mlの蒸留水に溶解する。1バイアルは96ウェル分に相当する。溶解液は-80°Cで3週間は保存可能である。μlの蒸留水で溶解する。溶解液を希釈用反応緩衝液で2倍希釈物を最高濃度として段階希釈系列を作製する。標準品の活性はロットごとに異なるので、測定ごとに検量線を作成する。0濃度は反応緩衝液を用いる。希釈した標準品は保存できないが、希釈前の溶解液のままであれば、-80°Cで3週間は保存可能である。本来、活性標準品には精製酵素もしくは細胞抽出粗酵素を用いるべきところであるが、本酵素活性は非常に不安定で長期間の保存に耐えられれない。そのため、本キットでは血小板由来ヘパラン分解酵素活性画分による37°C、45分間の分解反応を実施したときに示される酵素活性とほぼ等しい検量線になるように、未標識のヘパラン硫酸を代替標準品として調製している。キット中の活性標準品を指標に異なる日に、複数回測定され、その結果を比較されるときは、かならず反応温度37°C、反応分解時間45分で実施してください。ngのビオチン化ヘパラン硫酸を分解できる活性量をあらわす。mlの蒸留水で溶解する。一度に使いきらない場合は-20°C以下に凍結保存する。この状態で3週間は安定である。室温に戻してそのまま使用する。使用前にすでに濃い青色に変色していないことを確認する。金属イオンと接触すると呈色する恐れがあるので注意する。数回に分けて使用する場合はあらかじめ必要量を取り分けて使用する。酵素反応用に用いる96穴プレート(使用済みの培養プレートを洗浄したものを利用してもよい)。浮遊細胞の場合1~5×106個の細胞をPBSで洗浄後、ペレットとして細胞を回収する。mlの細胞抽出用緩衝液を加え、軽くボルテックスミキサーにかけ懸濁する。rpm(10,000×g)で4°C5分間遠心分離し、上清をサンプルとする。mlの細胞抽出用緩衝液を加え、ラバーポリスマンを使って細胞をマイクロチューブに回収する。rpm(10,000×g)で4°C5分間遠心分離し、上清をサンプルとする。大量サンプル処理で遠心が不可能であれば、懸濁状態のままでもよい。血小板を遠心で沈査として集め、適当量の細胞抽出液で懸濁する。rpm(10,000×g)で4°C5分間遠心分離し、上清をサンプルとする。血小板を含む血漿の場合は等量の細胞抽出用緩衝液と混合、懸濁し、不溶物があれば遠心除去する。抽出したサンプルを反応緩衝液と1:1に混合し(2倍希釈物となる)測定する。いずれの場合も、調製後はすみやかに測定することが望ましいが、やむを得ず保存する場合は、-80°Cで2週間を限度とする。μl/wellずつ加える。μl/wellずつ添加し、37°Cで45分インキュベートする(活性標準品は反応時間45分用に濃度設定している。測定サンプルの活性が微弱と予想される場合は、定性的には数時間に延長して検出してもよい)。μl/wellずつ加える(液の移し換えなどで液量が不足している場合はすべてのサンプル・標準品の投入液量を統一することで問題はない)。Tween20/PBS)で3回洗浄する。μlずつ加え、37°Cで30分インキュベートする。Tween20/PBS)で3回洗浄する。μlずつ加え、室温で5~15分間発色させる。反応は室温の影響を受けるので、発色が過剰にならないように、時間に注意する。μlずつ加え、反応を停止させ、よく混和する。nmで各ウェルの吸光度を測定する。発色は反応停止後、1時間まで安定である。活性標準品を用いて検量線を作成する場合は、グラフ用紙の横軸に各酵素活性単位を、縦軸にそれに対応する吸光度をブロットする。この検量線を利用して、サンプルの吸光度から対応する酵素活性単位を算出する。