Новый метод измерения уровня VEGF-R1 в ядре опухолевой клетки - возможность оценки степени ее малигнизации
Цель исследования. В работе изучали VEGF-R1 и его роль в возможности оценки степени малигнизации опухолевой клетки. Материалы и методы. В качестве объектов исследования использовали две линии опухолевых клеток человека: A431 и BRO. Контрольной служила линия нормальных постнатальных фибробластов человека. Качество экстрагированных ядер оценивали по критериям их неповрежденности и очищенности от цитоплазмы. Наличие ядерных маркеров PCNA и ламина A/C, по данным проточной цитометрии, указывало на сохранность белков ядра, а отсутствие цитоплазматического β-тубулина - на чистоту ядер от примесей цитоплазмы. После постановки контролей методом РИФ измеряли содержание VEGF-R1 в ядре. Результаты. Высокое содержание PCNA и ламина A/C в экстрагированных ядрах при практически полном отсутствии β-тубулина доказало, что примененный протокол позволяет получать чистую суспензию из одиночных неповрежденных клеточных ядер. Непосредственное измерение уровня ядерного VEGF-R1 выявило его присутствие в ядрах исключительно опухолевых клеток, причем в более злокачественных клетках BRO содержание рецептора оказалось в 1,75 раза выше, чем в A431. Выводы. Разработанный способ экстракции клеточных ядер с целью их иммунофлуоресцентного анализа на проточном цитометре оказался пригодным для количественной оценки содержания белков в нативном ядре. Наличие VEGF-R1 в ядрах опухолевых, но не нормальных, клеток подтверждает предположение о вкладе в канцерогенез именно ядерно-ассоциированного рецептора. А выявленная тенденция к увеличению количества VEGF-R1 в ядре по мере возрастания злокачественности клеточной линии может указывать на возможность использования уровня ядерного рецептора в прогностических целях. Кроме того, эти результаты позволяют рассматривать сам VEGF-R1 в качестве потенциальной мишени для таргетной терапии новообразований.