μgを追加し、その内容を再懸濁液を介して混合します。μLを追加し、再び再び再び混合します。チューブ2の混合物をチューブ1滴回りに移し、穏やかに混合する。サスペンションが30分間室温で座るようにします。3セル培養のそれぞれに1mLの懸濁液を滴下し、100mmプレートを加えながら、メディアを穏やかに旋回させる。プレートをインキュベーターに戻し、トランスフェクション混合物を6時間放置し、トランスフェクション混合物を10mLの新鮮な培養培養培養物で置き換え、細胞を42時間インキュベートする。細胞媒体48hポストトランスフェクションを廃棄する。各100mmプレートを氷のベッドの上に置きます。mLチューブにラベルを付け、チューブを氷の上に置きます。PBSで細胞を静かにすすいで下す。NaCl、および1%X-100洗剤[材料の表を参照])を追加し、プロテアーゼ阻害剤カクテルで処理し、各100mmプレートに。セルスクレーパーを使用して、セル層を破壊します。プレートを傾け、そっとこすり、プールに細胞を集めます。mLチューブ内の3つの100mmプレートのそれぞれから細胞のライサットを混合します。gで細胞を渦動かします。mLチューブに移します。ブラッドフォード法を用いてウイルスタンパク質リサート濃度を得る(セクション4参照)。μg)のアリコートを保存します。6.8]、5%SDS、および10%2-メルカプトエタノール)を最終容積に加えます。95°Cで10分間沸騰させ、-20°Cで入力サンプルを保存します。BSAストックから10xウシ血清アルブミン(BSA)を調調します。μLの水と5μLのタンパク質サンプルを混合して、タンパク質サンプルの混合物を調質します。μLのタンパク質アッセイ染料試料(材料表を参照)を追加します。サンプルを均一な混合物のために短時間渦を起し、室温(18~20°C)で5分間インキュベートします。ブランク、スタンダード、タンパク質のサンプルをキュベットに転送します。nmのODでタンパク質濃度を測定します。μL(材料表参照)を500μLのリシスバッファーで、プロテアーゼ阻害剤カクテルで処理した。すべての変異サンプルおよびコントロールに対してより多くの親和性ゲルビーズをすすいでください。1つは西洋免疫ブロット分析用、もう1つはタンパク質染色および質量分析用です。gで2分間4°Cでスピンします。