効率的な細胞溶解およびタンパク質抽出は、2-Dゲル分析などの下流の分析手法で高品質の結果を得るために重要なステップです。細胞または組織中のタンパク質を変性させ可溶化する適切なカオトロープと界面活性剤を組み合わせることで、効率的で再現性のあるタンパク質抽出を行うことができます。弊社では、広範囲のサンプルを対象とした6種類の抽出バッファーを揃えています(表2.7)。サンプルの性質によって最適なバッファーが異なります。-IIIこれらのバッファーは乾燥粉末ですので、カルバミル化に関連する問題が生じません。使用するサンプルおよび分析手法によっては、酵素阻害剤や還元剤などの添加剤を添加できます(上記の一般的な考慮事項を参照してください)。これらのバッファーは二次元電気泳動に適合しますが、一次元電気泳動など他の分析手法にも使用できる場合があります。)の蛍光標識に適合しますが、以下のような例外があります。Buffer-Iは最適ではありません。標識効率がわずかに低下します。Buffer-IIIおよびIVは適していません。標識効率が大幅に低下します。Buffer-IおよびIIは大半の分析手法に適しています。Buffer-III、IV、VまたはVIを使用します。二次元電気泳動ワークフローの例を下の図2.5に示します。以下の例(図2.6)では、6種類の抽出バッファーのラット肝タンパク質抽出能力を標準バッファーと比較しました。dyeを使用する場合にはこのバッファーは適していません。Buffer-I~VIを使用して抽出しました。8-18を用いて泳動しました。μlのサンプルをアプライしました。mlを加えて溶解します。Bufferのボトルに直接添加します。(キャリアアンフォライト)、ブロモフェノールブルー染料などの必要な添加剤を加えます。一定間隔でボルテックスしながら混合し、溶液が透明になるまで室温でインキュベートします。分析手法によってはDTTおよびEDTAを添加します。mM)に達するようにDTTおよびEDTAを添加して調製します。Mixの項を参照してください)。Bufferを組織に加えます。Kitを使用した組織破砕など、適切なホモジナイゼーション手法を用いて組織構造を破壊します。この方法で、組織破壊、タンパク質の可溶化および有害な酵素活性の不活化を同時に行います。Bufferをさらに加えて、最初のサンプル量の5~10倍とします。gで20分間遠心分離します。ペレットをチューブ内に残して上清を慎重に捨てます。Kitなど、カオトロープや界面活性剤合に適合し、必要であれば還元剤にも適合する方法を用いてタンパク質含量を定量します。二次元電気泳動を行うか、他の分析手法を用いる場合にはワークフローの次のステップに進みます。細胞破壊または組織ホモジナイズを行うときに、瞬間凍結させたサンプルをトリクロロ酢酸(TCA)存在下で破砕するなどの方法で、タンパク質を沈殿させて不溶化すると有用な場合があります。)は溶解したままなので簡単に除去できます。ろ過または遠心分離で沈殿物を回収し、タンパク質を適切なバッファーに再溶解できます。沈殿法については、第3章のサンプル中の夾雑物除去との関連で詳しく説明します。略号と用語、記号解説お問合せフォーム※よくあるお問合せとご回答(FAQ)は「こちらで»」ご覧いただけます。※ファイルを添付してのお問合せは、お手数ですが「Tech-JP@ge.comまでメールにて」お問合せください。関する情報の収集・分析及び提供、新製品・新サービスの研究開発等並びに市場調査のために利用します。当社は個人情報を業務委託先に預ける場合がありますが、個人情報の取扱いに関する法令、国が定める指針その他の規範に従い、委託先に対する必要かつ適切な監督を行います。9:00〜12:00、13:00〜17:30)にて承ります。