Rev.150401(本製品は研究用試薬です。γ-glutamylcysteinylglycine)はペプチド性のチオールであり、細胞内の主要な抗酸化成分です。フォールディングの促進に関わっていることが知られています。還元型)を測定するキットです。GS-TNBを形成します。反応してTNBを生成します(左下図)。412nm(または405nm)の吸光度変化を計測することで、高感度にグルタチオンを検出できます。239275または相当品。・凍結不可)【サンプルの前処理】サンプル中に含まれる蛋白質や酵素は、グルタチオン測定に影響を与える場合があります。下記の手順にて除蛋白処理をすることをお奨めします。グルタチオンを安定化する効果もあります。acid)水溶液を調製します。1gを蒸留水20mLに溶解します。調製後は2〜8°Cにて保存し、当日中に使用します。遠心管またはエッペンチューブに、サンプル50μLを分注します。MPA水溶液(冷)を100μL添加し、ボルテックスにて5秒間攪拌します。xGにて5分間遠心し、上清を回収します。上清をアッセイバッファーにて20倍以上に希釈して測定します。抗凝固剤にEDTA、ヘパリン、クエン酸を使用できます。凍結しないようにご注意ください。除蛋白処理をしてから測定します。高感度プロトコルを用いて測定します。生理的リン酸緩衝液等を用いて10%(w/v)ホモジネートを調製し、遠心上清を回収します。組織ホモジネート中のグルタチオンは代謝酵素等の影響により失われやすいため、氷冷し、直ちに除蛋白処理をします。補正には、出発材料となる組織の湿重量または組織ホモジネートの蛋白濃度が用いられます。含まれるため、必要に応じてヘパリンを含む生理的リン酸緩衝液等で灌流処理します。可溶化処理を行います。遠心上清を回収します。補正には細胞数または細胞可溶化液中の蛋白濃度が用いられます。実験条件により大きく異なるため、予備実験をして測定レンジに収まることを確認することをお奨めします。使用する試薬を室温に戻し、必要に応じてサンプルの前処理を実施します。サンプルの希釈にはアッセイバッファーを使用します。マイクロプレートに、キャリブレーター/サンプルを50μL/ウェル分注します。全てのウェルにDTNB試薬を50μL添加します。全てのウェルにグルタチオン還元酵素を50μL添加、混合します。室温にて3〜5分インキュベートします。全てのウェルにNADPH試薬を50μL分注します。405nmにおける吸光度を15〜20秒間隔で3分間測定します。算出し、左下図のように検量線を作成します。サンプル中のグルタチオン濃度を算出します。希釈してから測定してください。高感度プロトコルにて検出できる場合があります。操作方法等は予告なく改訂される場合があります。ご使用前に商品同梱の使用説明書を必ずご確認ください。NADP溶解液を全量添加して溶解します。冷蔵にて1週間、-20°Cにて6週間使用可能です。NADPHの溶解に使用します。