イメージングサイトメーターの担当として皆さまの研究を日々サポートさせていただいております、GEヘルスケア・ジャパンの高田と申します。Eliteは、デコンボリューションに最適化された顕微鏡で、レーザーを使わず優しい照明系で高解像度かつ明るいライブ画像が撮れます。FRETイメージングも行えます。標準でFRETの解析ソフトウェアもついています。システムの仕様を読み上げれば、FRET解析に最適であること間違いなしですが、実は・・・自分たちの手で実際のサンプルをつかって試した経験がありませんでした。Eliteで試したことはなかったのです。AnalyzerによるFRET解析事例アッセイの詳細に関しましては、こちらのPDFをご覧ください。EliteによるCFP-YFPのFRETイメージングを実施しました。導入されたHeLa細胞。活性型Caspase-3用FRETプローブであるSCAT3.1は、蛍光ドナー(ECFP)と蛍光アクセプター(Venus)とをCaspase-3の基質となるプロテアーゼ認識配列を含むリンカーでつないだアポトーシスセンサーです。nmの蛍光が検出されます。nm付近の蛍光が観察されます。nmの蛍光強度の比より算出することができるのです。アポトーシス誘導におけるライブイメージングには、いくつか課題があります。アポトーシス誘導後、ある程度の予測はできても、Caspase-3が活性化し、アポトーシスが起こる正確なタイミングがわからない。細胞個々の個性で、タイミングはばらばら。薬剤の濃度によってはアポトーシスが起こらないものもいる。Caspase-3の活性からアポトーシスが生じるまでは数分で、あまり時間間隔をあけて撮影はできない。そこで、24箇所の細胞にフォーカスし、アポトーシス誘導から3時間後、2分間隔で180分間のタイムラプス撮影を行いました。nm以内の視野再現性があります。nmと言われています。nm以内に視野が戻ってくれば、光学顕微鏡で見る限りズレはないと言うことになります。nm以上のフォーカスずれは許しません。して得られた、24箇所の撮影画像のうち、代表的な細胞が以下からご覧いただけます。青:ECFP、緑:Venusアポトーシス誘導に伴う活性型Caspase-3によりリンカーペプチドが切断されると、ECFPとVenusが切り離されFRETが解消されます。FRETプローブによるアポトーシス誘導評価アッセイの詳細に関しましては、こちらのPDFをご覧ください。詳しくはこちらから不定期ではございますが、役に立つ情報をお伝えさせていただきます。今後ともよろしくおねがいいたします!話は変わりますが、実は最近、弊社公式アカウントとしてFacebook、Twitter、Instagramを始めました。timeに見ていただけるような投稿をひっそりとつぶやいております。