中川祐二イオン交換クロマトグラフィー精製とは何か?【原理と方法】TwitterFacebookはてブLINEPocket目次(見たい項目をクリック)イオン交換クロマトグラフィーの原理タンパク質と担体を結合させるタンパク質を溶出する塩化ナトリウムで溶出pHの変化で溶出イオン交換クロマトグラフィーの原理イオン交換クロマトグラフィーは、溶液中のタンパク質と他の分子を電荷の違いに基づいて分離する手法です。負に帯電した分子は正に帯電した支持体に結合し、正に帯電した分子は負に帯電した支持体に結合します。タンパク質の電荷はpHによってコントロールできます。タンパク質をその等電点(pI)より高いpHの緩衝液に溶解したとき、タンパク質は負の電荷を持ちます。タンパク質をその等電点(pI)より低いpHの緩衝液に溶解したとき、タンパク質は正の電荷を持ちます。chromatography.<Tips>SDS-PAGEのランニングバッファーがアルカリ性なのは、タンパク質に負の電荷を持たせ、通電することでタンパク質を陽極側(多くの場合電気泳動槽の下側)へ移動させるためです。タンパク質と担体を結合させる等電点pIが5のタンパク質は、pH7の緩衝液に溶解した場合、負の電荷を持ちます。この場合、タンパク質は、ジエチルアミノエタノール(DEAE)や陰イオン(アニオン)交換カラムのような正に帯電した担体に結合します。逆に、pIが7のタンパク質はpH5の緩衝液中では正に帯電し、陽イオン(カチオン)交換カラムのような負に帯電した担体に結合します(下図)。陽イオンカラムでも陰イオンカラムでも、担体に結合したタンパク質は塩化ナトリウムで溶出させることができます。陰イオンカラムを使用する場合、塩化ナトリウムの塩化物Cl-が正の電荷を持つ担体に結合し、結合していた負の電荷を持つタンパク質が担体から離れ、溶出されます。陽イオンカラムを使用する場合、塩化ナトリウムのナトリウムNa+が負の電荷を持つ担体に結合し、結合していた正の電荷を持つタンパク質が担体から離れ、溶出されます。塩化ナトリウムを用いずにタンパク質を溶出する方法もあります。それは、溶出バッファーのpHを変化させることです。タンパク質がカラムの担体と結合しているのは、タンパク質と担体の電荷の状態が正-負の組み合わせだからです。タンパク質の電荷はpHによって変化させられるので、正-正もしくは負-負の組み合わせにすれば、タンパク質は担体から離れます。5のタンパク質は、負に荷電して担体に結合している。そこでpHが5以下のバッファー中にタンパク質を置くと、タンパク質は正に荷電し、カラムの担体との結合は失われます。7のタンパク質(正に荷電)は、pH7以上のバッファーにさらすことで、タンパク質の電荷を負にさせることにより溶出します。コメントをキャンセルメールアドレスが公開されることはありません。※サイト次回のコメントで使用するためブラウザーに自分の名前、メールアドレス、サイトを保存する。上に表示された文字を入力してください。date*日本語が含まれない投稿は無視されますのでご注意ください。イオン交換クロマトグラフィー精製とは何か?【原理と方法】タンパク質バイオ実験のコツSDS-PAGEの仕組み:原理と成分の役割(電荷、分子量)免疫沈降法(IP)のトラブルシューティング:うまくいかないときRECOMMENDこちらの記事も人気です。