ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛАКТОФЕРРИНА ЧЕЛОВЕКА В МОЛОКЕ КРОЛИКОВ С ИНТЕГРИРОВАННОЙ В ГЕНОМ КОНСТРУКЦИЕЙ as1-Сn-hLf
Методами ионообменной и гель-хроматографии из женского молока был выделен человеческий лактоферрин (чЛФ). Степень очистки чЛФ оценивали методом электрофореза в полиакриламидном геле в денатурирующих условиях. Очищенным чЛФ были проиммунизированы кролики и мыши. Образцы сыворотки с высоким титром антител были использованы для получения тест-системы. Антитела из сыворотки крови иммунизированных кроликов были аффинно очищены на носителе с иммобилизованным чЛФ. Для обеспечения максимальной чувствительности, воспроизводимости и специфичности тест-системы был разработан «сэндвич»-вариант ИФА. Были подобраны условия посадки первичных (кроличьих) антител на плашку, концентрация используемых вторичных (мышиных) антител, и концентрация антивидового конъюгата с пероксидазой хрена (ПХ). В качестве стандарта для построения калибровочной кривой был использован лактоферрин человека, выделенный из женского молока. В качестве отрицательного контроля использовали молоко нетрансгенных кроликов. С помощью разработанной тест-системы было проанализирована серия образцов молока, полученных от трансгенных кроликов.