Achievements染色体不安定性はがん細胞に広く見られる染色体分配異常であり、がんの悪性形質獲得や抗がん剤耐性獲得の要因であると考えられている。本研究では、細胞質分裂の完了に関与するOGG1の分子機序を明らかにする基礎研究を行い、さらにがん患者由来の臨床検体を用いてOGG1発現プロファイルと染色体不安定性の関連性を検証することで、OGG1の関与する細胞質分裂不全の分子病態と染色体不安定性の全体像を明らかにし,染色体不安定性を標的としたがん治療の可能性にアプローチするための学術的基盤を確立することを研究目的とした。前年度までにライブイメージングによる観察から,OGG1ノックダウンにより細胞質分裂の二細胞への切断遅延が起こることを発見している。ここで見出された現象の詳細な観察を可能とするために,染色体と細胞質分裂期ブリッジの構成成分であるチューブリンの可視化細胞を樹立した。細胞質分裂期におけるOGG1の局在性を明らかにするために,OGG1特異的抗体を用いた蛍光免疫染色やOGG1-FLAGタンパク質を発現させた細胞をFLAG抗体で蛍光免疫染色を行い,ミッドボディーと呼ばれる細胞質分裂期ブリッジの切断部位に形成される構造体部位にOGG1が局在することが観察された。遺伝子ノックアウト細胞の樹立を試み,HeLa細胞を用いてOGG1ノックアウト細胞を樹立した。以上より、細胞質分裂期においてOGG1がミッドボディ因子の一員として細胞質分裂期ブリッジの切断への関与を強く示唆する結果を得ており,この発見の確証を得るためのさらなる検証を行っている。関与する細胞質分裂不全の分子病態と染色体不安定性の全体像を明らかにすることを予定した。遺伝子ノックアウト細胞の樹立を試みた。平成29年度HeLa細胞を用いてOGG1ノックアウト細胞の樹立を試みたが,当研究室で実績のある方法ではノックアウト細胞は樹立できなかった。ここでOGG1遺伝子ノックアウトの方法を工夫することで最終的にはHeLa細胞を用いたOGG1ノックアウト細胞が樹立できたものの,当初計画していたよりも期間を有したと考えている。分子機序を明らかにする基礎研究を進めていく。細胞質分裂の完了に関与するOGG1の分子機序を明らかにする基礎研究に関しては,時期特異的なタンパク質分解誘導系であるオーキシンデグロン法を用いてOGG1を分裂期特異的に分解することでOGG1が細胞質分裂における機能を有するかの検証を予定しており,すでに細胞の樹立を試みている。細胞質分裂期ブリッジの切断部位に形成されるミッドボディにOGG1が局在することを示唆する結果を得ている。結合因子群を同定していく。同定された結合因子との免疫共沈降や共局在性の観察を行い、生理的な結合因子としての検証を行う。よって制御されるかをOGG1ノックアウト細胞を用いて明らかにする。