シナプス形成及び神経変性疾患等の疾患との関連性については報告がなく、その具体的な機能については、これまで不明であった。[0020]本発明のシナプス形成増強剤を構成するmiR-132遺伝子は、野生型miR-132をコードする野生型miR-132遺伝子、又は野生型miR-132と同等以上の活性を有する変異型miR-132をコードする変異型miR-132遺伝子を包含する。[0021]野生型miR-132遺伝子には、例えば、配列番号1で示す塩基配列からなるヒト野生型miR-132遺伝子が挙げられる。ヒト野生型miR-132遺伝子と同様の活性を有する他生物種由来の野生型miR-132オルソログ遺伝子も含まれる。具体的には、ヒト以外の哺乳動物由来の野生型miR-132オルソログ遺伝子、及び鳥類、爬虫類、又は両生類由来の野生型miR-132オルソログ遺伝子が該当する。miR-132遺伝子は、生物種間で極めて高度に保存されており、マウス、チャイニーズハムスター、及びピグミーチンパンジー等の多くの哺乳動物の野生型miR-132オルソログ遺伝子は、ヒト野生型miR-132遺伝子と100%の塩基同一性を有することが知られている。carolinensis)の野生型miR-132オルソログ遺伝子のように、ヒト野生型miR-132遺伝子とは95%以上の高い塩基同一性を有している。[0022]変異型miR-132遺伝子には、例えば、配列番号1で示す塩基配列からなるヒト野生型miR-132遺伝子の変異型遺伝子が挙げられる。配列番号1で示す塩基配列において1若しくは複数個の塩基が欠失、置換又は付加された塩基配列からなるポリヌクレオチドや、配列番号1で示す塩基配列に対して95%以上、97%以上、98%以上、又は99%以上の塩基同一性を有する塩基配列からなるポリヌクレオチド、そして配列番号1で示す塩基配列からなるmiR-132遺伝子の部分塩基配列に相補的な塩基配列からなる核酸断片と高ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列からなるポリヌクレオチドを包含する。本明細書において「塩基同一性」とは、二つのポリヌクレオチドの塩基配列を整列(アラインメント)し、必要に応じて、いずれかの塩基配列にギャップを導入して、両者の塩基一致度が最も高くなるようにしたときの、一方のポリヌクレオチドの全塩基数に対する他方のポリヌクレオチドの同一塩基の割合(%)をいう。1990)検索等の公知のプログラムを用いて容易に決定できる。本明細書において「複数個の塩基」とは、2~60個、2~45個、2~30個、2~14個、2~10個、例えば、2~8個、2~6個、2~5個、2~4個又は2~3個の塩基をいう。本明細書において「高ストリンジェントな条件」とは、非特異的なハイブリッドが形成されない、高温かつ低塩濃度の条件をいう。ハイブリダイゼーション後の洗浄において、60°C~68°Cで1×SSC以下、好ましくは65°C~70°Cで0.1×SSC以下の条件をいう。[0023](2)miR-132「miR-132」は、前記miR-132遺伝子の転写産物であり、原則としてRNAで構成される。具体的には、配列番号3で示す塩基配列からなるヒト野生型miR-132が挙げられる。その他、配列番号4で示す塩基配列からなるグリーンアノールの野生型miR-132のような他種miR-132オルソログ遺伝子の転写産物や変異型miR-132遺伝子の転写産物が挙げられる。[0024]miR-132は、miRNAの1種である。miRNAは、細胞内に存在する長さ21~23塩基長の一本鎖ノンコーディングRNAで、標的遺伝子の翻訳を阻害することにより、標的遺伝子の発現を調節することが知られている。116:281-297)。本明細書におけるmiRNAは、miRNA前駆体及び成熟miRNAのいずれも包含する。転写産物であるmiR-132は、標的遺伝子に対する実質的な活性を有している。[0025]miR-132の標的遺伝子は、未だ明らかではない。本明細書において、miR-132は、神経変性疾患の病原性遺伝子又はその産物を直接の標的とすることなく、シナプスの形成を増強し、より強固な神経回路網を構築することで、前記産物の毒性に対する耐性を強化することが明らかとなった。「miR-212遺伝子」は、miR-212をコードする遺伝子で、DNAで構成される。4742-4753)。