2014年8月21日にオンラインで公開。最初に公開されたこの記事のバージョンでは、図2、4、8、および9が適用されたソースは引用されておらず、正しくクレジットされていません。この記事のHTMLおよびPDFバージョンでエラーが修正されました。(AMD)などの多くの変性および炎症性網膜障害で活性化されます。総称される網膜ミクログリア、脈絡膜マクロファージ、および動員された単球は、眼疾患の結果の重要な決定因子です。多くの出版物が、網膜疾患のマウスモデルにおけるこれらの細胞の存在を説明しています。それらの動作の限定された側面のみが明らかにされており、これらは単一の検出方法を使用してのみ明らかにされています。網膜単核食細胞の特性評価を可能にする包括的な分析戦略を説明しています。MacGreenレポーターマウス(単核食細胞システム全体でマクロファージコロニー刺激因子受容体GFP導入遺伝子を発現するマウス)からのミクログリアのレーザー検眼鏡のスキャン、Iba1染色網膜切片およびフラットマウント、CD11bベースの網膜の定量分析の標準化された作業手順を提示しますフローサイトメトリー、および重要なミクログリアマーカーのqRT–PCR分析。(CNV)、明るい白色光曝露、およびFam161a関連の遺伝性網膜変性で治療された網膜からのデータを提示します。このプロトコルは、リン酸化化学物質(IMAP)ベースの蛍光偏光(FP)および時間分解蛍光共鳴エネルギー移動(TR-FRET)ハイスループットスクリーニング(HTS)アッセイの自動化された固定化金属親和性のアッセイ開発、検証、および実装について説明します低分子量キナーゼ阻害剤。ATPの段階的な添加を伴います。キナーゼ反応は、その後のIMAP結合バッファーの添加により停止します。FPおよびTR-FRET方法論のアッセイ属性について説明します。因子と低いアッセイばらつきをもたらすはずです。必要な試薬と機器が用意されていれば、1人の科学者が384ウェルの小型HTSアッセイを6〜8週間で開発できるはずです。特定の自動化されたHTSアッセイ条件によって、スクリーニングセッションで処理されるアッセイプレートの数が決まりますが、2人の科学者は1つの8時間のスクリーニングで100から150のアッセイプレートを処理することを期待します。