CELSR1 стимулирует миграцию клеток эндотелия и ангиогенез
Кадерин (CELSR1) является трансмембранным рецепторным белком. Он играет важную роль в неканоническом сигнальном пути Wnt/PCP (planar cell polarity), регулирующем пролиферацию клеток эндотелия и ангиогенез. Для изучения функций CELSR1 мы стимулировали или подавляли экспрессию эндогенного белка CELSR1. Для активации экспрессии применена технология активации транскрипции TALE (transcription activator-like effector) с использованием искусственного активатора TALE-VP64. Для подавления («нокдауна») экспрессии CELSR1 сконструирован лентивирусный вектор, содержащий короткие шпилечные РНК (shРНК), специфичные к различным районам CELSR1 мРНК. После активации или подавления экспрессии CELSR1 в клетках эндотелия аорты человека (HAEC), оценена интенсивность клеточной пролиферации in vitro с использованием МТТ-теста, изучена эффективность скреч (scratch) и трансмембранной (межлуночной) миграции клеток, а также ангиогенез путем анализа сформированных клетками трубчатых структур. Показано, что в клетках эндотелия пупочной вены человека (HUVEC) и клетках HAEC экспрессируется эндогенный белок CELSR1. При возрастании уровня экспрессии CELSR1 наблюдалась стимуляция роста HAEC, тогда как снижение экспрессии CELSR1 - ингибировало клеточный рост (р < 0,05). При изучении скреч и трансмембранной миграции клеток показано, что повышенная экспрессия CELSR1 стимулировала способность клеток к перемещению. Кроме того, при положительной регуляции экспрессии CELSR1 повышался уровень образования трубчатых структур в культуре HAEC, тогда как при ее отрицательной регуляции - количество трубчатых структур уменьшалось (р < 0,05). CELSR1-зависимая регуляция клеточной миграции и ангиогенеза опосредуется белком Dvl3 (dishevelled segment polarity protein 3). Предполагается, что CELSR1 играет важную роль в регуляции различных фенотипических свойств клеток эндотелия, в том числе их пролиферацию и миграцию, а также образование этими клетками капилляроподобных структур.