46-52)や、両遺伝子間の塩基配列における塩基同一性も高いことから(ヒトmiR-132遺伝子とmiR-212遺伝子で82%)、両遺伝子は、遺伝子重複によって生じた同一機能を有するパラログと考えられている。[0027]本発明のシナプス形成増強剤を構成するmiR-212遺伝子は、野生型miR-212をコードする野生型miR-212遺伝子、又は野生型miR-212と同等以上の活性を有する変異型miR-212をコードする変異型miR-212遺伝子を包含する。[0028]野生型miR-212遺伝子には、例えば、配列番号5で示す塩基配列からなるヒト野生型miR-212遺伝子が挙げられる。前記ヒト野生型miR-212遺伝子と同様の活性を有する他生物種由来のmiR-212オルソログ遺伝子も挙げられる。miR-212遺伝子の塩基配列もmiR-132遺伝子と同様に生物種間で高度に保存されている。マウス、ラット、オッポサム、ウマ等の哺乳動物の野生型miR-212オルソログ遺伝子は、ヒト野生型miR-212遺伝子と100%の塩基同一性を有する。[0029]変異型miR-212遺伝子には、例えば、配列番号5で示す塩基配列からなるヒト野生型miR-212遺伝子の変異型遺伝子が挙げられる。配列番号5で示す塩基配列において1若しくは複数個の塩基が欠失、置換又は付加された塩基配列からなるポリヌクレオチド、配列番号5で示す塩基配列に対して95%以上、97%以上、98%以上、又は99%以上の塩基同一性を有する塩基配列からなるポリヌクレオチド、配列番号5で示す塩基配列からなるmiR-212遺伝子の部分塩基配列に相補的な塩基配列からなる核酸断片と高ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列からなるポリヌクレオチドを包含する。[0030](4)miR-212「miR-212」は、前記miR-212遺伝子の転写産物であり、原則としてRNAで構成される。具体的には、配列番号6で示す塩基配列からなるヒト野生型miR-212が挙げられる。その他、他種miR-212オルソログ遺伝子や変異型miR-212遺伝子の転写産物が挙げられる。miR-212も前記miR-132と同様に、miRNAの1種である。本発明のシナプス形成増強剤において、前記miRNA遺伝子、すなわちmiR-132遺伝子及び/又はmiR-212遺伝子は、発現ベクターに発現可能な状態で包含されていてもよい。[0032]「発現ベクター」とは、一般に、内部に含まれる目的の遺伝子を発現制御できるベクターをいう。「発現可能な状態」とは、所定条件下で目的の遺伝子が宿主細胞内で転写され得る状態をいう。プロモーターとターミネーターの制御下に目的の遺伝子を配置した状態が該当する。本明細書において、発現ベクターが包含する目的の遺伝子は、前記miR-132遺伝子及び/又はmiR-212遺伝子である。[0033]発現ベクターは、遺伝子発現制御に必要な制御エレメントを必要に応じて含むことができる。制御エレメントには、前述の必須エレメントであるプロモーターとターミネーターの他、エンハンサやポリA付加シグナルが挙げられる。[0034]プロモーターは、宿主細胞内で作動可能でなければならない。通常は、宿主生物種又はその近縁種由来のプロモーターが好ましい。宿主がヒトであれば、プロモーターは、ヒト由来であることが好ましい。プロモーター、又は誘導性プロモーター等が知られている。本発明のシナプス形成増強剤における発現ベクターには、いずれのプロモーターも使用することができる。部位特異的プロモーターであれば、シナプスを形成する細胞、例えば、神経細胞特異的プロモーターが好ましい。発生段階特異的プロモーターであれば、適用する宿主の発生段階に応じたプロモーターを使用する。[0035]ターミネーターは、前記プロモーターにより転写された遺伝子の転写を終結できる配列であれば特に限定はしない。好ましくはプロモーターと同一生物種由来のターミネーターであり、より好ましくはプロモーターが由来する生物種のゲノム上で、そのプロモーターと組となっているターミネーターである。[0036]発現ベクターは、必要に応じて、宿主細胞内に送達されたことを確認するための選抜又は標識マーカー遺伝子を含むこともできる。標識若しくは選抜マーカー遺伝子には、例えば、蛍光又は発光レポーター遺伝子(例えば、ルシフェラーゼ、β-ガラクトシダーゼ、GUS、又はGFP)、又は酵素遺伝子が挙げられる。