КЛОНИРОВАНИЕ И ЭКСПРЕССИЯ НОВОЙ ХИТИНАЗЫ ИЗ ХИЩНЫХ РАСТЕНИЙ DROSERA CAPENSIS
Клонирован новый ген chi19, кодирующий хитиназу хищного растения Drosera capensis, принадлежащую 19- му семейству гликозилгидролаз. Аминокислотная последовательность транслированного фермента составляет 325 а / к и состоит из четырех функциональных частей: N- концевой сигнальной последовательности, каталитического и хитинсвязываюшего доменов, которые были соединены -S-P-линкером. Проведена экспрессия гена chi19 в системе бактерий E. coli в двух формах: с хитинсвязывающим доменом и без него. Для обоих вариантов фермента осуществлен рефолдинг и получены гомогенные растворимые формы. Хитиназы обладают выраженной субстратной специфичностью к кристаллическому хитину, pH- оптимум ферментов находится в диапазоне от 5,0 до 5,5; Т - оптимумы обеих форм ферментов составляли 52-55 ° С . Каталитическая активность полноразмерной формы хитиназы составляла 360 ед ./ г . Удаление хитинсвязываюшего домена приводит к уменьшению каталитической активности на 64%.