正確に考慮に入れなければならない重要なポイントをいくつか想像することができます。変換を確保するために重要である。以上)避ける必要があります。培地を使用してプロトコルを設定している。他の商業的に利用可能な定義された媒体は、我々が実験的に現在の仕事でこの点に対処しなかったにもかかわらず、有効で代替オプションを表すかもしれない。培地組成は、開始細胞集団の増殖速度に影響を与える可能性があるので、他の維持媒体へのプロトコルの適合は、0日目における初期密度の最適化を必要とする場合がある。トランスフェクション後、細胞を安定した細胞株にするためには、少なくとも2週間は抗生物質を選択しておくことが重要です。統合の後にクローンラインを導出し、トランスジーン発現のレベルと統合部位のより良い制御の観点からより均質な集団を得るために適切であるかもしれない。0日目の細胞の密度は、培地へのドキシサイクリン添加の時間、重要なパラメータである。代表的な結果セクションで述べたように、再現性を確保するために最適の細胞密度を推定しました。他の多能性幹細胞株には異なる初期密度を必要とする場合があることを除外することはできず、重複率は個々のライン間で大幅に異なる可能性があるため、パイロット実験で経験的に決定する必要があります。培地で2日間保持されない場合、分化はより遅く、効率が低下する可能性があります。5日目の解離は、分化細胞を強調せずに行われなければならない。インキュベーションの時間は、バッチごとに異なる場合があり、パイロット実験では慎重に見積もる必要があります。細胞解離試薬と共にインキュベーションすると、細胞単層全体がプレートから切り離される。説明されているように、ピペットで細胞の完全性を維持し、細胞培養の維持に悪影響を及ぼす可能性のある機械的ストレスを避けるために、ピペッティングによって慎重に解離する必要があります。ガラスよりも組織培養プラスチックによく付着することに気づいた。最適な細胞密着性と光学的特性を確保するポリマーカバースリップは、顕微鏡検査に基づくアプリケーションに適したオプションです。尾軸に沿ったパターニング。仕様をモデル化することは適さないであろう。かなりの量を生成することができます。達成された成熟度を考慮しても、これは運動ニューロンの神経変性疾患の分子基盤を研究するための有用なツールを表す。線の一貫した数は、最後の年に科学界によって生成されてきた。ニップモジュールの安定した統合によって容易に生成することができます。亜型に異なる感受性を与える細胞自律的決定基の特徴付けを、この方法の将来の応用可能性として、想像することができる。由来ニューロン14の胎児の性質のために挑戦することができる。老化を加速するために考案された以前の戦略は、より良い疾患モデルを得るために我々の方法と組み合わせてもよい。ベクターによって媒介される転写因子の誘導性発現に基づいて、他の誘導細胞型に適用することができる。得ることができることを示した。媒介的に表現することによって、他の神経亜型およびアストロサイトを含む他の細胞タイプの関心にこの方法を拡張する可能性を想像することができます。ためのセンターでイメージング施設に感謝したいと思います。私たちは、有益な議論のための生命ナノ科学センターのメンバーに感謝しています。助成金によって部分的にサポートされました。gdpr@jove.com.。