[0037]発現用ベクターの種類は、本発明のシナプス形成増強剤を適用する宿主細胞内で複製及び発現が可能なプラスミド又はウイルスであれば、特に限定はしない。適用する宿主がヒトの場合には、アデノ随伴ウイルス(AAV)、アデノウイルス、レトロウイルス(レンチウイルスを含む)、センダイウイルス等のウイルスを使用することができる。この他、各ライフサイエンスメーカーから市販されている各種宿主用発現ベクターを利用することもできる。[0038]発現カセットは、1つの発現ベクター内にmiRNA遺伝子を発現可能な状態で2つ以上含むこともできる。本発明のシナプス形成増強剤は、神経細胞に対して副作用がなく、破壊や解離によって消失したシナプスを再形成させることができる。したがって、シナプスの破壊や損傷を原因とする疾患において、脳神経の機能回復剤として機能し得る。前記第1態様のシナプス形成増強剤を有効成分とし、生体に投与することで神経変性疾患を予防又は治療することができる。神経変性疾患の予防及び治療用として適用される医薬組成物である。[0042]本明細書において「予防」とは、疾患(本明細書では神経変性疾患)の発症を未然に防ぐことをいう。本明細書において「治療」とは、発症した疾患における症状の進行を緩和し、抑制し、又は阻止すること、及び症状を改善することをいう。[0043]本明細書において「神経変性疾患」とは、中枢神経系の特定の神経細胞(ニューロン)内又はグリア細胞内に異常なタンパク質性の封入体が形成される結果、神経細胞が徐々に侵され、減退及び消失していく、進行性神経疾患をいう。sclerosis)が挙げられる。前記シナプス形成増強剤を二以上含むことができる。投与量、並びに後述する担体の種類によって異なる。したがって、それぞれの条件を勘案して適宜定めればよい。有効量のシナプス形成増強剤が包含されるように調整する。「有効量」とは、シナプス形成増強剤が有効成分としての機能を発揮する上で必要な量であって、かつそれを適用する生体に対して有害な副作用をほとんど又は全く付与しない量をいう。投与回数等の様々な条件によって変化し得る。最終的には医師、獣医師又は薬剤師等の判断によって決定される。適用対象となる生体をいう。(マウス、ラット、ウサギ、モルモット、サル等)等が該当する。好ましくはヒトである。適用する生体の様々な個体情報である。必要に応じて薬学的に許容可能な担体を含むことができる。「薬学的に許容可能な担体」とは、製剤技術分野において通常使用する添加剤をいう。ヒト血清アルブミン等が挙げられる。[0049]溶媒には、例えば、水若しくはそれ以外の薬学的に許容し得る水溶液、又は薬学的に許容される有機溶剤のいずれであってもよい。水溶液としては、例えば、生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助剤を含む等張液、リン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液が挙げられる。補助剤としては、例えば、D-ソルビトール、D-マンノース、D-マンニトール、塩化ナトリウム、その他にも低濃度の非イオン性界面活性剤、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類等が挙げられる。[0050]賦形剤には、例えば、単糖、二糖類、シクロデキストリン及び多糖類のような糖、金属塩、クエン酸、酒石酸、グリシン、ポリエチレングリコール、プルロニック、カオリン、ケイ酸、又はそれらの組み合わせが挙げられる。[0051]結合剤には、例えば、植物デンプンを用いたデンプン糊、ペクチン、キサンタンガム、単シロップ、グルコース液、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、セラック、パラフィン、ポリビニルピロリドン又はそれらの組み合わせが挙げられる。[0052]崩壊剤としては、例えば、前記デンプンや、乳糖、カルボキシメチルデンプン、架橋ポリビニルピロリドン、アガー、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、アルギン酸若しくはアルギン酸ナトリウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド又はそれらの塩が挙げられる。[0053]充填剤としては、ワセリン、前記糖及び/又はリン酸カルシウムが例として挙げられる。