ml反応液にa液66μl,b液33μlを混ぜる。(G、HはBIOーRADからKitとして販売されている。倍希釈)titrationの必要あり。そのまま使用できることもある。希釈する場合はTBSBSA(1%)などで行う。NaN30.02%を入れておけば4°C保存で10回以上使用可能。マウスヒツジ抗体、抗ウサギヒツジ抗体など。500-3000倍希釈。TBSBSAやTBS+1/10ブロックエースで希釈。paperL.ブロティング装置3.手順A.ブロティング1)ゲルの大きさに切ったB、K(4枚)を用意し、ゲルとともにCにつけ3分振る。2)図のように下から順番に気泡に注意しながらのせる。3)最後に重い本(生化学辞典、シグマのカタログなどが重宝)を上におく。mA(定電流)30-60分転写(10%ポリアクリルアミドゲルの場合、目的タンパク質の分子量にもよる)5)メンブレンをTBSで洗う。ゲルは確認のために染色する。以後の操作は室温でのshakerによる震盪である。D液,15分2)TBS,5分2回3)一次抗体,1-2時間。