×この技術を簡単クリック査定この機能をご利用いただくには、会員登録(無料)が必要です。出願した特許の牽制数、引用された数などを知る事ができます。気になる技術や特許をブックマークしておけば、いつでも後から読むことができます。後で印刷するために、公報をPDFでダウンロードできます。会員登録してastamuseを使えば、もっと簡単に便利にお使いいただけます。会員登録(無料)「astamuse」は世界中の挑戦したい社会課題に挑戦し、未来を創る人のプラットフォームです。※この項目の情報は公開日時点(2016年2月8日)のものです。(11)課題インフラマソーム活性化制御物質のスクリーニング方法の提供。この情報を共有FacebookTwitterGoogle+LinkedIn背景インフラマソームは細胞質に存在し、炎症反応を誘導するタンパク質複合体である。様々な炎症性疾患の原因になることが明らかとなってきている。インフラマソームは主に、病原体などの危険シグナルを認識する受容体タンパク質、アダプタータンパク質ASC(ピリンドメインとカスパーゼリクルートドメインを有する複合タンパク質)、及びカスパーゼ-1から形成される。受容体タンパク質としては、NLRP1、NLRP3、NLRP4、NLRP6等のNLRタンパク質ファミリータンパク質、AIM2等が知られている。通常、これらの受容体タンパク質は不活性型で存在するが、活性化シグナル(病原体などの危険シグナル)を受けると、自己重合化した受容体タンパク質とASC、カスパーゼ-1が結合してインフラマソームを形成し、活性型となる。この状態になると、カスパーゼ-1同士が近接化し、この近接化がカスパーゼ-1自身のインフラマソームからの切断を誘導し、それによりカスパーゼ-1が活性化される。活性化されたカスパーゼ-1は、IL-1β、IL-18の前駆体であるpro-IL-1β、pro-IL-18を、それぞれIL-1β、IL-18にプロセシングする。内因性及び外因性の様々な危険シグナルによって活性化されることが知られるNLRP3を受容体タンパク質として有するNLRP3インフラマソームの場合、C末端にシグナル応答性に必須な役割を果たすLRRs(ロイシンリッチリピート)、中央にNOD、N末端にピリンドメイン(PD)を有するNLRP3と、N末端にPD、C末端にCARDを有するASCと、N末端にCARD、中央にp20、C末端にp10を有するカスパーゼ-1が結合することにより、インフラマソームが形成され活性化される(図1)。インフラマソームの構成ドメインの1つであるピリンドメイン(PD)はNLRP3とASCの両方に存在しており、これらのPD同士の結合は、インフラマソーム形成に関与している。PDはその一部にリジンに富んだアミノ酸配列(リジンリッチ配列)を持っており、この部位がPD同士の結合に関わっていることが報告されている(非特許文献1)。IL-1β、IL-18は炎症性サイトカインであり、これらのサイトカインの過剰分泌は、多くの疾病との強い関連性が報告されている。1種であるクライオパイリン関連周期熱症候群が抗IL-1薬によって改善されること(非特許文献2及び3)、2型糖尿病がIL-1の受容体アンタゴニストで改善されること(非特許文献4)などが報告されている。マウスを用いた研究で、カスパーゼ-1阻害剤がインスリンの感受性や脂肪細胞の代謝機能を改善すること(非特許文献5)、ASC欠損マウスを用いた研究で、動脈硬化様の内膜肥厚病変が抑制されること(非特許文献6)も報告されている。様々な疾患とインフラマソームとの関係が報告されている(非特許文献7)。前述のとおり、受容体タンパク質がASCと結合してインフラマソームが形成されるとカスパーゼ-1が放出され、pro-IL-1β、pro-IL-18をIL-1β、IL-18にプロセシングする。インフラマソーム形成(インフラマソーム活性化)の阻害は、カスパーゼ-1の産生抑制、IL-1の産生抑制へとつながり、かつ、ASC欠損と同様の状態を作ることから、前述した抗IL-1薬、カスパーゼ-1阻害剤又はASC欠損で見られた効果と同様の効果が得られると考えられる。