[0054]乳化剤としては、ソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステルが例として挙げられる。[0055]流動添加調節剤及び滑沢剤としては、ケイ酸塩、タルク、ステアリン酸塩又はポリエチレングリコールが例として挙げられる。[0057]上記担体は、有効成分であるシナプス形成増強剤の生体内での酵素等による分解を回避又は抑制する他、製剤化や投与方法を容易にし、剤形及び薬効を維持するために用いられるものであり、必要に応じて適宜使用すればよい。剤形は、有効成分である第1態様に記載のシナプス形成増強剤を分解等により不活化させずに標的部位にまで送達し、生体内でその有効成分の薬理効果を発揮し得る形態であれば特に限定しない。適用対象となる疾患は、後述する神経変性疾患である。神経変性疾患の原因となる部位は、神経細胞が存在する部位、すなわち主として中枢神経、特に脳である。中枢神経、特に脳を標的部位として、その標的部位、より具体的には神経細胞にまで有効成分のシナプス形成増強剤を送達できればいかなる剤形であってもよい。[0060]具体的な剤形は、投与方法及び/又は処方条件によって異なる。投与方法は、非経口投与と経口投与に大別することができるので、それぞれの投与法に適した剤形にすればよい。[0061]投与方法が非経口投与であれば、好ましい剤形は、対象部位への直接投与又は循環系を介した全身投与が可能な液剤である。液剤の例としては、注射剤が挙げられる。pH調節剤等と適宜組み合わせて、一般に認められた製薬実施に要求される単位用量形態で混和することによって製剤化することができる。(内用水剤、乳剤、シロップ剤を含む)が挙げられる。[0063]なお、上記各剤形の具体的な形状、大きさについては、いずれもそれぞれの剤形において当該分野で公知の剤形の範囲内にあればよく、特に限定はしない。製造方法については、当該技術分野の常法に従って製剤化すればよい。Pa.)に記載された方法を参照することができる。投与方法は、前述のように非経口投与と経口投与に大別することができる。経口投与法は、一般に全身投与であるが、非経口投与法は、さらに局所投与と全身投与に細分できる。具体的には、例えば、脳内注射による局所投与、又は血管内注射のような循環器内投与による全身投与が挙げられる。投与方法は、疾患の発症箇所又は進行度等に応じて適宜選択することができ、局所的投与又は全身投与のいずれであってもよい。有効成分であるシナプス形成増強剤は、神経細胞に対して作用する。後述する実施例で示すように、シナプス形成増強剤は、正常神経細胞に投与しても副作用を生じない。したがって、副作用による影響がないか又は極めて小さいことから疾患の発症箇所である脳に局所投与することができる。局所投与は、注射による投与が好ましい。全身投与には、例えば、血管内注射又は経口投与が採用できる。血管内注射は、血流を介してシナプス形成増強剤を全身に行き渡らせることが可能な点で便利である。この場合、ポリペプチドを構成成分とするシナプス形成増強剤が血液中で分解されず、かつ脳関門を通過して、標的細胞である脳神経細胞にまで送達される形態にすることが好ましい。神経細胞を標的とする1型、2型又は5型のアデノ随伴ウイルス(AAV)ベクターにmiR-132遺伝子又はmiR-212遺伝子を包含したシナプス形成増強剤であれば、AAV粒子により核酸分解を免れ、脳神経細胞にまで送達させることができる。適用対象となる疾患は、前述の神経変性疾患である。神経変性疾患を原因とする認知症も対象疾患となり得る。発達した精神機能が低下し、日常生活や社会生活を営めない状態となる症状をいう。脳血管性の認知症は、本明細書では対象としない。治療効果も期待できる。あれば、血縁者に患者が存在する(した)者は、発症の有無を問わず、適用対象者となり得る。有効成分であるシナプス形成増強剤は、生体に対して副作用をほとんど及ぼさない。前記疾患に罹患していない健常者も適用対象者とすることができる。神経変性疾患による運動機能障害や認知症の発症を予防し、またそれらの症状を緩和又は改善することができる。神経変性疾患の原因となる病原性遺伝子やその産物を直接の標的とせず、シナプス形成の増強によって強固な神経回路網を構築することで病原性遺伝子産物の毒性に対する耐性を強化する。病原性遺伝子やその産物を処理することなく神経変性疾患を治療できることから、特定の神経変性疾患のみならず、シナプスの破壊や消失を伴う神経変性疾患に広く適用することができる。実施例[0071]以下、本発明について、具体例を挙げて説明する。以下の実施例は、本発明の例示に過ぎず、本発明の各条件は、実施例に記載の条件等には限定はされない。Yorkに記載の方法に従った。[0072]<実施例1:ハンチントン病モデルマウスの脳におけるmiR-132及びmiR-212の発現プロファイル>(目的)本発明のシナプス形成増強剤を構成するmiR-132及びmiR-212に関して、正常マウスと神経変性疾患モデルマウスの脳の各領域における発現プロファイルを比較検証する。493-506)を使用した。Laboratoryから入手し、Mangiariniら(1996;前述)に記載の方法で維持した。野生型ICR系統マウスは、日本クレア社から購入した。snoRNAの発現レベルを調べた。Scientific社)を用いて、添付の説明書に従って調製した。Scientific社)によりRT-リアルタイムPCRを行った。snoRNA(001973)。snoRNAの発現レベルを対照としたデルタCt法によって行った。野生型マウスの生後2日目のmiRNA発現レベルを1として標準化した。[0076](結果)図1に結果を示す。本実施例においても、その結果が再確認された。R6/2マウスにおけるmiR-132及びmiR-212の発現は、生後直後に一旦劇的に増加したが、プラトーに達した後は、正常マウスのように、そのまま維持されることなく有意に減少した。陰性対照のmiR-16の発現は、野生型マウスとR6/2マウスとの間で有意な差異は認められなかった。[0077]この結果は、ハンチントン病の病因がハンチンチンタンパク質の異常だけでなく、脳内のmiR-132及びmiR-212量の不足も関係していることを示唆している。[0078]<実施例2:ハンチントン病モデルマウスの脳におけるmiR-132の補償実験>(目的)R6/2マウスにおいて、減少したmiR-132及び/又はmiR-212を補償することにより、ハンチントン病の症状が改善するか否かを検証する。前述の各脳症域では、miR-132の発現量がmiR-212の発現量よりも顕著に多い(データ示さず)。そこで、本実施例では、miR-132を補償実験用に選択し、miR-132発現ベクターを構築した。[0080](合成二本鎖オリゴDNAの構築)配列番号7及び8に示す塩基配列を有するオリゴDNAをSigma-Aldrich社で委託合成した。各1本鎖オリゴDNAを常法でアニーリングして、miR-132をコードする遺伝子を含む合成二本鎖オリゴDNAを調製した。6.2-GW/EmGFP-miR発現ベクター内に添付の説明書に従って挿入し、得られた発現プラスミドを「pMiR-132」とした。pMiR-132は、GFPレポーター遺伝子の3’UTR内にmiR-132遺伝子を含む。plasmidを陰性対照用とし、これを「pMiR-Neg」とした。BIO社)を用いてPCRで増幅した。kit(BEX)を用いて、添付の説明書に従って精製した。BIO社)を用いて、添付の説明書に従ってEcoRIとBamHIで処理したpW-CAG-eGFP-WPREに連結した。1013-1021)に従って、組換え9型アデノ随伴ウイルス(rAAV-9)中にパッキングした。得られたmiR-132発現AAV9を「AAV9_miR-132」とし、またmiR-Neg発現AAV9を「AAV9_miR-Neg」とした。surface)に導入した。[0084]その後、実施例1と同様の方法で、線条体におけるmiR-132の発現を調べた。[0085](結果)図2に結果を示す。AAV9_miR-132を導入したR6/2マウス(HD)では、AAV9_miR-Negを導入したR6/2マウスと比較してmiR-132の発現量が統計学的に有意に増加し、AAV9_miR-Negを導入した野生型マウス(WT)と同程度以上に補償されることが示された。AAV9_miR-132を導入した野生型マウスでは、miR-132の発現量が過剰状態となったが、個体において異常は認められず(データ示さず)、miR-132の過剰発現による神経細胞への副作用は、ほとんどないことが示された。[0086]<実施例3:運動機能テストの検証>(目的)miR-132の補充によるR6/2マウスの運動機能の改善について検証する。[0087](方法)野生型マウスとR6/2マウスへのAAV9_miR-132又はAAV9_miR-Negの導入方法は、実施例2の記載に準じた。