АКТИВНОСТЬ ЦИТОПЛАЗМАТИЧЕСКОЙ И СВЯЗАННОЙ С КЛЕТОЧНЫМИ СТЕНКАМИ Р-ГЛЮКОЗИДАЗЫ В ОНТОГЕНЕЗЕ РАСТЕНИЙ PISUM SATIVUM L
Определяли активность цитоплазматической и связанной с клеточными стенками молекулярные формы β-глюкозидазы (КФ 3.2.1.21), расщепляющей специфический для растений гороха изосукцинимид-β-гликозид (ИС-гликозид), в процессе прорастания и роста растений Pisum sativum L. Растения гороха (Рамонский 77) выращивали методом гидропоники или в условиях мелкоделяночного опыта до стадии созревания семян. Активность β-глюкозидазы определяли, используя в качестве субстрата ИС-гликозид, по количеству образовавшейся глюкозы. Адсорбированную β-глюкозидазу выделяли промыванием осадка клеточных стенок 0.1 М фосфатно-цитратным буфером (pH 6.0), а ионносвязанную форму - раствором 1М NaCl. Одновременно в растениях определяли содержания ИС-гликозида и растворимых сахаров с использованием метода тонкослойной хроматографии. Показано, что в надземной части 5-дневных проростков гороха активность связанной с клеточной стенкой β-глюкозидазы была выше, чем цитоплазматической. Она возрастала в 1.5-3 раза, достигая у 10-дневных проростков для ионно-связанной с клеточной стенкой величины 18.50±0.14, а адсорбированной - 10.6±0.09 ФЕ мг-1 белка. Однако затем начинала резко снижаться. В сухих семенах активность β-глюкозидазы не обнаруживалась, но она присутствовала в семенах на стадии молочной спелости (1.89±0.06 ФЕ мг-1 белка). Активность цитоплазматической β-глюкозидазы в листьях 2-недельных проростков составила 4.30±0.14 ФЕ мг-1 белка и оставалась достаточно высокой до цветения (фаза бутонизации), при этом в корнях она была на порядок ниже. ИС-гликозид также не обнаруживался в сухих семенах. Содержание ИС-гликозида в листьях 10-дневных проростков составляло 5.76±0.06 мг.г-1сыр.массы, что было немногим меньше глюкозы и превышало уровень сахарозы. В корнях содержание ИС-гликозида было всегда более низким, так же как и активность цитоплазматической β-глюкозидазы. Полученные нами результаты позволяют заключить, что цитоплазматическая и связанные с клеточной стенкой молекулярные формы β-глюкозидазы выполняют различные функции в онтогенезе растений гороха. Достаточно высокая активность цитоплазматической β-глюкозидазы в листьях на всех этапах роста позволяет пополнять фонд глюкозы для дыхательного метаболизма клеток растений гороха за счет гидролиза специфического ИС-гликозида, а также участвовать в реакции трансгликозидирования с образованием других гликозидов. Связанные же с клеточной стенкой адсорбированная и ионно-связанная молекулярные формы β-глюкозидазы, активность которых значительно уменьшается с возрастом, обеспечивают участие ИС-гликозида, как поставщика глюкозы, в формировании веществ клеточных стенок у молодых, активно растущих проростков гороха