mlオートクレーブしてから保存して下さい。プロトコール溶液Iと溶液IIIは4°C、溶液IIは室温に置く。分間遠心して上清を捨てる。収量を上げたい場合には同じチューブに大腸菌培養液を入れて、2を繰り返す。100ulの溶液Iを加えて、ペレットを溶解し、15分間氷上で静置。200ulの溶液IIを加えて、ゆっくりと転倒混和し、約5分間氷上で静置(DNAの水素結合を破壊)。ボルテックスはゲノムDNA混入の原因になるので禁止。5分以上置くと、プラスミドも変性してしまうので5分以内で処理しましょう。150ulの溶液IIIを加えて、しっかりと転倒混和する(白い沈殿に染色体DNAがある)。このときもボルテックスは禁止。分間遠心し、上清を新しい1.5mlチューブへ移す(上清にプラスミド)。分間遠心する(沈殿がプラスミド)。分間遠心する(沈殿がプラスミド)。上清をギリギリまで捨てて、風乾させる。適量(50ulから100ulぐらい)のTEバッファーで溶解する。この方法では、リボソームRNAが大量に混入していますので粗な精製です。電気泳動をしてもリボソームRNAが写ってしまい、吸光度を測っても正確ではありませんが、PCRのテンプレートとしては十分な精製度です。10のところで10ug/mlのRNAseを加えて、フェノクロエタ沈するときれいなプラスミドになります。まとめ氷上に置いたり、風乾させたりするステップで少し時間がかかってしまいますが、その他のステップは市販のミニプレップキットと大きく時間は変わらないと思います。最初にこの方法を始める時はいくつかの試薬をそろえないといけませんが、一回買ってしまえば長期間激安でミニプレップすることができます。市販のキットは不要になるかというと、そうはならないでしょう。トランスフェクションなどで純度の高いプラスミドが必要なときには市販のミニプレップキットの方が良い場合もあります。「クローニングのスクリーニングではアルカリ溶解法を使う」などというように、それぞれの方法の利点を生かして使い分けをすると良いかと思います。コメントをキャンセルメールアドレスが公開されることはありません。*サイト次回のコメントで使用するためブラウザーに自分の名前、メールアドレス、サイトを保存する。PCなどに関するお役立ち情報を発信します。PCなどに関するお役立ち情報を発信します。えむをフォローするタイトルとURLをコピーしました。