インフラマソーム形成を阻害する物質の探索はまだ十分進んでいない。薬剤開発において有用と思われる低分子化合物からのインフラマソーム形成阻害物質の取得はなされていない。インフラマソームの阻害因子として作用できるPyrin-onlyタンパク質が報告されている(特許文献1)。特許文献2には、NLRP3インフラマソームの阻害剤を痛風の治療薬として用いることが開示されている。特許文献3には、インフラマソームの阻害剤として、IL-1βの放出を抑制する物質をスクリーニングし、紫外線ダメージ回復作用剤として用いることが開示されている。インフラマソーム形成を阻害することによりインフラマソーム活性化を制御する物質、特に低分子のインフラマソーム活性化制御物質の効果的なスクリーニング方法は見出されていない。概要インフラマソーム活性化制御物質のスクリーニング方法の提供。請求項1モノカルボン酸を、ピリンドメインのリジンリッチ配列を含むポリペプチドと接触させて、リジンリッチ配列に結合するモノカルボン酸を選抜することを含む、インフラマソーム活性化制御物質のスクリーニング方法。配列番号4に示されるアミノ酸配列と80%以上の配列同一性を示しかつリジンリッチ配列を保持するアミノ酸配列からなるポリペプチドである、請求項1に記載の方法。用いて、インフラマソームの活性化を制御する方法。含む、インフラマソーム活性化制御用の医薬品又は飲食品。0001本発明は、インフラマソーム活性化制御物質のスクリーニング方法に関する。背景技術0002インフラマソームは細胞質に存在し、炎症反応を誘導するタンパク質複合体である。様々な炎症性疾患の原因になることが明らかとなってきている。0003インフラマソームは主に、病原体などの危険シグナルを認識する受容体タンパク質、アダプタータンパク質ASC(ピリンドメインとカスパーゼリクルートドメインを有する複合タンパク質)、及びカスパーゼ-1から形成される。受容体タンパク質としては、NLRP1、NLRP3、NLRP4、NLRP6等のNLRタンパク質ファミリータンパク質、AIM2等が知られている。通常、これらの受容体タンパク質は不活性型で存在するが、活性化シグナル(病原体などの危険シグナル)を受けると、自己重合化した受容体タンパク質とASC、カスパーゼ-1が結合してインフラマソームを形成し、活性型となる。この状態になると、カスパーゼ-1同士が近接化し、この近接化がカスパーゼ-1自身のインフラマソームからの切断を誘導し、それによりカスパーゼ-1が活性化される。活性化されたカスパーゼ-1は、IL-1β、IL-18の前駆体であるpro-IL-1β、pro-IL-18を、それぞれIL-1β、IL-18にプロセシングする。内因性及び外因性の様々な危険シグナルによって活性化されることが知られるNLRP3を受容体タンパク質として有するNLRP3インフラマソームの場合、C末端にシグナル応答性に必須な役割を果たすLRRs(ロイシンリッチリピート)、中央にNOD、N末端にピリンドメイン(PD)を有するNLRP3と、N末端にPD、C末端にCARDを有するASCと、N末端にCARD、中央にp20、C末端にp10を有するカスパーゼ-1が結合することにより、インフラマソームが形成され活性化される(図1)。インフラマソームの構成ドメインの1つであるピリンドメイン(PD)はNLRP3とASCの両方に存在しており、これらのPD同士の結合は、インフラマソーム形成に関与している。PDはその一部にリジンに富んだアミノ酸配列(リジンリッチ配列)を持っており、この部位がPD同士の結合に関わっていることが報告されている(非特許文献1)。図10004IL-1β、IL-18は炎症性サイトカインであり、これらのサイトカインの過剰分泌は、多くの疾病との強い関連性が報告されている。1種であるクライオパイリン関連周期熱症候群が抗IL-1薬によって改善されること(非特許文献2及び3)、2型糖尿病がIL-1の受容体アンタゴニストで改善されること(非特許文献4)などが報告されている。