transformants/μgプラスミドDNA程度ですが、エレクトロポレーション用コンピテントセルはさらに1桁程度高い導入効率です。ケミカルコンピテントセルでは特別な装置は不要で、簡単な操作でプラスミド導入を行えます。サイズの大きなプラスミドやライブラリー作製時にはエレクトロポレーション用コンピテントセルを用いた導入をお勧めします。大腸菌は本来、外来DNAを切断する性質を持っており、ある種のメチル化DNAやPCR産物など塩基が修飾されていないDNAを切断してしまいます。(mcrA、mcrBなど)を欠損した株が利用されています。Iなど)はメチル化されたプラスミドDNAを切断できないため、Dam、Dcmメチラーゼなどのメチレーション系遺伝子の一部を欠損した株でプラスミドを調製する必要があります。タカラバイオでは各種コンピテントセルをご用意していますので、使用するプラスミドや実験目的に適した製品をご利用ください。K12株由来の大腸菌株が使用されます。定める認定宿主ベクター系の宿主として実験分類/区分1(クラス1)に指定されている大腸菌は、K12株とB株由来の大腸菌のみです。ompT)を欠損しているため、BL21株をはじめ、主に導入遺伝子の組換えタンパク質発現用宿主として使用されています。異種生物由来の遺伝子が導入されていない大腸菌コンピテントセルそのものはカルタヘナ法の規制対象ではありません。BL21系の大腸菌は形質転換効率が低くクローニング操作には適していません。kbでは約10%程度となります。kb程度のアデノウイルスプラスミドもケミカルコンピテントセルでクローニング可能です(pUC系のプラスミドの場合、サイズ増加に伴い複製、分配が不安定となりサブクローニングが困難になります。サイズの大きなDNA、安定性に問題のあるDNAはpBR系の低コピープラスミドをお使いください)。9028)の使用をお勧めします。pg程度のプラスミドDNAを用います。bufferや滅菌水に溶解したものを使用します。Cellsを再度凍結保存することはお勧めしません。やむを得ず必要な場合、ドライアイス/エタノール中で凍結させ、-80°Cで保存してください。形質転換効率は1桁以上低下する可能性があります。形質転換後の正しいインサートを持つクローンが小さなコロニーを形成する場合があります。mm程度のコロニーの周辺に生じる多数の小さなコロニーはサテライトコロニーと呼ばれプラスミドを保有していません。通常、クローニング操作には伝達性に関係するF因子、R因子を持たない大腸菌株が使用されていますので、伝達性、感染性はありません。