НЕКОТОРЫЕ ОСОБЕННОСТИ ПРИМЕНЕНИЯ МЕТОДОВ ДЕНАТУРАЦИОННОЙ И БЕЗДЕНАТУРАЦИОННОЙ ГИБРИДИЗАЦИИ IN SITU ПРИ ИЗУЧЕНИИ ХРОМОСОМ ЗЛАКОВ
Безденатурационная флуоресцентная гибридизация in situ (ND-FISH) - удобный метод цитогенетических исследований. По сравнению со стандартной методикой ND-FISH отличается скоростью и простотой исполнения, требует меньше времени, реактивов и приборной базы, поэтому набирает все большую популярность у разных групп ученых и используется для решения разнообразных научных задач. Однако при использовании данного метода для изучения хромосом злаков мы столкнулись с некоторыми особенностями его применения в сочетании с олигонуклеотидными пробами. В данной работе мы сравнили три модификации: два разных варианта денатурационного метода и безденатурационной FISH. В общепринятой методике FISH для растений и ее модификациях хромосомы подвергаются обработке с добавлением формамида при высокой температуре, в результате чего происходит денатурация сверхспирализованной ДНК хромосом растений. В методике безденатурационной FISH этот этап опущен, что позволяет сохранить структуру хромосом, экономит время и ресурсы. В нашей работе все методики показали свою эффективность. Безденатурационная ND-FISH отличается простотой и удобством, однако меньшей воспроизводимостью в ряде экспериментов. Стандартный метод и его модификация наиболее стабильны и надежны, но могут негативно сказываться на морфологии хромосом. При последовательных гибридизациях с использованием тех же препаратов (sequential FISH) мы рекомендуем сочетание данных методов - с первичным проведением FISH по стандартному протоколу и последующими гибридизациями методом ND-FISH.