式I:【化1】(式中、R1、R2、R3、R4及びR5は明細書中に定義されるとおりである)の化合物、全てのその立体異性体の形態、及び全ての比率のそれらの混合物並びに生理的に許容されるその塩を提供する。哺乳類原形質膜GPI−PLCに特異的な阻害剤、GPI2350の合成は、細菌やトリパノソーマの(G)PI−PLCの(結晶)構造、基質の必要条件、GPI認識及び切断機構についての背景的知識や、更にこれまでそれらについて記載された阻害剤に基づいていた。トリパノソーマのGPI―PLCに対しては、GPI及びPIは、それぞれ、効率的な及び貧弱な基質である一方で、細菌のPI−PLCに対してはその反対である。171:6077-6083")。35:9496-9504")。コア四糖類の残りの部分は、殆んどPI−PLCと接触がなく、このことはGPIアンカー内に受入れられたコアグリカンの顕著な構造多様性を説明しているのであろう。これらをもとにして、現時点の実験データは、細菌のPI−PLCによるPI及びGPIの、更に、トリパノソーマのGPI−PLCによるGPIの切断の触媒機構は全て類似していることを示唆している。哺乳類PI−PLCがセカンドメッセンジャー、イノシトール三リン酸、を生成して、GPIアンカーを受入れることができず、細菌のPI−PLCがリン酸化PIを切断することができないことを考慮すると、このことが脂肪細胞原形質膜GPI−PLCに対して正しいかどうかは知られていなかった。細菌及びトリパノソーマの(G)PI−PLCの基質必要条件は、以前、PI類縁体及びGMI誘導体で試験されていた。触媒作用には、イノシトールの2位に遊離のOH基が必要とされる。T.brucei由来のミリスチン酸エステル含有VSGを用いた研究で、(G)PI−PLCは、GMIの2−デオキシ−イノシトール類縁体によって競合的に阻止され、イノシトール−2−OHは、触媒作用には必要であるが、基質認識に重要ではないことが示された。271:15468-15477”)。それ故、イノシトール−1位及びイノシトール−2位の両方のOH基は触媒作用に関与しているが、なお、ホスホリル基のみが基質認識に必要であるようにみえる。興味深いことに、グルコサミン(α1→6)−イノシトール−1,2−環状リン酸は、トリパノソーマGPI−PLCに対してGMI−1−リン酸よりも、よりよい阻害剤であるが、細菌のPI−PLCに対してはそうでないことが判明したが、このことは環状型が前者に対して生成物類縁体として作用するのであろうことを示唆している。GMI−1−リン酸のホスホネート誘導体は、十中八九切断できない基質類縁体であるので、より強力な阻害剤であることが判った。これらのデータは、細菌のPI−PLC作用について提案された2ステップ・メカニズムに合致している。PIは、先ず切断されて環状イノシトール−1,2−リン酸(cIP)構造を産生し、次いで、これがイノシトール−1−リン酸に加水分解される。興味深いことに、cIP構造は、トリパノソーマのGPI−PLC触媒作用で、第2ステップ(脱環化)ではなく第1ステップ(環化)の作用を示す、T.brucei由来のGPI−PLCへの暴露を受けて、トリパノソーマのVSGのいわゆる交差反応決定基として免疫学的に同定することができる。一過性又は安定したcIP形成に必要な条件は、ヒト赤血球AChEでのように、イノシトール残基の1位又は2位がパルミトイル化されたGPIアンカーはホスホリパーゼ切断に抵抗性である、という発見と一致している。2517-2524")。興味深いことに、イノシトールに炭水化物の置換基(即ち、グルコサミン)がないと、つまりイノシトール−1−リン酸の切断されない類縁体では、ミオ−イノシトール−1−O−ドデシルリン酸によって例示されるように、トリパノソーマのGPI−PLCを阻害することが見出された。15468-15477")。興味深いことは、B.cereus及びT.brucei由来の(G)PI−PLCのこれら化合物のいくつかによる差別的な阻害は、二つの酵素が(G)PI−PLCの機械的なサブクラスを表すと論じていることである。残念ながら、類似のデータが哺乳類のGPI−PLCについて未だに得られていない。驚くべきことに、新しく合成されたミオ−イノシトール−1,2−シクロ−ドデシルホスホン酸(GPI−2350)は、細菌及び脂肪細胞のGPI−PLCの強力な阻害剤であることが判った。