней.