研究者情報全体を検索する場合は右端の「すべて」を選択して下さい。DNA中に蓄積した損傷塩基は突然変異や細胞死を引き起こすため、様々な疾患の原因となる。我々は、DNA中の損傷塩基の起源としてヌクレオチドプール中に生じたの損傷ヌクレオチドに注目している。損傷ヌクレオチドはDNAに取り込まれることによりDNA損傷応答を引起こすと考えられる。よって分解されることで、DNAへの取込みが抑制されている。デオキシイノシン三リン酸(dITP)はdATPの酸化的脱アミノ化によって生じる損傷ヌクレオチドである。16(NUDT16)が存在し、dITPの蓄積を抑えていることを明らかにしてきた。MR細胞ではNUDT16のノックダウンにより細胞増殖の抑制および核DNAに一本鎖切断の蓄積を認めたが、ミスマッチ修復(MMR)に必須の遺伝子MLH1の発現抑制によりこれらの現象は解除された。MLH1のナンセンス変異を両アリルに持つHCT116細胞はITPAノックダウンの影響を受けなかったが、この細胞に正常なMLH1配列をノックインしたH414細胞ではITPAノックダウンによる細胞増殖の抑制を認めた。今回、ITPAノックダウンにより細胞増殖が抑制されたH414細胞をフローサイトメトリーにより解析したところ、S期の細胞の減少と同時にG1期とG2期のそれぞれの細胞集団の増加を認めた。次に、ITPAをノックダウンしたH414細胞の培地にデオキシイノシンを添加したところさらなる細胞増殖の抑制を認めたが、イノシンでは何ら効果を認めなかった。この結果は、dITPの蓄積が細胞増殖抑制の原因になっていることを示している。現在、ミスマッチ修復において損傷部位の認識に関わるMSH2の欠損の影響や細胞周期チェックポイント機構に対する阻害剤の影響を解析しており、それらの結果も合わせて報告する。DNAの損傷は遺伝子変異や細胞死を引き起こすとともに、様々な疾患の原因となる。細胞内の遊離ヌクレオチドの損傷体は、DNAに取り込まれることによりDNA損傷の一因となる。よって分解除去される。デオキシイノシン三リン酸(dITP)はdATPの酸化的脱アミノ化によって生じる損傷ヌクレオチドである。16(NUDT16)が存在し、dITPの蓄積を抑えていることを明らかにしてきた。今回我々は、dITP分解酵素欠損による細胞増殖抑制とDNA中のデオキシイノシン(dI)の認識排除機構との関連性を調べた。MR細胞において、NUDT16のノックダウンを行うと細胞増殖抑制および核DNA一本鎖切断の蓄積を認めたが、DNAミスマッチ修復(MMR)に必須の遺伝子MLH1の発現抑制によりこれらの現象は解除された。MLH1のナンセンス変異を両アリルに持つHCT116細胞、およびこの細胞に正常なMLH1配列をノックインしたH414細胞を用いて、ITPAノックダウンの影響を解析したところ、MLH1に依存した細胞増殖抑制の誘導を認めた。MR細胞の核抽出物を用いたゲルシフトアッセイを行ったところ、dI:デオキシグアノシン(dG)ペアを含むDNAとMMRタンパク質との特異的結合が確認された。抗MSH6抗体を加えるとこの結合は消失した。以上の結果から、細胞中に蓄積した遊離dITPが複製時にDNAに取り込まれ、dIがdGと塩基対を形成した場合に、MMRによる認識とそれに続く修復機構に依存して細胞増殖抑制が誘導されると考えられた。ヒトMTH1の発現がこれを抑制することを見出してきた。Arrayを用いて解析した。PCRで発現の確認を行った。イノシンヌクレオチドは、一部はプリンヌクレオチド合成経路の前駆体として生合成されている一方で、アデノシンヌクレオチドのC6位の脱アミノ化反応によっても生じる。(デオキシ)イノシン三リン酸((d)ITP)はゲノムDNA不安定化やATP依存性タンパク質の機能阻害など、さまざまな生体障害を引き起こすと考えられる。我々は哺乳動物細胞の(d)ITPおよび(デオキシ)イノシン二リン酸の分解酵素としてITPAとNUDT16をそれぞれ同定して来た。用いて(d)ITPによるゲノムDNA不安定化分子機構と細胞内(d)ITP生成経路の検討を行った。遺伝子改変マウスをモデルとしたDNA塩基除去修復欠損の分子病態解明.本データベースの内容を無断転載することを禁止します。