予防・改善のキーとなる臓器として非常に注目されている。BATから分泌される液性因子(ブラウンアディポカイン)については報告が少なく、運動による影響もほとんどわかっていない。本研究では、このブラウンアディポカインにスポットをあて、運動や肥満による影響を検討している。2018年度は以下の検討を行った。12(MMP12)などの液性因子の遺伝子発現が増加し、逆に、レジスチンやアディプシン遺伝子の発現が減少した。TRは肥満によるBATでのMMP12やCCL9の発現増加を有意に減弱させた。褐色脂肪細胞から分泌されるブラウンアディポカインの網羅的解析HB2褐色脂肪細胞から分泌される液性因子について質量分析装置を用いて網羅的解析を行った。CCL9やLgals3bpなどの液性因子が分泌されることがわかった。planned.Reason2018年度の検討から、4ヵ月の高脂肪食を摂取させて肥満させたマウスのBATではCCL9やLgals3bpをはじめとする様々な液性因子の遺伝子発現が変化すること確認された。Lgals3bpならびにアディプシンなどが褐色脂肪細胞から分泌されるブラウンアディポカインの候補として同定された。TRは肥満によるBATのCCL9遺伝子などの発現異常を減弱することを明らかにした。これらの結果は、交付申請書に記載した「研究の目的」の達成に有用な知見であることから研究の達成度はおおむね順調であると思われる。Activity2019年度からは以下の研究を推進していく。同定されたブラウンアディポカインの機能解析2018年度の検討でブラウンアディポカインとして同定された液性因子がどのような機能を持つか検討する。血管内皮細胞など)に添加し、細胞の形態変化や遺伝子ならびにタンパク質発現の変化をそれぞれDNAアレイと質量分析装置を用いて解析する。得られた遺伝子およびタンパク質発現の変化からブラウンアディポカインのターゲット細胞に対する作用を決定する。ブラウンアディポカイン受容体の単離とシグナル伝達経路の同定CCL9やLgals3bpなどのブラウンアディポカインの機能を発揮するシグナル伝達経路を同定する。グルタチオン-S-トランスフェラーゼ(GST)とこれらの融合タンパク質を大腸菌内で合成し、GSTがグルタチオンセファロース4Bに特異的に結合することを利用して、GST-ブラウンアディポカイン融合タンパク質を精製する。精製されたタンパク質をターゲット細胞からのタンパク質抽出液と反応させた後にブラウンアディポカインと結合するタンパク質を抽出し、質量分析装置を用いて同定する。同定されたタンパク質のうち、ブラウンアディポカイン受容体の候補タンパク質とブラウンアディポカインとの結合の有無を免疫沈降法で確認する。GSTを用いた同定が困難な場合は、酵母を用いたツーハイブリッド法に切り替えて同定を試みる。blot法などで確認し、シグナル伝達経路を同定する。