チェック法(横溝岳彦)ベクターにライゲーションしたインサートがきちんと入っているかどうかは、もちろんMini-prepして制限酵素で切断すればよい。ベクターの長さよりも長いフラグメントをサブクローニングした場合、青白セレクションを行っても、目的のインサートが入っている確率はかなり低くなる。このため、コロニーから直接PCRにてinsertの長さをチェックし、その間に大腸菌を増幅しておいて、目的のコロニーだけを選択することができる。SKにサブクローニングした5kbまでのinsertを確認できた。plateに10μlづつ分注しておく。tubeに50μlの滅菌水を分注しておき、これに滅菌した爪楊枝でコロニーをつつき、一本づつ差し込んでいく。plateに10μlづつ加えていく。cultureしておく。X分(Xはkbs+3を目安に)35cycles後、AGEでチェック。tubeから、目的に会うscaleにメスアップして翌日まで培養する。siteでサブクローニングしたばあい、以下のような結果になった。kbの場合、3/60の割合で入りました。