(1825-1898)が1894年に提唱して以来という古典的で有名な固定液だが、昇汞を含むうえに重クロム酸カリも含むため今日ではあまり使われることはない。Lugol(ルゴール)液(ヨウ素とヨウ化カリウムの水溶液)に5〜15分ほど漬けてよく水洗した後、チオ硫酸ナトリウム液に入れる脱昇汞処理が必要。ツェンカー・ホルマリン固定液とも呼ばれるように、上述のツェンカー固定液の使用時に氷酢酸に代えてホルマリンを5ml添加する。※ホルマリンの添加は使用事に行う。試薬調整に際して金属の薬匙などは使用してはいけない。海外文献に時々出てくるので参考までにASCPのマニュアル内容を記載したが、毒物である昇汞を含んでおり国内では殆ど使われていないし、環境に対して責任のもてない物質は使用すべきではない。sulfate、化審法:1-542、無色結晶で水、グリセリンに可溶、アルコール不溶。bioscience社のデータシートによるが、「IHCWORD」(http://www.ihcworld.com/)で別名「JB固定液」として紹介されている処方ではトリス塩酸緩衝液のモル数は0.1Mで、固定時間は24〜48時間となっている。上記処方ではpHは6.5〜7くらいになるが、アルカリを用いてpHを調整すると亜鉛の沈殿を生じることがあるので少しくらいpHが低くてもそのまま使用されているようである。浸透力の弱い点(3mm厚の組織で8〜12時間)が欠点。embedding(FFPE)sectionと明記してあれば別だが、「パラフィン切片でも反応する抗体」と言う場合、それは必ずしも「ホルマリン固定組織でも反応する」という意味とは限らない。fixativeを前提としている場合があるので注意が必要。formalin」の名称で市販されている製品も幾つかあるが、それらの具体的な処方については不明。具体的に亜鉛がどのように抗原性の保存に効果をもつのかは明確ではないが、簡単な方法として緩衝ホルマリン固定液に少量(1g/100mlほど)の硫酸亜鉛や塩化亜鉛を加えるだけでも多少の効果は期待できる可能性はある。本邦での使用経験はまだ少なく保証の限りではないが、現在当然のことのように行われている加圧熱処理のような強引な「抗原賦活法」についてはそろそろ見直すべき時期にあるのかもしれない。最終1000ml「検査と技術」37(5),425-429,2009(医学書院)で、川崎医科大学の小林らが骨髄生検用の「AZF固定液」としてロンドンのHammersmith病院の処方を紹介していたので記載した。固定時間は20〜24時間とある。acetateともいう。115°C、MW:181.63。acetate)には酸化数の違いにより(I)と(II)がある。酢酸銅(II)は触媒や酸化剤として用いられており、草木染めの媒染剤としても利用されている。ASCPのマニュアルにあるので一応掲載した。アルコール/アセトン/クロロホルム系の固定液は強力な脱水と脂質溶解により蛋白を凝固させる。剥離細胞や培養細胞などを短時間で固定する際や、水溶液であるホルムアルデヒド系固定液では組織外に溶出するような水溶性物質の保存に優れているが、脂質分析には適さない。蛋白分子に与える化学的変化は乏しいものの、組織の強い収縮硬化をもたらすため組織用の固定液としては粘液の分析や血液細胞の膜表面抗原の検出など特殊な用途に使用されることが多い。細胞塗抹標本でPapanicolaou染色などを行う場合に一般的に用いられている固定法。細胞診では「湿固定」と呼ばれ通常使用される。純エタノールに蒸留水を加えて95%にした液に塗抹標本を浸漬する。(この際、できるだけ一気に浸漬すること。途中で止めると液面の部分では細胞が剥離する。99%以上の純アルコールではむしろ固定力が弱いので注意。標準的な固定条件は室温下で10〜20分程度。血液などの細胞塗抹標本でGiemsa染色を行う場合に一般的に用いられている固定法。塗抹標本を冷風で急速乾燥させた後、直接固定液に浸漬する。(この際、できるだけ一気に浸漬すること。)標準的な固定条件は室温下で数分程度。