【0006】アルカリ性ホスファターゼ(aP)が細菌のホスファチジルイノシトール特異的ホスホリパーゼC(PI−PLC)によって膜二重層から放出されるという最初の観察は、グリコシルホスファチジルイノシトール(GPI)脂質への共有結合を含むタンパク質の別の型の膜付着の同定へと導いた。【0007】GPIアンカーの最初の完全な構造は、トリパノソーマ・ブルセイ由来の変異体表面グリコプロテイン(VSG)について明らかにされた。【0008】コア四糖類は、3つのマンノース残基と非アセチル化グルコサミンからなり、後者の一末端はホスホエタノールアミン架橋を経てタンパク質部分にアミド結合しており、他の末端はホスファチジルイノシトール(PI)の6−ヒドロキシル基にグリコシド結合的に結合している。PIは、それぞれジアシルグリセロール及びホスファチジン酸を放出する特異性C及びDの(G)PI−特異的ホスホリパーゼ[G]PI−PLC/Dによって切断され、タンパク質部分の末端(ホスホノ)イノシトールグリカン(PIG)構造を残す。【0009】それ以来、種々の起源の細菌PI−PLCが、GPIアンカー型タンパク質(GPI−タンパク質)を検出するのに一般的に使用されている。【0010】GPIアンカー型VSGからなる防護的表面被膜のGPI−PLCによる脂肪分解放出は、T.bruceiにとっては、宿主の免疫系を逃れるために抗原変異を達成するために必要であろうと推測される。殆んどの哺乳類細胞及び組織は、大多数が原形質膜の外小葉に埋め込まれているGPIアンカーを有しているGPI−タンパク質を発現するので、内因性の(G)PI/PI−PLC/Dが、それら細胞の表面発現の特異的ダウン・レギュレーションを調節し、同時に循環における可溶性タンパク質部分の増加を調節することができる。【0012】GPI−タンパク質の可溶性型は、5−ヌクレオチダーゼ(5’−Nuc)、Thy−1、アルカリ性ホスファターゼ(aP)及びCD16受容体のように血流内を循環していることが検出された。おいて同定することができた。ラット肝からのGPI−PLCは、均質性を示すまで精製された。内因性GPI−PLCは、ブタの最大の小管から腎ジペプチダーゼを放出する能力を有していると記載されていた。GPI−PLCの構造又は遺伝子の解明は未だされていない。)の組織材料の全ての型から回収することができる。【0013】GPI−PLDの主な役割は、多分、リソソームへのエンドサイトーシス及びトラフィッキングの後のGPIタンパク質のGPIアンカーの分解である。哺乳類の組織は、血清中及び細胞表面において、異なった機能性を持って活性である二つのはっきりと識別できるGPI−PLDを持っている。酵母及び齧歯類脂肪細胞の5’−Nuc及びaPのようないくつかのGPIタンパク質は、インビトロ及びインビボでGPI−PLCによるGPIアンカーの脂肪分解により細胞表面から可溶性のものとして放出されているようにはみえない。付加的な温和な塩及び/又はトリプシン切断が、顆粒画分/細胞から分離の後に、可溶性画分/培地中のいくつかの脂肪分解的に切断されたGPIタンパク質のタンパク質部分の回収に必要とされるのは、受容体タンパク質の存在を示唆している。【0016】これらの場合において、GPI−PLCの活性はGPI−タンパク質の局在又はトポロジーに影響しないが、代わりに、両親媒性から親水性の形態への変換の途中で機能的(触媒/結合)特性を変化する。無処置のGPIアンカーの存在は、それに付いているタンパク質部分の立体構造及び挙動に影響している。【0017】5’−Nuc及びGce1の場合には、触媒及び結合効率は、膜に包埋された又は界面活性剤ミセル又はリポソームに再構築された完全な形のものと比較すると、脂肪分解的に切断されたGPIタンパク質において増加した。【0018】GPIタンパク質の脂肪分解プロセシングが細胞壁の生合成の間ある役割を演じているような、酵母におけるグルコースのような栄養シグナルによって、及び齧歯類の脂肪細胞、ミオサイト及びヒト内皮細胞におけるグルコースやある種のホルモン、増殖因子及び薬物(例えば、インスリン、グリメピリド)によって、真核生物において、多くのGPI−PLが、アップレギュレートされている。