マウスの作製支援を行っています。ホームページをご覧ください。承認番号4111により実施しています。外部から導入された遺伝子が宿主ゲノムに組み込まれる際に、内在性遺伝子座に挿入されると、その遺伝子が破壊されることを利用する(図1)。破壊された遺伝子は、RACE法やLAM-PCR法によって同定するが、RACE法ではおおよその位置しか特定できないのに対して、LAM-PCR法では1塩基レベルで挿入位置が特定できる(図2)。【図1】(A)プロモータートラップ;発現している内在性遺伝子のプロモーターの下流に挿入された場合にのみレポーター遺伝子(X)が転写される。(B)ポリAトラップ;内在性遺伝子のポリA付加シグナルの前に挿入された場合のみレポーター遺伝子(X)が発現する。いずれの場合も薬剤耐性遺伝子やGFP蛍光遺伝子をレポーターとして用いることにより選択する。【図2】(A)ポリAトラップでは、レポーター遺伝子の後にトラップした遺伝子のエクソンが繋がったキメラmRNAが作られる。それを基に3'-RACEすることにより、破壊された遺伝子を同定する。ベクターが挿入されたイントロンは分かるが、塩基レベルでの同定は困難である。(B)LAM-PCR法ではリンカー配列とベクター配列の間で増幅した産物をシーケンスできるので、挿入位置を1塩基レベルで特定できる。2.レンチウイルスベクターを用いた遺伝子トラップ我々はポリA遺伝子トラップカセットを挿入したレンチウイルスベクターを用いることでランダム遺伝子破壊したマウスを作製している。公的バイオリソースセンターを通じて分与開始している。LT-OPGシリーズ;PGKプロモーターで発現するEGFPを基に選択して作製した遺伝子破壊マウスLT-OCGシリーズ;CAGプロモーターで発現するEGFPを基に選択して作製した遺伝子破壊マウス詳細については直接、伊川正人までお問い合わせください。