エタノールよりも脱水力が強く細胞・組織の収縮変性はかなり強くなるため、組織や乾燥させていない細胞に対してはあまり使用されない。エーテル・アルコール等量混合液エーテルとエタノールを等量(50:50)混合したもの。昔は細胞診の固定液として常用されていたが、エーテルの毒性と揮発性、引火性のため現在ではあまり使用されていない。アルコール・ホルマリン混合液95%エタノール9容とホルマリン1容を混合したもので、要するに10%ホルマリン固定液の水をアルコールに代えたもの。組織に対してはエタノールは80%程度の方が収縮が少ない。蛋白の固定速度が速いので小さな組織なら4〜5時間、標準的には1〜2日程度までにしておかないと組織が硬化して切り難くなることがあるので殆ど使われていないが、固定完了までに糖質の溶出を防ぎたい場合などに向いている。ちなみに、メタノールを用いると組織の収縮はさらに強くなる。最終100mlFAAは植物用の固定液として使われている。植物組織は含水、含気量が多いのでアルコール系固定液で陰圧下、室温1日以上固定すると良い。酢酸を入れると核蛋白の固定が良くなることは知られており、前述のアルコール・ホルマリン混合液に5%程度の氷酢酸を加えて用いられることもある。Hartmannの名を冠してハートマン固定液とも呼ばれる。動物では眼球や睾丸、血液細胞の固定に使われるほか、自己融解の早い魚類の固定に適していると言われるが、内容的にはFAAのエタノール濃度を下げ、ホルマリン濃度を高くしたものである。3:2:1:3となっている。リンパ節組織での固定時間として1〜24時間が推奨されている。変法も多く、アルコール濃度が95%のものから99%のものもあれば、10%ホルマリンではなくホルムアルデヒド37%含有のホルマリン原液を使用している文献もある。固定液全般について言えることだが、要するに重要な成分さえ忘れなければ細かい処方については多少アバウトでも良く、扱う組織材料に合わせて加減してみるということである。最終100mlあまり使われていないと思うが、FAAの酢酸の代わりにプロピオン酸を用いたものもある。10ml6:3:1の割合(631)と覚えると良い。アルコールぺースなので固定後は水洗せずに70%アルコールに移し、そのまま脱水過程に入る。脱水過程に移れない場合(ちょっと保管しておく場合)は70%アルコール中で保管。25mlカルノア固定液の処方からからクロロホルムを除き、アルコールと氷酢酸を3:1の割合で混合したもの。※昔のAFIPの染色マニュアルで「Clarke(クラーク)固定液」として紹介されているものと同じ。植物細胞などの固定にも使われる簡便な固定液だが、培養細胞の固定にも使え、カバースリップ培養やスライドカルチャーなら10分程度で固定できる。10ml要するにカルノア固定液のアルコールをメタノールにしたもの。冷アセトン固定液アセトンの脱水固定力を利用したもので、血液細胞の乾燥塗抹標本や培養細胞(特に浮遊細胞)などに対して使われることが多く、通常冷蔵庫内(4°C)であらかじめ冷やしておいたアセトン液の中に5分〜30分入れて固定することが多い。組織の場合は、通常は未固定の新鮮凍結組織から作製した凍結切片を固定(風乾後)する際に使用されたりする。組織への収縮硬化変性が大きく標本作製に困難をきたすため、組織そのものを直接アセトンに漬けることは少ないが、様々な分子生物学的分析に供するためにAMeX法やHOPEなど工夫された方法がある。他にホルマリンやPFAなどのアルデヒド系固定液と混ぜて両方の利点を求めた固定液もある。固定そのものは冷アセトン固定なのだが、収縮など組織に与える影響を少なくするために脱水処理の過程を工夫したもの。液)に固定前に浸漬およびアセトンに添加することで収縮など組織に与える影響を少なくしたもの。trustで次のように紹介されている。60ml化学物質の取扱いには専門知識と安全な設備が必要です。化学物質には法による規制のあるもの、取扱いに資格を要するものがあります。詳しくは都道府県の薬務課などにお問合せ下さい。神保049TA0022号)Javascript対応のブラウザでご覧下さい。