【0019】グリメピリド、抗糖尿病薬は、膵細胞からインスリン放出を刺激することによって、更に、少しの程度であるが、筋肉細胞におけるグルコース輸送の活性化及び脂肪細胞における脂肪分解の阻害のような、末梢組織での代謝的インスリン作用を模倣することによって、主に血糖を低下させる。経た脂肪細胞及び筋肉細胞における非酸化的グルコース代謝の刺激によって引き起こされる。いくつかのGPIタンパク質のような脂質ラフト関連シグナリング成分の再分配及びそれに伴っておこる活性化、並びに、インスリンによって中程度に活性化もされる原形質膜グリコシルホスファチジルイノシトール特異的GPI−PLCの促進に関与していることが明らかにされている。【0021】グリメピリドは、膵臓β細胞からのインスリン放出を促進するスルホニルウレア剤であり、膵臓外の機構を経て作用するであろう。グリメピリドは、血糖症が食事及び運動だけではコントロールされない2型(非インスリン依存性)糖尿病患者に1日1回投与され、続発性スルホニルウレア障害の患者にインスリンと併用されることもある。【0022】グリメピリドの最大の血糖低下効果は、投与後最初の4時間に起こる。グリメピリドは、グリベンクラミド(グリブリド)よりも心臓血管変動に対する重篤な影響はより少ない。薬物動態は高齢の患者又は腎疾患や肝臓疾患のそれら患者において主として不変である。グリメピリドの薬物相互作用は殆んど報告されていない。【0023】2型糖尿病患者において、グリメピリドの有効投与範囲は、0.5から8mg/日であり、4mg/日と8mg/日の投与間に有効性の差が殆んどない。グリメピリドは、1年間の試験において、グリベンクラミド及びグリピジドの有効性と類似していた。グリメピリドは最初の数週間にわたる治療でグリピジドよりもより速く血糖を低下するようである。グリメピリド及びグリクラジドが、14週間の試験で基準線に良好に血糖コントロールができている患者で比較され、効果に差がないことが指摘された。グリメピリドとインスリンの併用は、絶食時血糖標的レベルが≦7.8mmol/Lに達する続発性スルホニルウレア障害の患者の治療において、インスリンとプラセボの併用と同程度の効果があったが、グリメピリドを用いることにより血糖症に対してより低いインスリン投与量とより速い効果が見られた。【0024】グリメピリド単独療法は、一般的に良好な耐容性を有するが、治療期間1年以下(≦1年)の患者の10から20%、及び6ヶ月間同時にインスリンを投与された患者の50%以下(≦50%)において、低血糖症を発症した。集計した治験データは、グリメピリドは、グリベンクラミドよりも低血糖症の発生率が低く、特に治療第1ヵ月目において低いであろうことが示唆された。投与量は、通常1mg/日で開始され、1から2週間の間隔で血糖コントロールのために通常の投与範囲1から4mg/日に漸増する(英国では最大6mg/日又は米国では8mg/日)。【0025】グリメピリドは、主に膵臓β細胞からのインスリンの放出の促進によって、及び僅かな程度で、筋肉細胞におけるグルコース輸送の活性化及び脂肪細胞における脂肪分解の阻害のような、末梢組織における代謝性インスリン作用を模倣することによって、グルコースを低下させる。【0026】グリメピリドは、初代培養又は培養した齧歯類脂肪細胞を薬理学的濃度で処理すると、GPI−PLCの活性化によって、5’−Nuc、aP及びGce1のようなGPIタンパク質サブセットの両親媒性から親水性への変換を強力に誘導することが明らかにされた。本発明において初めて開示されたイノシトール誘導体、GPI−2350は、高力価(IC50=0.2〜10μM)及び選択性で細菌、トリパノソーマ及び血清GPI−PLC及びGPI−PLDを阻害する。GPI−2350は、無処置のラット脂肪細胞のGPI−PLCを殆んど完全にダウンレギュレートする。糖脂質に富む脂質ラフト領域(DIG)からインスリン受容体基質1(IRS−1)へのインスリン受容体非依存性クロストークを経由するグリメピリドのインスリン模倣効果には必須である。ためのプラットフォームとして役目を果たしている、特殊な膜ミクロドメインである。コレステロール及びスフィンゴ(糖)脂質、及び内小葉の飽和アシル鎖を有するリン脂質及びコレステロールに濃縮されていて、二重層内に液状の秩序相を形成している。