マウスを用いた研究で、カスパーゼ-1阻害剤がインスリンの感受性や脂肪細胞の代謝機能を改善すること(非特許文献5)、ASC欠損マウスを用いた研究で、動脈硬化様の内膜肥厚病変が抑制されること(非特許文献6)も報告されている。様々な疾患とインフラマソームとの関係が報告されている(非特許文献7)。0005前述のとおり、受容体タンパク質がASCと結合してインフラマソームが形成されるとカスパーゼ-1が放出され、pro-IL-1β、pro-IL-18をIL-1β、IL-18にプロセシングする。インフラマソーム形成(インフラマソーム活性化)の阻害は、カスパーゼ-1の産生抑制、IL-1の産生抑制へとつながり、かつ、ASC欠損と同様の状態を作ることから、前述した抗IL-1薬、カスパーゼ-1阻害剤又はASC欠損で見られた効果と同様の効果が得られると考えられる。インフラマソーム形成を阻害する物質の探索はまだ十分進んでいない。薬剤開発において有用と思われる低分子化合物からのインフラマソーム形成阻害物質の取得はなされていない。0006インフラマソームの阻害因子として作用できるPyrin-onlyタンパク質が報告されている(特許文献1)。特許文献2には、NLRP3インフラマソームの阻害剤を痛風の治療薬として用いることが開示されている。特許文献3には、インフラマソームの阻害剤として、IL-1βの放出を抑制する物質をスクリーニングし、紫外線ダメージ回復作用剤として用いることが開示されている。インフラマソーム形成を阻害することによりインフラマソーム活性化を制御する物質、特に低分子のインフラマソーム活性化制御物質の効果的なスクリーニング方法は見出されていない。p.223-228発明が解決しようとする課題0009本発明は、インフラマソーム活性化制御物質の効果的なスクリーニング方法を提供することを課題とする。課題を解決するための手段0010本発明者らは、上記課題を解決するため鋭意検討を重ねた結果、各種モノカルボン酸が、インフラマソームを構成するピリンドメイン(PD)中のリジンリッチ配列に結合することにより、インフラマソームの活性化を制御できることを見出し、本発明を完成するに至った。0011すなわち、本発明は以下を包含する。[1]モノカルボン酸を、ピリンドメインのリジンリッチ配列を含むポリペプチドと接触させて、リジンリッチ配列に結合するモノカルボン酸を選抜することを含む、インフラマソーム活性化制御物質のスクリーニング方法。配列番号4に示されるアミノ酸配列と80%以上の配列同一性を示しかつリジンリッチ配列を保持するアミノ酸配列からなるポリペプチドであり得る。含まれる前記モノカルボン酸は短鎖脂肪酸又はアラニンであることも好ましい。カプロン酸、及びエナント酸からなる群から選択されるものであってよい。炎症性サイトカイン産生制御用である。その場合、炎症性サイトカインはIL-1β及びIL-18であり得る。用いて、インフラマソームの活性化を制御する方法。含む、インフラマソーム活性化制御用の医薬品又は飲食品。効果0012本発明によれば、インフラマソーム活性化を効果的に制御できる物質をスクリーニングすることができる。図面の簡単な説明0013図1は、インフラマソームの形成及びその活性化の過程を示した模式図である。図2は、プロピオン酸又は酪酸によるインフラマソームの形成阻害を示した写真である。図3は、プロピオン酸固定化マイクロビーズ及び酪酸固定化マイクロビーズの作製法の概要を示した図である。図4は、インフラマソーム形成制御物質のスクリーニングに用いられるツールを示した模式図である。Aは被検物質を固定化したマイクロビーズ、Bは異なる長さのASCタンパク質を示す。Richはリジンリッチ配列を示す。図5は、ASCのリジンリッチ配列へのプロピオン酸の結合を示した写真である。図6は、各種NLRPファミリータンパク質に対するプロピオン酸の結合を示した写真である。図7は、ASCへの短鎖脂肪酸の競合阻害試験の結果を示す写真である。図8は、プロピオン酸及び酪酸によるカスパーゼ-1活性上昇抑制効果を示す図である。(-)は無添加コントロールである。