20で希釈した一次抗体と転写膜を緩やかに振盪しながら、4°Cで一晩インキュベートしてください。推奨の一次抗体希釈率は、各製品のデータシートあるいはWebの製品ページを参照してください。水もしくは同等の精製水で調製してください。mLに加えてください。mLに加えてください。3×SDS泳動バッファーに1/10容量の30×DTTを加え、新しい3×還元用泳動バッファーを用意してください。精製水で1×に希釈してください。mLに加え、混ぜ合わせてください。mLに加え、混ぜ合わせてください。mLに加えてください。mLに加え、よく混ぜ合わせてください。mLに加え、よく混ぜ合わせてください。このプロトコールは、CSTが推奨しているニトロセルロース膜用です。μmをお薦めしています。一般的なサンプル調製は、下記プロトコールを参照してください。調節因子を含む新しい培地で細胞を必要時間処理してください。吸引除去してください。μL/プレート)、細胞を溶解してください。プレートから細胞をこすり落とし、遠心用チューブに移して氷上に置いてください。細胞を完全に溶解するため、また、DNAをせん断しサンプルの粘性を下げるために10-15秒間超音波処理してください。5分間遠心してください。μLアプライし、電気泳動してください。同時に電気泳動することをお薦めしています。転写膜用の容量を記載しています。サイズの異なる転写膜をご使用の際は、適宜容量を調整してください。mLでニトロセルロース膜を室温で5分間洗浄してください。mL中で転写膜を室温で1時間インキュベートしてください。mLで各5分間、3回洗浄してください。mL中で転写膜を緩やかに振盪しながら、4°Cで一晩インキュベートしてください。mLで各5分間、3回洗浄してください。mL中で転写膜を緩やかに振盪しながら、室温で1時間インキュベートしてください。mLで各5分間、3回洗浄してください。検出操作Dに進んでください。mLで各5分間、3回洗浄してください。mL)、よく混ぜます。(乾燥させないでください)、ラップで包んでX線フィルムに露光してください。皮膚への暴露は避けてください。プロトコール限られた量のサンプルしか入手できない場合、既存の転写膜をリプロービングすることは、複数のタンパク質を1枚で別々にイムノブロッティングするために有効な手段です。最良な結果を得るためには、新たにブロットした転写膜の使用が推奨されていることに留意してください。リプロービングは有用な方法ではありますが、回数を重ねるとバックグラウンドが高くなる可能性があります。加えて、リプロービング後のシグナルがリプロービング前の最初の抗体によるシグナルではないことを確認する必要があります。そのために、リプロービング前の抗体複合体が除去されていることを確認してください。この行程は、リプローブとして次の抗体を加える前に、ECL試薬に再暴露させて、シグナルが検出されないことで確認できます。水もしくは同等の精製水で調製してください。μLを混ぜ合わせてください。使用直前に調製し、新鮮なバッファーを用意してください。プロトコールフィルム露光後、TBSTで転写膜を各5分間、4回洗浄してください。転写膜が乾燥していない場合に最良の結果が得られます。転写膜をストリッピングバッファーと軽く振盪しながら50°Cで30分間インキュベートしてください。TBSTで転写膜を各5分間、6回洗浄してください。mLで転写膜を各5分間、2回洗浄してください。Reagentと緩やかに振盪しながら室温で1分間インキュベートしてください。転写膜の余分な液を除去してください。乾燥させないでください。ラップで包み、X線フィルムに露光してください。再度TBSTで転写膜を各5分間、4回洗浄してください。これで転写膜の再利用が可能です。ウェスタンブロッティングプロトコールの「転写膜のブロッキングと抗体反応」ステップに従い、検出を行ってください。もちまして本サイトを閉鎖させていただきます。登録変更をお願いいたします。