DIGは、冷状態で1%トライトンX−100に不溶性であり、ショ糖勾配遠心分離法で低浮遊密度であることを特徴とする。これらの判断基準に基づいて、ある種のGPIアンカーされ、アシル化した、膜貫通シグナリングタンパク質が、原形質膜のDIG対非DIG領域に豊富にあることが見出された。高コレステロール含有のDIG(hcDIG)及び低コレステロール含有のDIG(lcDIG)は、それぞれ、それらの低浮遊密度及び高浮遊密度に基いて互いに区別することができる。【0030】hcDIGからlcDIGへの、GPIアンカーされ、そしてアシル化されたある種のシグナリングタンパク質の刺激依存性再分配は、GPI−2350によってブロックされた。【0031】GPI−2350は、脂質ラフト関連GPI−PLC(IC50=5〜10μM)による無処置のラット脂肪細胞由来の、Gce1及び5’−Nucのような、GPIタンパク質の基本的及びグリメピリド/インスリン誘発脂肪分解放出を減少させた。GPI−2350(50μM)によるGPI−PLCの阻害は、(i)pp59Lyn及びGce1のカベオリンからの解離、(ii)hcDIGからlcDIGへの再分配、(iii)pp59Lyn及びIRS−1のチロシンリン酸化、(iv)グルコース輸送の促進及び(v)グリメピリドに応答する脂肪分解の阻害、の殆んど完全な遮断を導く。【0032】GPI−PLCのインスリン活性化は、脂質ラフト分布に対する適度な効果を有し、及び、それ(例えば、IRS−1のチロシンリン酸化及び脂肪分解の阻害)が僅かに減少するだけであったので、あったとしても代謝性インスリンシグナリングにおける軽微な役割がGPI−2350のみの存在下で明らかにされた。【0033】グリメピリドに誘導されたGPI−PLCによって生成する脂肪分解的に切断されたGPIタンパク質は、それらの非切断両親媒性のもの及びpp59Lynのように、lcDIGに再分配するよりもむしろhcDIGと会合して残っている。【0034】ラット脂肪細胞において再分配され、活性化されたpp59LynによるIRSのチロシンリン酸化を経るインスリンシグナリングカスケードへのグリメピリドのクロストークは、hcDIGが関与するGPI−PLCの活性化を必要とする。本発明は、哺乳類のGPI−PLCの活性を調節する化合物の同定方法であって、a)哺乳類細胞をグリメピリドと共にインキュベートし;b)a)の細胞のhcDIGを調製し;c)b)からのhcDIGを化合物と共にインキュベートし;そしてd)c)のhcDIGからのGPI−PLCの活性を定量する;ことを含む方法に関する。方法のステップa)に記載の哺乳類細胞は、齧歯類又はイヌの細胞に関する。齧歯類は、例えば、マウス、ラット又はモルモットである。本方法は、ヒト、又は例えばチンパンジー、ゴリラ又はボノボのような類人猿の細胞にも関する。哺乳類細胞は、細胞培養によっても提供することができる。0-471-24105-9-CD-ROM)。本発明の方法のステップc)に記載のhcDIGからのGPI−PLCの活性を定量するには、hcDIGからpp59Lynの解離を測定することによって、又はhcDIGからlcDIGへのpp59Lyn及び/又はGce1の再分配を測定することによって、又はpp59Lyn及び/又はIRS−1のリン酸化の変化を測定することによって、又はグルコース輸送の促進及び/又は脂質分解の阻害を測定することによって実行される。本発明は、更に、前に開示したように本発明の方法によって同定することができる化合物に関する。そのような化合物は、例えば、本発明に開示されているような式Iを有する化合物又はその誘導体である。本発明は、又、全ての立体異性体の形態における、および全ての比率のその混合物である式Iの化合物:【化1】(式中、R1、R2、R3及びR4は、互いに独立して、OH又はFのいずれかであり、そしてR5は(C1−C20)−アルキル又は(C1−C20)−アルケニルである)及び生理的に耐容されるその塩に関する。本発明は、又、R1、R2、R3及び/又はR4のいずれか2つが互いに独立してFである、前記に記載の式Iの化合物に関する。本発明は、又、R1、R2、R3及びR4が各々の場合においてOHである、前記に記載の式Iの化合物に関する。本発明は、又、R5がC12−アルキルである、前記に記載の式Iの化合物に関する。