Wntシグナルの強度や期間が、ポドサイトへの分化に与える影響については不明であった。そこでまず、NPCsからの間葉上皮転換を引き起こすために必要なWntシグナルの濃度と期間を検討した。実施例1で調製したNPCsを用いて、WntアゴニストとしてCHIR99021(CHIR)を用い、1~10μMの濃度にて、12~48時間処理し、6日目に分析を行った。初期のCHIR処理の後は、組織増殖及び生存を維持するために、基本培地として0.5μMのCHIRを継続的に添加した。NPCsを、3~5μMのCHIR、及び、24~48時間の組合せで処理することによって、METがおこり、上皮化したネフロン組織形成をもたらすことが判った。顕微鏡観察の結果を図4に示す。ポドサイトを誘導した一方、5μM及び48時間の処理は殆どポドサイトを誘導しなかった。このことから、マウス胚腎臓由来のNPCsを用いた場合は、3μMのCHIRで24時間処理する条件が最適であると判った。これらの結果は、NPCsの上皮化におけるWnt処理において、最適な濃度と期間があることを示唆しており、さらに初期のWntシグナルが、最終的なポドサイトの形成に大きく影響していることを示している。[0081]実施例3:腎上皮前駆凝集体(PA)から腎小体(RV)への分化におけるTGF-βシグナルの阻害NPCsからポドサイトへの誘導工程を検討するために、本発明者らは、上記のインビトロの培養系において中間工程を定義した。qRT-PCRの結果を図6に示す。これにより、誘導開始24時間の時点ではPAの、48時間の時点ではRVの分化ステージに相当することが明らかとなった。[0082]RVでは既に近位遠位軸に沿って極性形成がなされ、RVの近位領域はポドサイトの前駆体を含んでいると推測されるので、NPCsから近位RVへの直接の分化が、ポドサイトへの誘導効率を高めるとの仮説をたて、以下検討を行った。2)における、成長因子又は阻害剤の効果を確認した。高濃度のCHIR(2μM)は、基準条件である0.5μMのCHIRに比べ、最終的なポドサイトの割合を抑制した。Wntシグナル阻害物質であるIWR-1は、上皮化を阻害した。これに対し、Tgf-βシグナル経路阻害剤であるSB431542(SB)は、最終的なポドサイトの割合を有意に上昇させた。他の因子についても同様に検討した結果、アクチビンA、レチノイン酸(RA)、及びRAアンタゴニストであるBMS493は、ポドサイトの誘導効率を上昇させなかった。結果を、図7及び図8に示す。Foxc2の発現が亢進していた(図9)。CHIR)に比べて僅かに減少していた。+近位RV細胞の比率及び数ともに上昇していた。-細胞の増加及び近位RV細胞の減少をもたらした。これらの結果は、PAからRVへの過程におけるTGF-βシグナルの阻害が、近位側RVへの分化を促進し、その結果として、最終ポドサイトの比率及び数を増加させることを示唆している。3)において、増殖因子がポドサイトの誘導に与える影響について検証した。+ポドサイトを顕著に増加させた。2μMのCHIRの添加は、ポドサイトへの分化を完全に阻害した。Wntシグナル阻害物質は、ポドサイトの比率には有意には影響しなかった。この結果は、マウスにおいては、Wntシグナルの抑制がポドサイトへの分化を促進はしないが、強いWntシグナルはポドサイトへの分化を抑制することを示唆している。他の因子であるアクチビン及びRAシグナルアゴニスト/アンタゴニストは、基準条件(0.5μMのCHIR)に比べ、ポドサイトの割合に関しては有意な影響はなかった。細胞数は減少していた。Cdh1陽性遠位尿細管の細胞数は減少傾向であったが、有意な差ではなかった。遺伝子発現解析の結果、ポドサイト関連遺伝子の発現は上昇し、一方、ポドサイト以外のネフロン分画に関連する遺伝子の発現は減少していた。本発明の高効率誘導法を用いて作製したポドサイトは、MafB-GFPが陽性であるだけでなく、一連の典型的なポドサイト特異的タンパク質を発現していた(図13下)。3)におけるTGF-βシグナルの阻害は、ポドサイトへの分化を促進し、かつ、他のネフロン部位への分化を抑制することにより、ポドサイト誘導効率をあげることを示唆している。次に、ヒトiPS細胞から誘導したネフロン前駆細胞を用い、ポドサイトへの効率的な誘導を検討した。hiPSセルラインを用い、hiPSCからのポドサイトへの誘導効率をモニターした。マウスNPCsで確立した3段階の段階的なポドサイト分化誘導方法をhiPSに適用した。CHIR99021)で培養を9日目まで行った。