[0088](ロータロッドテスト)ロータロッドテストは、マウスの協調運動と平衡感覚を測定するためのテストである。Basile社)を用いて実施した。300秒間で4rpm~40rpmにロッドの回転が加速するように、前記装置をプログラムして、マウスを装置の回転棒に乗せてから、ロッドから落ちるまで、又はロッドと共に回転するまでの時間を記録した。14:00から19:00の間に、1日3回トライアルを行った。[0089](オープンフィールドテスト)オープンフィールドテストは、マウスの情動性を測定するためのテストである。本実施例では、このテストを用いて、マウスの自発運動を調べた。Kikai社)にマウスを1匹入れて、ボックス内のマウスの自発行動を15分間測定した。Kikai社)が備えられており、このセンサーでマウスの行動をモニターした。テストは、14:00から19:00の間に行った。Kikai社)で解析した。[0090](結果)図3にロータロッドテストの結果を、また図4にオープンフィールドテストの結果を示す。図3及び図4に示すように、AAV9_miR-132を導入したR6/2マウスでは、協調運動及び自発運動が有意に改善した。これらの結果は、miR-132の補足により、ハンチントン病患者の運動機能を改善できること示唆している。[0091]<実施例4:生存テストの検証>(目的)劇症型ハンチントン病モデルマウスであるR6/2マウスは、運動機能の著しい減退により短命で、通常120日程度しか生存できない。そこで、miR-132の補足によりR6/2マウスの寿命が延長するか否かを検証する。[0092](方法)R6/2マウスと野生型マウスへのAAV9_miR-132又はAAV9_miR-Negの導入方法は、実施例2の記載に準じた。3週齢のR6/2マウス14匹にAV9_miR-132を、及び13匹にAAV9_miR-Negをそれぞれ導入し、また対照として野生型マウス14匹にAV9_miR-132を、及び16匹にAAV9_miR-Negを導入した。AAV9_miR-132又はAAV9_miR-Negを投与したR6/2マウスが全て死亡するまで、約生後150日間給餌を行い、その間の各群における生存率をほぼ毎日算出した。生存テストには、Kaplan-Meier生存分析法を用いた。[0093](結果)図5に結果を示す。R6/2マウスにAV9_miR-132を導入した場合、対照のAAV9_miR-Negと比較して、有意な寿命の延長が見られた。この結果は、miR-132の補足により、一般に寿命が短いとされるハンチントン病患者を延命できること示唆している。[0094]<実施例5:シナプス関連タンパク質の検証>(目的)本発明のmiR-132の補足により、R6/2マウスの運動機能及び寿命が改善したことから、シナプス形成関連タンパク質のR6/2マウスにおける回復効果を検証する。トリプシン-EDTA溶液で、37°Cにて20分間処理した。数回のピペッティングによって細胞を解離した後、70μmのナイロンフィルター(DB)に通した。2下にて37°Cで培養した。2の細胞密度で播種し、副培養を行った。Scientific社)を入れた。2下にて37°Cで培養し、植え継いだ。Scientific社)を用いて、使用説明書に従って実施した。2下にて37°Cで2時間培養した。mixturesを細胞に加え、トランスフェクションして4時間後に培地を新たに調製した新鮮な血清を包含する完全培地に置換した。X-100)で溶解した。β-メルカプトエタノール)と混合して、5分間煮沸した後、10%ポリアクリルアミドゲルでSDS-PAGEによって分離した。Millipore社)に電気的にブロッティングした。Tween-20/TBS)で1時間処理し、後述の希釈1次抗体を加えて4°Cで一晩インキュベートした。Tween-20/TBSでメンブレンを洗浄し、1/5000で希釈した西洋わさび(horseradish)ペルオキシダーゼ(HRP)標識ヤギ抗マウスIgG抗体(Sigma-Aldrich社)又はヤギ抗ウサギIgG抗体(Sigma-Aldrich社)と共に1時間室温でインキュベートした。Substrate(Millipore社)を用いて視覚化した。前記希釈1次抗体及びその希釈率は、以下の通りである。