kit(QIAGEN)を用いて製造業者の指示書に従ってさらに精製した。Biosystems)を用いて、RNA(2μg)を逆転写した。Bio)から入手した。Japan)および製造業者の指示書に従って、核タンパク質を抽出した。DDTおよび界面活性剤からなる1x低張緩衝液に添加し、次いで、氷上で15分間インキュベートした。g、15分、4°C)した。Buffer由来の核沈殿物を氷上で30分間インキュベートした。g、10分、4°C)した後、核画分を調製した。Japan)および製造業者の指示書に従って測定した。FOXO1コンセンサスオリゴヌクレオチドで処理した抽出物を陰性対照として用いた。Japan)で読み取った。Scientific)を加えた。μmフィルター(Millipore)を用いて、上清に含まれる残屑を除去した。technology)上で分離し、PVDF膜に移し、標準プロトコルに従ってブロッティングした。Health)を用いてバンドの強度を計算した。使用した抗体を表1-1および1-2に示す。生理食塩水中で再構成した。LPSを腹腔内に注射し、生存をモニターした。(abcam)および製造業者の指示書に従って測定した。(Qiagen)および製造業者の指示書に従って精製した。Technologies)に65°Cで17時間ハイブリダイズさせた。マイクロアレイスキャナーを用いてスキャンした。System)を用いて、マイクロアレイのデータを解析した。Averageを用いて、プローブセットの強度をまとめ、正規化した。(GSE48473)にて利用可能である。43-51)に従って設計した。mRNAに対して非特異的な配列を除外した。ODNsの配列を表2に示す。ODNsを同様に作製する。kit(Qiagen)を用いて精製した。Technologies)とともに37°Cで20分間インキュベートした。Technologies)で染色し、FLA-3000(Fujifilm)を用いて検出し、切断効率を決定した。P.(2008));Sigma-Aldrich)。Germany)およびRAW264.7細胞は、MEM(ケラチノサイト用)またはDMEM(RAW264.7細胞用)中で培養した。ODNまたはネガティブコントロールODNをトランスフェクトした。ng/mL)で2時間刺激し、回収した。USA)を用いて、Tukey多重比較検定、コントロールに対するすべてのカラムを比較するDunnett検定または二群間のみを比較する場合Student両側または片側t-検定を行った。【0061】(統計学的解析)すべてのデータは平均±SEMで示す。Student両側または片側t-検定を行った。生存曲線は、Kaplan-Meier生存解析を用いて解析し、log-rank検定で比較した。Software)を用いて実施した。有意差は、p<0.05の値で達成された。結果および考察(FoxO1ヘテロマウスは皮膚創傷治癒が促進する)FoxOファミリーは、酵母からほ乳類に至るまで代謝、老化等の様々な高次生命現象に関与していることが明らかとなっている。ほ乳類における転写因子Fox0ファミリーは、FoxO1、FoxO3a、FoxO4、FoxO6によって構成されている。おいても何らかの役割を担っていると推察される。おけるFoxOファミリーの遺伝子発現動態を解析した。その結果、FoxO1およびFoxO3aは、正常皮膚に比べ、受傷後3日および7日目において、顕著に発現上昇が認められた(図1A)。KOマウスを用いて、皮膚創傷治癒の肉眼的観察を行った。htマウスでは、コントロール(WT)マウスに比べ明らかな治癒の促進が認められた(図1B、図1C)。KOマウスでは明らかな差は認められなかった(データ示さず)。免疫染色法を用いて、創傷部位におけるFoxO1の発現細胞の同定を行った。発現が認められた(図1D)。受傷後7日目の損傷部においては、創傷部に浸潤したマクロファージおよび血管内皮細胞に発現が認められた(図1E、図1F)。htマウスでは、WTマウスに比べ有意に再上皮化が促進していた(図1G、図1H)。比べて有意に肉芽面積の減少が認められた(図1I、図1J)。おけるFoxO1の役割は、炎症制御および表皮細胞の増殖に関与していると推察される。79:34741-34749)ので、Foxo1+/-マウスとWTマウスの修復過程の脈管成長を調べた。内皮細胞のマーカーであるPECAM/CD31に対する共焦点顕微鏡により、三次元の血管構造を構築した。修復過程を通して、Foxo1+/-マウスとWTマウスは、肉芽組織内の血管密度においてほぼ同じ変化を示した。