2回蒸留水1Lに溶解し、オートクレーブ滅菌して使用。使用前に、10%炭酸水素ナトリウム水溶液(粉末でオートクレーブ滅菌し、滅菌蒸留水に溶解)を1Lあたり37mL加える(上記の条件では、pH調整は特に必要ない)。あたり10mL添加する。培地1Lあたり10mL加えてもよい(我々は添加していない)。CS)を10%添加する。血清の品質には、こだわらなくて良い。)のDMEM溶液を作成し、pHを7.2に調整後、0.22umのフィルターで濾過滅菌してストック液とする。培養時に培地に添加して最終濃度0.8mg/mLとする。培地に添加後、4°C保存で1ヶ月程度は使用可能。ストック液は-20°Cで数ヶ月は凍結保存できる。フィルターで濾過滅菌して用いる。失活が早いので、用時調製し、溶解後1週間以内に使い切る。100ug/mLの濃度でDMEMに溶解し、0.22umのフィルターで濾過滅菌してストック液とする。培養時に培地に添加して最終濃度3ug/mLとする。培地に添加後、4°C保存で3週間程度は使用可能。ストック液も4°Cで3週間程度は凍結保存できる。溶液を作成し、0.22umのフィルターで濾過滅菌して添加液とする。培養時に用時調製して培地に添加し、最終濃度を10mMとする。失活が早いので、溶解後3日以内に使い切る。(*:上記重量は全て実重量であり、力価重量ではない。特別な培養器具を用いる必要はないが、一部、接着性がやや弱い株があるので、場合によっては、メーカー等を検討する必要がある可能性もある。150350)を用いている。ヒト単一染色体ライブラリ細胞に含まれるヒト染色体は、継代培養によって脱落、再構成を生じるので、解凍後なるべく少ない継代数で実験に供するのが望ましい。数次にわたって実験に用いる場合は、低継代数の凍結保存アンプルを必要数用意しておき、順次解凍して用いるのがよい。継代法は、一般的な細胞と同じであるが、細胞密度が高すぎるとヒト染色体の脱落が生じ易いので、視野率にして70%程度を目安として継代を行う。growthしないように注意する。細胞株によって増殖速度は異なるので、注意すること。CO2)を加湿して用いる。15050-065)を用いて剥離する。ディッシュ程度を目安に継代する。細胞の解凍後培養を開始する時には、選択薬剤を含まない培地を用いる。翌々日から選択培地を用いる。細胞培養にあたってはオーバーコンフルエントになってしまうことや、細胞の播き込み濃度を薄くしすぎること以外は、特に難しいことは無い。よって細胞を集めた後、選択薬剤を含まない培地に1×106/mLの濃度で懸濁して細胞を浮遊させてから、10%の濃度となるようにDMSOを加えてアンプル(セラムチューブ)に分注して緩慢凍結する(-1°C/分)。長期保存には、液体窒素下に保存するのが望ましい。空気乾燥法あるいは火炎法で染色体標本を作成し、キナクリン・ヘキスト2重染色法で核型解析を行う。hybridization法でも保持率の検査は可能であるが、欠失等の再構成の検出が難しいので、核型解析と組み合わせて行うのが望ましい。取り交わすことが分譲の条件となりました。MTAは、基本的にアカデミアは無償、企業は有償の内容となると伺っていますが、個別案件となり、バンクはMTAの内容に関与することができません。従って、細胞の分譲をご希望される方は分譲の依頼に先立ち、下記、香月先生に連絡して鳥取大との間でMTAを取り交わし、そのコピー(契約が成立したことがわかる部分)を添付してJCRB細胞バンクに分譲依頼を行ってください。(使用)目的を明確にお伝えください。研究目的と齟齬がないことが確認されたうえで実施されます。