Achievements胎児性白血病細胞と造血微小環境との関係について、以下の2通りの研究を開始した。(TL)に関して:TLの白血病細胞と造血微小環境との関係を病理学的に検討するためには、組織切片におけるTL細胞を正確に同定する必要があるが、TL芽球は分化能を有するため、組織中の成熟した細胞がTL由来の腫瘍細胞か否かを決定することが難しい。TLは新生児の疾患であり、新生児期の組織中に生理的に存在する髄外造血細胞との形態学的な鑑別が困難である。PCR法)が最も確実な解決策である。PCR法の確立を試みた。第一段階として、既知のGATA1遺伝子変異を有する症例の凍結保存TL細胞と対照細胞を用い、プライマーの作製に工夫を加えることで、変異特異的PCR法が可能であることを確認した。PCR法を試行中である。内因性peroxidase活性の問題は回避できたが、非特異的な陽性反応への対処法を現在検討中である。解析に適した症例の検索を学会に依頼し、その結果をすでに得ている。これらの症例の剖検標本を解析する予定である。PCR法は、多くの用途に利用できる優れた解析方法であるが、その実験技術の確立や結果の評価方法は必ずしも容易なものではなく、多くの条件設定や対照実験を必要とする時間を要する方法である。現在、この方法を用いた研究を行っている研究室は世界的にも少ないため、この解析方法を用いている技術者から直接指導をいただくことは困難であり、文献の記載に頼りながら独自に技術を確立しなくてはならない。解析技術に関する種々の問題の解決に多くの時間を要した。このため、2に関する研究は、時間的制約の問題が主たる理由にて、研究材料の収集の段階にとどまっている。PCR法を平成28年度中には確立する予定である。この方法が利用可能となれば、胎児TL剖検症例を用いて、胎児期の造血臓器におけるTL細胞の存在を組織学的に確実に証明し、胎児臓器とTL細胞の増殖・分化の関連を明らかにする予定である。PCR法が技術的に十分な確立ができない場合には、その代替方法としてGATA1蛋白のN端およびC端に対する特異抗体を用いて、胎児組織中に浸潤するTL細胞が上記GATA1抗体のいずれに反応するかを解析する。TL細胞はGATA1タンパクのN端側に存在する活性化領域を欠損するため、C端側に対する抗体のみに反応するのに対し、正常細胞は両者に反応するため、この方法でもある程度の結果を出すことは可能と考えられる。共培養実験を行い、この白血病細胞が胎児期の造血臓器である肝臓と骨髄のいずれに増殖・分化を依存するかを検討する予定である。剖検症例の病理標本を用いて、この白血病細胞と造血臓器との関連を解析する。造血微小環境との関わりの異同を明らかにする予定である。PCR法の確立に時間を要したために、この技術を用いた疾患症例材料による解析実験が十分に進んでいないことから、解析に使用予定としていた試薬購入のための未使用額を次年度に使用することとした。PCR法を用いた症例材料の解析に使用する。この方法にて十分な結果が得られない場合は、その代替方法として、組織切片上でGATA1遺伝子変異を有するTL細胞を検出するため、GATA1蛋白に対する特異抗体を購入して、免疫組織化学を主体とした病理学的解析を進める(「今後の研究の推進方策」の項参照)。概要の2に記載した研究にも翌年度の助成金を使用する予定である。共培養実験を行い、また剖検臓器における白血病細胞と造血臓器との関連を病理学的に解析する。