抗PSD95抗体:1/1000希釈したマウスモノクローナル[6G6-1C9](Abcam社)、抗SynI抗体:1/1000希釈したウサギポリクロ―ナル抗体(Abcam社)、抗vGluT1抗体:1/1000希釈したマウスモノクローナル抗体[MAB5502](Millipore社)、抗シナプトフィジン(Syp)抗体:1/1000希釈したマウスモノクローナル抗体[SY38](Dako社)、抗αチューブリン抗体:1/10000希釈したマウスモノクローナル抗体(Sigma-Aldrich社)。Sypは、シナプス小胞膜タンパク質であり、神経細胞に発現し神経伝達に関与している。αチューブリンは、各試料の内部コントロールとして用いた。[0099](結果)図6に結果を示す。R6/2マウスでは、vGluT1、SynI、及びPSD95が野生型マウスのそれと比較して顕著に減少している。AAV9_miR-132を導入したR6/2マウス(HD_miR-132)では、それらのタンパク質が野生型マウスとほぼ同レベルにまで回復した。この結果は、本発明のmiR-132の補足によりハンチントン病患者におけるシナプス形成の異常を改善し得ることを示唆している。[0100]<実施例6:シナプス形成の検証>(目的)ハンチンチン(以下「HTT」と表記する)は、ハンチントン病の原因タンパク質であり、HTT遺伝子中のCAG繰り返し配列が正常HTT遺伝子よりも長くなった異常型HTT遺伝子産物の細胞内蓄積によって引き起こされる。vitroで検証する。293-229/298)。pEGFP-Q22、及びpEGFP-Q145は、22回の正常なCAG繰り返し配列、及び145回の異常なCAG繰り返し配列をそれぞれ含むHTT遺伝子の第1エクソンをEGFPレポーター遺伝子に連結した融合遺伝子である。前記各プラスミドから、新たにpDsRed-Q-Wt及びpDsRed-Q-Mtを構築した。BIO社)に由来するDsRed-monomer遺伝子に連結した融合遺伝子である。実施例5に記載の方法に準じた。マウスには、野生型のICR系統を使用した。[0103](3)トランフェクションpMiR-132及びpMiR-Negと共に、pEGFP-Q22又はpEGFP-Q145を導入した。トランスフェクションの方法は、実施例5に記載の方法に準じた。technology社))で室温にて1時間インキュベートした。処理後の細胞におけるシナプスの形成は、抗SynI抗体を用いて検出した。後述の希釈1次抗体を加えて4°Cで一晩インキュベートした。Probes社)で標識したアイソタイプ特異的な2次抗体で視覚化した。Scientific社)/PBSで核染色を行った。CFL)を用いて染色後の細胞を観察した。Scientific社)を用いた。μmあたりの神経突起上にあるSynI陽性シナプス棘(spine)数をカウントした。[0107](結果)図7に結果を示す。神経突起上にあるSynI陽性シナプス棘数は、変異型HTTを発現するpEGFP-Q145と陰性対照用miRNAであるpMiR-Negを導入した細胞では、正常型HTTを発現するpEGFP-Q22とpMiR-Negを導入した細胞と比較して有意に減少したが、pEGFP-Q145とpMiR-132を導入した細胞では、変異型HTT発現下であるにもかかわらず、pEGFP-Q22とpMiR-132を導入した細胞と比較して有意な減少は見られなかった。この結果は、miR-132を補足すれば、変異型HTTによるシナプス形成の阻害を回避できることを強く示唆している。[0108]<実施例7:miR-132による変異型HTTの発現抑制の検証>(目的)ハンチントン病は、異常型HTT封入体が神経細胞内に蓄積される結果、引き起こされる。miR-132による異常型HTT存在下でのシナプス形成阻害の抑制がmiR-132による異常型HTTの発現抑制によるものか否かを検証する。[0109](方法)免疫組織化学によりハンチントンモデルマウスの脳神経細胞内に蓄積された変異型HTT封入体を検出した。実施例2と同様の方法によりR6/2マウスにAAV9_miR-132又はAAV9_miR-Negを投与した。PFA/PBSで4°Cにて一晩固定した。sucrose/PBSに浸漬した後、4°Cにて再び一晩インキュベートした。Finetech社)に脳標本を凍結包理し、矢状断面に切断して、15μm厚の低温切開片を作製した。ヤギ血清を含むPBSに希釈1次抗体を加えて4°Cで一晩インキュベートした。SP2)を用いて観察した。Technology社)/PBSで染色した。Scientific社)を用いた。[0110](結果)図8に結果を示す。Aは、R6/2マウスにおける脳の免疫組織化学の結果を示す図である。