本発明のそのような化合物は、例えば、全てのその立体異性体の形態を含む、以下の式を有する。本発明のそのような化合物は、例えば、以下の式を有する。【0045】そのような本発明の化合物は、例えば、その全ての立体異性体の形態を含む、ミオ−イノシトール−1,2−シクロドデシルホスホン酸であり得る。本発明の記載において、用語(C1−C20)−アルキルは、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、デュオデシル、トレデシル、クアトルデシル、クインデシル、セスデシル、セプタデシル、オクタデシル、ノナデシル、エイコシルの全ての立体異性体の立体構造を有する、全ての直鎖状又は分枝鎖状の化合物に関するものとする。本発明の記載において、用語(C2−C20)−アルケニルは、エチレン、プロピレン、ブチレン、ペンチレン、ヘキシレン、ヘプチレン、オクチレン、ノニレン、デシレン、ウンデシレン、デュオデシレン、トレデシレン、クアトルデシレン、クインデシレン、セスデシレン、セプタデシレン、オクタデシレン、ノナデシレン、エイコシレンの全ての立体異性体の立体構造を有する、全ての直鎖状又は分枝鎖状の化合物を包含するものとする。本発明は、更に、ミオ−イノシトール−1,2−シクロドデシルホスホン酸の製造方法であって、a)ラセミ体の1,4,5,6−テトラ−O−ベンジル−ミオ−イノシトールをリン酸化してテトラ−O−ベンジル−ミオ−イノシトール−1,2−シクロドデシルホスホン酸を得ること;及びb)テトラ−O−ベンジル−ミオ−イノシトール−1,2−シクロドデシルホスホン酸を接触水素化すること;を含む方法に関する。該製造方法は、前に特定したようなR1、R2、R3、R4及び/又はR5を含む適切な出発物質を使用することによって、本発明の別のいずれかの化合物の製造に適用し得るものである。本発明は、又、式Iを有する少なくとも1つの化合物及び/又は生理的に耐容される塩及び/又はそのプロドラッグ及び医薬として許容される担体を含む医薬組成物に関する。本発明は、更に、糖尿病の治療のために使用される薬剤の副作用を変えるための、式Iの化合物及び/又は生理的に耐容されるその塩及び/又はそのプロドラッグの使用に関する。そのような薬剤は、例えば、グリメピリドである。副作用は、例えば、グリメピリドの誤った投与量に起因する低血糖である。本発明は、又、糖尿病の治療のために使用される薬剤(例えば、グリメピリド)の副作用の治療用の医薬組成物を製造するための、式Iを有する化合物の使用に関する。本発明は、又、脂肪細胞の原形質膜を横切るシグナル伝達の間にDIG中のシグナル伝達タンパク質を同定するための、又は、GPI−PLC及び/又は依存性のシグナル伝達因子の哺乳類の変異体を同定及び特性付けるための、式Iの化合物の使用に関する。本発明は、又、グリメピリドの活性を調節する化合物の同定方法であって、a)哺乳類細胞をグリメピリドと化合物との混合物と共にインキュベートし;b)a)の細胞のhcDIGを調製し;そしてc)b)のhcDIGからのGPI−PLCの活性を定量する;ことを含む方法に関する。本発明の記載における化合物は、化学合成によって製造されるものか、天然源から単離されるもののいずれかであって、50と50,000ダルトンの間の分子量を有する、いずれかの有機及び/又は炭水化物化合物を意味するものとする。【0055】グリメピリドの活性の調節とは、活性が、促進されるか、阻害されるか、活性をある一定のレベルに安定させるという意味で保持されるか、を意味するものとする。【0056】グリメピリドの活性を調節する化合物の同定方法のステップa)における哺乳類細胞は、例えばラット又はマウスのような齧歯類の細胞、イヌの細胞又はヒトの細胞を包含するものとする。使用することができるのは、細胞培養(例えば、初代細胞培養)の細胞である。グリメピリドの活性を調節する化合物の同定方法のステップc)に記載のGPI−PLCの活性の定量は、hcDIGからのpp59Lynの解離を測定することによって、又はhcDIGからlcDIGのpp59Lyn及び/又はGce1再分配を測定することによって、又はpp59Lyn及び/又はIRS−1のリン酸化の変化を測定することによって、又はグルコース輸送の促進及び/又は脂質分解の阻害を測定することによって、達成することができる。