ЭКСПРЕССИОННЫЕ ВЕКТОРА ДЛЯ РЕДАКТИРОВАНИЯ ГЕНОВ КАФИРИНОВ (k1C5, gKAF1) И ГЕНА AMEIOTIC 1 У СОРГО С ПОМОЩЬЮ АГРОБАКТЕРИАЛЬНОЙ ТРАНСФОРМАЦИИ
Одним из эффективных подходов для улучшения питательной ценности зерна сорго является получение мутантов с частично или полностью блокированным синтезом или измененным аминокислотным составом запасных белков - кафиринов. Использование метода геномного редактирования позволяет решить эту проблему путем внесения мутаций в нуклеотидные последовательности генов α- и γ-кафиринов (k1C5 и gKAF1). Другим важным направлением в генетике и селекции сельскохозяйственных растений является разработка и использование технологий апомиксиса для фиксации гетерозиса у гибридов F1. Ген DYAD арабидопсиса и его гомолог AMEIOTIC 1 - это потенциальные гены-кандидаты апомиксиса, вовлеченные в нормальное протекание мейоза, индукция мутаций в которых является одним из путей для решения данной проблемы. В ходе исследований осуществлен подбор геномных мишеней (последовательности 20 п.н.) для введения мутаций в гены α- и γ-кафиринов сорго и гена AMEIOTIC 1 посредством технологии геномного редактирования CRISPR/Cas. Дизайн гидовых РНК выполнен с использованием биоинформатических программ CRISPROR и CHOPCHOP. Клонирование мишеней α- и γ-кафиринов сорго и AMEIOTIC 1 в вектор pBAtC осуществляли по сайтам AarI. Валидацию успешности клонирования мишеней выполняли секвенированием ДНК. Генно-инженерные конструкции были перенесены посредством электропорации в агробактериальный штамм AGL0. В настоящее время созданные вектора используются для агробактериальной трансформации растений сорго.