Модуляция продукции люциферазы клетками меланомы in vitro
Репортерные белки находят все более широкое применение в биомедицинских исследованиях in vitro и in vivo, но для корректной интерпретации результатов на их основе важно иметь представление о возможной модуляции продукции репортерных белков клетками и условиях, при которых она может происходить. В работе изучена репортерная активность клеток меланомы линии Mel IL, транзиентно трансфицированных плазмидной конструкцией на основе вектора pCpG, экспрессирующей люциферазу светлячка. После быстрого падения экспрессии люциферазы в течение первых двух пассажей культивирования наблюдался квазистабильный период, в течение которого происходило лишь относительно небольшое снижение люциферазного сигнала со временем. При периодическом режиме культивирования отмечены фазы максимальной и минимальной продукции люциферазы, соответствующие экспоненциальной и стационарной фазам роста. При обновлении среды происходила стимуляция продукции люциферазы клетками в стационарной, но не в экспоненциальной фазе роста. В условиях гипоксии (0.1% О2) наблюдалось снижение количества люциферазы, что указывает на модуляцию клеточного метаболизма в целом и продукции люциферазы в частности. В присутствии таргетного препарата вемурафениба количество люциферазы в клетках Mel IL также падало, в то время как DMSO, часто используемый как растворитель химиопрепаратов в экспериментах с клетками, наоборот, стимулировал ее продукцию. На основании полученных данных можно сделать заключение, что модуляция продукции репортерных белков в клетках млекопитающих отражает адаптацию внутриклеточного метаболизма к внешним условиям, что может стать источником ошибочных интерпретаций результатов экспериментов с использованием репортерных белков, в том числе при работе с мышиными опухолевыми моделями.