図中、矢印は、GFP陽性細胞で観察された封入体を示す。247μm/視野)における封入体を包含するGFP陽性細胞の数を示す。[0111]AAV9_miR-132又はAAV9_miR-NegR6/2を投与したマウスの神経細胞間で封入体の数に有意な差は認められなかった。[0112]また、RT-PCRにより、AAV9_miR-132又はAAV9_miR-Negで処理したR6/2マウスにおける変異型HTT導入遺伝子の発現レベルを確認したが、同様に変化は見られなかった(図9)。これらの結果は、miR-132が、変異型HTTの発現やその封入体の形成の抑制に、ほとんど影響していないこと示唆している。これは、異常型HTTの封入体が神経細胞内に蓄積されたままであるにもかかわらず、ハンチントン病の症状が改善していることを意味する。miR-132は、変異型HTTのような異常タンパク質等が神経細胞に蓄積しても、疾患の直接の原因である異常タンパク質を標的とすることなく、シナプス形成の増強によって十分な神経回路網を形成し、より強固な脳を構築することで、毒性に対する耐性を増強していると考えられる。それ故に、miR-132/miR-212は、ハンチントン病のみならず、シナプスが破壊され、消失するアルツハイマー病のような他の神経変性疾患の予防や改善にも効果があることを示唆している。[0113]上記実施例3~6の結果をまとめると、miR-132の補足は、ハンチントン病モデルマウスの脳におけるシナプス形成を増強し、脳を形態面で正常な状態に回復させ、それによって、ハンチントン病モデルマウスにおける運動機能や寿命を改善することを強く示唆している。[0114]<実施例8:脊髄小脳変性症モデルマウスの小脳におけるmiR-132の発現プロファイル>(目的)実施例1~7ではハンチントン病におけるの脳の各領域におけるmiR-132発現量が減少を確認し、またmiR-132量の補足により疾患が改善することを確認した。本実施例では、ハンチントン病以外の神経変性疾患においても脳におけるmiR-132発現量が減少していることを確認するため、正常マウスと脊髄小脳変性症モデルマウスの発現プロファイルを比較検証する。Laboratory)を使用した。野生型系統マウスは、同腹の正常マウスを使用した。154Q/2Qマウス3匹から脳を摘出し、SCA1において最も顕著な症状が見られる小脳のmiR-132の発現レベルを調べた。具体的な方法は、実施例1に記載の方法に準じた。[0117](結果)図10に小脳におけるmiR-132の発現レベルの結果を示す。SCA1モデルマウスでも小脳内でのmiR-132の発現レベルは、ハンチントン病と同様に野生型マウスと比較して有意な差異が認められた。[0118]<実施例9:脊髄小脳変性症モデルマウスの他の脳領域におけるmiR-132の発現プロファイル>(目的)実施例8ではSCA1モデルマウスの小脳におけるmiR-132発現量の減少を確認した。本実施例では、SCA1の他の脳領域におけるmiR-132の発現プロファイルについて検証する。線条体におけるmiR-132の発現レベルを調べた。基本的な方法は、実施例1及び8に準じた。[0120](結果)図11に上記各脳領域におけるmiR-132の発現レベルの結果を示す。SCA1モデルマウスでは小脳内以外の脳領域でもmiR-132の発現レベルが野生型マウスと比較して有意に低減していることが確認された。[0121]実施例8及び9の結果は、脳内のmiR-132量の不足は、ハンチントン病のみならず、脊髄小脳変性症のような他の神経変性疾患においても共通し得ることを示唆している。他の神経変性疾患においても神経細胞内におけるmiR-132量を補足するによりその患者における異常を改善し得る蓋然性があることを示唆している。[0122]本明細書で引用した全ての刊行物、特許及び特許出願はそのまま引用により本明細書に組み入れられるものとする。請求の範囲[請求項1]以下の(a)~(c)に示す塩基配列を含むポリヌクレオチド又はその転写産物からなるシナプス形成増強剤。(a)配列番号1又は5で示す塩基配列、(b)配列番号1又は5で示す塩基配列において1若しくは複数個の塩基が欠失、置換又は付加された塩基配列、又は(c)配列番号1又は5で示す塩基配列に対して95%以上の塩基同一性を有する塩基配列[請求項2]前記ポリヌクレオチドが発現ベクターに発現可能な状態で包含されている、請求項1に記載のシナプス形成増強剤。