ПОЛУЧЕНИЕ ТРАНСГЕННЫХ ЭМБРИОНАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК КРЫСЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ СИСТЕМЫ CRISPR/Cpf1 ДЛЯ ИНДУЦИРУЕМОГО НОКАУТА ГЕНОВ
Эмбриональные стволовые клетки (ЭСК) крысы играют важную роль в изучении генов, участвующих в поддержании плюрипотентного состояния и в процессах раннего развития этого модельного организма. Для изучения функций жизненно важных генов, а также в ходе процессов дифференцировки клеток широко используется метод индуцируемого нокаута. Система CreERT2/loxP позволяет получить индуцируемый нокаут в клетках, экспрессирующих тамоксифен-зависимую Cre-рекомбиназу (CreERT2) и содержащих loxP-сайты, фланкирующие целевой ген, путём добавления в культуральную среду 4-гидрокситамоксифена. Однако в настоящее время отсутствуют линии ЭСК крысы, экспрессирующие CreERT2. В данной работе мы протестировали три CRISPR/Cas-системы на предмет внесения двуцепочечных разрывов в локус Rosa26 в ЭСК крысы и произвели встройку в данный локус тамоксифен-зависимой Cre-рекомбиназы с использованием системы CRISPR/Cpf1. Было показано, что полученные трансгенные линии ЭСК крысы сохранили характеристики плюрипотентных клеток. Активность тамоксифен-зависимой Cre-рекомбиназы была проанализирована с использованием репортёрного вектора.