Achievements我々は進行大腸癌150例のaCGH解析の結果『ゲノムコピー数変異が有意に相関する染色体は異なるがペアとなる領域(遺伝子)』を発見した。癌遺伝子MYCの局在する染色体8q24は20q11と極めてよく相関しており、20q11局在の遺伝子TPX2抑制はMYCドリヴン癌において高い抗腫瘍効果を示した。vitroアッセイを実施し成果をえた。pathway活性度、TPX2発現の相関を解析した。pathwayの活性度と一致しなかったが、TPX2高発現症例においては、MYC発現量とMYC活性度に強い相関がみられた。これらの結果より大腸癌においては、MYC活性はTPX2発現に依存していると考えられた。アッセイ:大腸癌株化細胞にMYC強制発現をしたところ、TPX2も合わせて強発現をしたことから、MYCとTPX2は正常細胞にはない相互作用により癌の進展に関与していると考えられた。A特異的阻害剤(MLN8237)を投与することにより増殖能抑制とアポトーシス誘導が起こることを確認した。大腸癌臨床検体でTPX2発現のみが予後と相関することを明らかにした。planned.Reason研究期間内に何をどこまで明らかにしようとするのか?に準じて記載をする。4)より、シングルセル群およびスフェロイド細胞塊を作成。癌幹細胞マーカー(Lgr5/CD133)発現蛍光強度のレベルに応じて5段階、スフェロイド細胞塊のサイズで5段階に分けて、全段階と以下との関係を統合的に明らかにする。arrayで検証を行っているところである。パイプラインの構築中。Seqにて、上記ペア遺伝子関連シグナル上に共起する変異遺伝子あるいは発現遺伝子プロファイル。同定したペア遺伝子について、それぞれKD細胞株を作成。有無を明らかにして大腸発癌における役割を示す。vitroの実験から行い、成功をおさめている。Seqの結果より樹系図を描き“大腸発癌過程”をシミュレートする。進捗;大腸癌原発巣の発癌から癌進展過程にいたるまでに多様性を発揮しながら進化するモデルについてシミュレーションを実施した。その結果、進化には中立変異が重要で強力なドライバー遺伝子は必要ない。幹細胞性は階層をかたちづくる上でその存在が重要である。環境要因が外圧として多様性を形成していく上で必要であることを示した。arrayで検証を進める。両者で再現性がとれた染色体領域については、さらに多くの症例でのゲノムPCRで確認する。責任遺伝子あるいは転写産物について同定する。■スフェロイド細胞塊:高度異型腺腫組織を細胞塊として培養。壊死部分を除去しミンス。酵素で分解した後メッシュで濾過。この時点で40μm~500μmの細胞塊となる。これを癌細胞初代スフェロイド調整キット(AGC旭硝子(株)製)で培養する。その結果、形成細胞塊のサイズで5段階に分ける。高度異型腺腫について、臨床診断のための部位を除き、すべての組織を採取する。■シングルセル細胞群:切除組織を可能な限り細かく切離。(組織分散キット)を用いて組織分散を行い単細胞懸濁液を得る。Lab)を用いて、Lgr5+/CD133+抗体を用いて、それぞれ100個の細胞群を分離同定し、癌幹細胞マーカー発現蛍光強度のレベルに応じて5群を選定する。上記実験を実施の予定。シングルセルの培養等が、世界的にもまだ難しく、確立されていない状況である。本助成でいただく助成額ではこれを成し遂げることの実現性が乏しく、軌道修正を勘案中である。