ОЛИГОПЕПТИДАЗА В ИЗ <i>Serratia proteamaculans. </i>I. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПЕРВИЧНОЙ СТРУКТУРЫ, ВЫДЕЛЕНИЕ И ОЧИСТКА ПРИРОДНОГО И РЕКОМБИНАНТНОГО ФЕРМЕНТА
Из психротолерантного грамотрицательного микроорганизма Serratia proteamaculans с помощью ионообменной хроматографии на Q-сефарозе и аффинной хроматографии на иммобилизованном основном панкреатическом ингибиторе трипсина BPTI-сефарозе получена новая трипсиноподобная протеиназа (PSP). Обнаружено, что PSP находится в прочном комплексе с шаперонином GroEL. Разработан метод разрушения комплекса GroEL c PSP. Получены электрофоретически гомогенные препараты PSP с молекулярной массой 78 кДа. Определена N-концевая аминокислотная последовательность (10 остатков) и проведен масс-спектральный анализ пептидов трипсинолиза PSP. Показано, что данный фермент является ранее неизвестной олигопептидазой В (OpdB). Секвенирован ген OpdB S. proteamaculans 94 и сконструирован продуцент Escherichia coli BL-21 (DE3) pOpdB № 22. Выход рекомбинантного PSP составляет 150 мг из 100 г биомассы.