МОДЕРНИЗАЦИЯ ЭТАПОВ ТЕХНОЛОГИИ ЭКСТРАКОРПОРАЛЬНОГО СОЗРЕВАНИЯ ДОНОРСКИХ ООЦИТОВ BOS TAURUS
Базовый метод инновационных клеточных репродуктивных технологий (получение эмбрионов in vitro, клонирование, трансгенез) - экстракорпоральное созревание донорских ооцитов. Оценка качества ооцитов и совершенствование сред для созревания являются одними из важнейших задач эмбриотехнологов. В данном исследовании на основе сравнительного комплексного анализа морфологии кумулюса и хроматина ооцитов (стадии мейоза и деструктивные изменения) проанализированы потенции к созреванию ооцитов в зависимости от их функционального статуса (растущие или завершившие фазу роста). ВСВ-диагностику, основанную на различии в окраске ооплазмы после воздействия витального красителя бриллиантового кристаллического голубого, использовали для определения функционального статуса ооцитов. Прослежена динамика преобразования хроматина при мейотическом созревании ооцитов контрольной группы и ооцитов в различном функциональном состоянии. Полученные данные свидетельствуют о возможности ооцитов, не завершивших фазу роста in vivo, при пролонгировании времени культивирования завершить ядерное созревание in vitro. В исследуемых группах не обнаружено достоверных различий в доле дегенерированных ооцитов в процессе культивирования вплоть до 30 ч. Предложена система для созревания in vitro ооцитов коров, предварительно тестированных на основе ВСВ-диагностики как не завершивших фазу роста in vivo, позволяющая увеличивать выход эмбрионов при оплодотворении in vitro до 38 %. Эффект достигается введением в среду дозревания 50 нг/мл пролактина, сменой среды через 15 ч от начала культивирования с добавлением 10 МЕ/мл хорионического гонадотропина человека и увеличением времени инкубирования до 30 ч.