アクロバットリーダーが必要です。無料でダウンロードできます。bacteriumDNAを脱リン酸化後、容易に熱失活でき、速やかにライゲーション反応できます。BAPとCIAPの長所を併せ持つ、低温性細菌由来アルカリフォスファターゼです。低温細菌由来なのでSAPやCIAPと同様に、使用後に容易に熱失活性できるため、速やかにライゲーション反応に移れます。BAPはフェノール処理でも容易には失活しません。詳しくはこちら60°Cでは37°Cの約4倍の活性を示すのでBAPと同様、DNAの末端構造(平滑末端や3’突出末端)にかかわらず60°C、30分間の処理によりDNA末端を脱リン酸化できます。(一方、CIAPやSAPは60°Cでは急激に失活性してしまいます。MSDS該当商品はMSDSがダウンロードできます。PAPは容易に熱失活できるが、BAPはフェノールでも容易には失活しない。図に示されているように、BAP処理した場合は、得られる白色コロニー数が、PAPに比べ少なくなっている。これは脱リン酸化後の失活操作にもかかわらず活性を有するBAPが残存してしまい、インサートDNA側からもリン酸基を奪い取ってしまうためである。PAPは熱処理でもフェノール処理でも容易に完全に失活できるが、BAPはフェノール処理でも容易には失活せず、クローニング効率にまで影響を及ぼすことがある。加えるか、失活操作時に2回以上のフェノール処理を行わなくてはならない。unitのPAPで脱リン酸化処理を行った。脱リン酸化反応溶液を失活処理せずに直接ライゲーション反応に用いた。脱リン酸化反応溶液に等量のフェノールを加え、30秒間ボルテックスした。エーテル抽出、エタノール沈殿後、沈殿を乾燥させ、滅菌水を加えて再溶解した。この水溶液をライゲーション反応に用いた。脱リン酸化反応溶液を熱失活処理しただけで直接ライゲーション反応に用いた。ベクターに約1kbのインサートDNAを加えてライゲーション反応を行った。ライゲーション反応後、XL1-Blueにトランスフォームした。図には、プレート上の白色コロニー数が示してある。このページのトップへ。