Abstract申請者らが見出した新規の病態マーカータンパク質は蘇生後脳症の早期の神経学的予後予測に有効ではあるが、本来の分子機能や生理的役割が未解明であるため、病態の分子機序との関連や治療ターゲットとしての可能性は依然として不明である。構造・機能解析を通じて蘇生後脳症における新規マーカータンパク質の機能的意義を明らかにする。平成21年度は新規蘇生後脳症マーカータンパク質の機能解析を目的として、タンパク質相互作用解析、ヒト培養細胞系での安定発現株の作製、および翻訳後修飾解析を行った。S-100HRカラム)により推定した。<安定発現株>マーカータンパク質をコードするcDNAを含むベクターを293細胞に導入し、G418存在下でのクローニングと長期培養後に複数のG418耐性クローンを得た。抗タグ抗体を利用したウエスタンブロット法では、いずれのクローンもマーカータンパク質陰性であり、定常的、あるいは高濃度のタンパク質発現が293細胞の増殖に対して抑制的に働くと考えられた。コンディショナルな発現系への変更が必要と考えられる。<翻訳後修飾解析>組み換えタンパク質はSDS-PAGEにおいて還元剤耐性のダブレットを示すことから、ゲル内消化後のペプチドをLC/MSにて解析した。同定された7種類のペプチド配列中に、N末端アセチル化を含む3箇所の翻訳後修飾部位を見出した。ゲル上の分子量と質量分析データから71番目のシステイン残基を含む領域に約1kDaの修飾が付加していることが想定された。