50K-纤维素酶,20K-纤维素酶,50K-纤维素酶B或具有CBD的蛋白质。(例如,每100kg浮石用1kg商品酶代替)。40-80°C,优选50-70°C之间,最优选在50-60°C之间。丝状真菌目录,第18版,S.C?Jong和M.J.Edwards编辑,(1991):1升含1g酵母提取物,1g牛肉膏,2g胰蛋白胨,痕量FeSO4,10g葡萄糖和15g琼脂;pH为7.2)上。琼脂斜面在45°C培养3-6天。25:1169(1983))中:1升含15gKH2PO4,15g(NH4)2SO4,2.4ml?1M?MgSO4×7H2O,5.4ml?1M?CaCl2,20g?SOlKa?floc,15g玉米粉,1g酵母提取物和10ml100×痕量元素溶液1,其中1升100×痕量元素溶液含0.5gFeSO4×7H2O,0.156gMnSO4×H2O,0.14gZnSO4×7H2O和0.49gCoSO4×7H2O;pH调为pH6.5。3g燕麦spelt木聚糖,2g?CaCO3,1.5g大豆粉,1.5g(NH4)2HPO4,1g大麦糠,0.5g?KH2PO4,0.5g?MgSO4×7H2O,0.5g?NaCl,0.5ml痕量元件溶液1(1升含:1.6g?MnSO2,3.45g?ZnSO4×7H2O,和2.0g?CoCl4×6H2O)和0.5ml痕量元素溶液2(1升含:5.0g?FeSO4×7H2O和2滴浓H2SO4);pH调至pH6.5。[12.5%(v/v)]和磷酸[1.7%(v/v)]将pH维持在pH6.5±0.4。发酵温度为45°C。:ALKO?4179为大约40nkat/ml,ALKO?4124为大约90nkat/ml,ALKO?4237为大约30nkat/ml。LKO?4179和ALKO?4237为大约40nkat/ml,ALKO?4124为大约90nkat/ml,ALKO?4125为大约100nkat/ml。pH值为4.3,5.4,6.3,7.3,8.1和8.7,对菌株ALKO?4124为4.3,5.4,6.4,7.3,8.1和8.5;对于菌株ALKO?4237为4.4,5.3,6.2,7.1,8.0和8.5;对于菌株ALKO?4265为4.3,5.4,6.3,7.2,8.1和8.5,对于菌株ALKO?4125为4.3,5.4,6.4,7.3,8.1和8.5。A和苯甲基磺酰氟(PMSF)分别为1.0μg/ml和174μg/ml。在大约pH5.4-6.3检测到最大活性(图1A)。在大约pH6.4下检测到最大活性(图2A)。在大约pH5.5-6.5时检测到最大活性(图4A)。在大约pH5.3时检测到最大活性(图3A)。50mM?McI?lvain’s缓冲液,pH7.0中稀释。pH值为7.3(ALKO?4179,ALKO?4124和ALKO4125)和7.2(ALKO?4237和ALKO?4265)。样品在40°C,50°C和60培养60分钟。在40°C保留大约30%的该活性(图1B)。在50°C保留大约70%的活性,在40°C保留30%(图2B)。在50°C保留大约60%的活性,在40°C保留40%(图3B)。在50°C保留大约50%的活性,在40°C保留30%(图4B)。在50°C保留大约80%的活性,在40°C保留70%(图5B)。12×12cm的小块布样。50°CLaunder-Ometer水浴中。将它们在200ml?0.01NaOH中浸泡10分钟并用冷水漂洗10分钟。测量织物两侧(反面和正面)的颜色。报道了复染取决于pH和/或酶类型。ALKO?4237(实施例1)和ALKO?4467纤维素酶在Launder-Ometer中处理100%棉纺织物。(称重前,织物控制在2H?2°C及50+5%RH的大气中)。(1=许多球,5=不起球)。:A.预处理(仅对纺织物)。60°C,10分钟,Ecostone?A?200(Primalco?Ltd.Biotec,Finland)1ml/l水。);处理时间20-90分钟,优选30-60分钟;酶剂量50-900hKat/g织物或编织品,优选200-600nKat/g织物或编织品。1.0kg斜纹粗棉布服装(含2种不同类型的织物)。处理条件如下:A.脱浆。100升水,60°C,10分钟;100ml?Ecostone?A200(Primalco?Ltd_Biotec,Finland)。B.纤维素酶处理。40°C,10分钟。(检查服装内面)。(值越高,服装越亮)。(负值越大,服装越兰)。I,含大约10%的回收的ECU,在大约150mM?NaCl处洗脱,峰II(大约30%的ECU)在230mM?NaCl,峰III(大约20%的ECU)在270mM?NaCl处,峰IV(大约40%的ECU)在320mM?NaCl处。?;故匝榱烁骱?0ECU/g斜纹粗棉布的峰I和II的混合物。结果L(正面)值为7.3,b(反面)为2.5。ALKO?4237生长培养基(4.5升)。4ms/cm且用1MNaOH调成pH8.0。25ms/cm处洗脱称为峰III/IV的单一峰,代替分离的峰III和IV。b(反面)表示反面的兰色(即,复染)。)外,按实施例3所述用Minolta?ChromaMeter测量。170ml含1mM?EDTA的25mM?PIPES/KOH?pH6.0中。25mM含1mM?EDTA的乙酸钠pH4.0中,然后在SP-SepharoseTM上分级分离。用含1mM?EDTA的25mM?PIPES/KOHpH6.0洗涤并溶于含0.25mM?EDTA的25mM?Tris/HCl?pH7.2。1mM?EDTA的25mM乙酸钠pH4.0。50kDa的蛋白质。)并上样到用含1mM?EDTA和15g%硫酸铵的25mMPIPES/KOH?pH6.0平衡的Phenyl?SepharoseTM的1.5×8.5cm柱上。Phenyl?SepharoseTM上从SP-SepharoseTM洗脱的第二(非活性)峰(图10中馏分19至23)获得更大量的50K-纤维素酶B。50K-纤维素酶和50K-纤维素酶B。pH5时,每克斜纹粗棉布0.2mg的20K-纤维素酶将L正面从3.2增加到5.2。1.3和1.5)。35kDa处的强带。20K-纤维素酶在中性pH的生物磨洗中,效果较好,如表VII所示。(L反面=-0.5,相对于-2.9,b反面=3.6,相对于5.5)。(表VIII)。(L反面更正,b面较小)。(在实施例9的表VI中)。(ΔA540)为0.2到0.25。在该临界浓度上在DNS系统中形成颜色,向贮存的DNS试剂中新加入0.12mM葡萄糖。(称为“改良”方法)。7μg/ml在25mM?Tris-HCl,0.2mM?EDTA中100°C对其保温30或60分钟,然后在pH7.0和50°C下测定。52%和35%,在pH8.8时分别保留40%和22%。(在室温下测量这些pH值;在100°C的实际pH较低)。70°C(图15)。在pH10时几乎为50%。70°C时该酶的pH依赖性。在10分钟测定中,在pH4.5至8的范围内,该酶在70°C比在50°C具有更大活性,但在pH10时大约活性相等(图16A)。(对4-methylumblliferyl-β-D-乳糖苷,基本上按van?Tilbeurgh等,在酶学方法[1988]vol.160,pp45-59中所述测定)。在Western分析中,50K-纤维素酶被针对T.reesei葡聚糖内切酶I产生的抗血清(KH1057)强烈识别,但仅被抗T.reesei纤维素生物水解酶I和II的抗血清(分别为KH1050和KH1053)微弱识别。