【0057】グリメピリドの活性を調節する化合物の同定方法のステップc)に記載のhcDIGからのGPI−PLCの活性が弱められている場合は、同定された化合物がグリメピリドの活性を不活化しているか又は減少させている。GPI−PLCの活性が増強されている場合は、同定された化合物がグリメピリドの活性を促進しているか、又は支持している。医薬として許容される陰イオンを有する式Iの化合物の塩は、医薬として許容される塩の製造又は精製のための、及び/又は非治療、例えばインビトロでの応用において使用するための有用な中間体として本発明の範囲内に、同様に包含される。式Iの化合物の塩は、当業者によく知られている通常の方法を用いて製造することができる。塩は、例えば、式Iの化合物を、溶媒又は希釈剤中で、無機若しくは有機酸又は塩基と組み合わせることによって製造することができる。本明細書で使用される用語「生理的に活性な誘導体」は、例えば、ヒトのような哺乳類に投与されると、式Iの化合物又はその活性代謝物を(直接的に、又は間接的に)形成することができる、本発明の式Iの化合物の生理的に許容される誘導体のいずれか、例えばエステル、に関する。生理的に活性な誘導体は、又、本発明の化合物のプロドラッグを包含する。そのようなプロドラッグは、本発明の化合物にインビボで代謝され得る。これらのプロドラッグはそれ自体活性又は不活性であることができる。本発明の化合物は、種々の多形相、例えば、非晶性及び結晶性多形相として存在することができる。本発明の化合物の全ての多形相は、本発明の範囲内に包含され、本発明の更なる態様である。以下、「式Iの化合物(類)」についての全ての言及は、上に記載した式Iの化合物/化合物類、並びに、本明細書に記載したそれらの塩、溶媒和物及び生理的に活性な誘導体を意味する。する使用、投与様式及び患者の臨床状態に依存している。一般的に、1日投与量は、体重1キログラム当たり1日につき0.3mgから100mg(典型的には3mgから50mg)の範囲内、例えば、3〜10mg/kg/日である。静脈内投与量は、例えば、0.3mgから1.0mg/kgの範囲であり、これは1分当たり体重1キログラムにつき10ngから100ngの注入として適切に投与することができる。これらの目的のための適切な注入溶液は、例えば、1ミリリットル当たり0.1ngから10mg、典型的には1ngから10mgを含有することができる。個々の投与量は、例えば、1mgから10gの活性化合物を含有することができる。それ故、注射用アンプルは、例えば、1mgから100mg、を含有することができ、そして、例えば、錠剤又はカプセルのような経口投与可能な個々の剤形は、例えば、1.0から1,000mg、典型的には10から600mgを含有することができる。医薬として許容される塩の場合、上記した重量の詳細は、塩から由来するジヒドロチアゾリウムイオンの重量と関連している。上に挙げた状態の予防又は治療のために、式Iの化合物は、化合物としてそれ自体使用することができるが、それらは耐容される賦形剤との医薬組成物の形態で存在するのが好ましい。賦形剤は、勿論、それが組成物の別の構成物と相性がいいこと、及び患者の健康に有害でないことという意味において、耐容性でなければならない。賦形剤は、固体又は液体又は両者であり得、好ましくは、例えば、活性化合物の0.05質量%から95質量%までを含有することができる錠剤として、個々の投与量として化合物と処方される。医薬として活性な物質も、式(I)の更なる化合物を包含して存在し得る。本発明による医薬組成物は、本質的に成分を薬理学的に許容される賦形剤及び/又は助剤と混合することから成る、公知の薬学的方法の一つによって製造することができる。静脈内)投与に適したものである。糖衣をかけた剤形及び糖衣をかけた遅延放出剤形も、又、本発明の範囲内に包含される。耐酸性及び腸溶性剤形が好ましい。好適な腸溶性コーティングとしては、酢酸フタル酸セルロース、ポリ酢酸ビニルフタル酸塩、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース及びメタクリル酸及びメタクリル酸メチルのアニオン性ポリマーが挙げられる。経口投与用に好適な医薬化合物は、例えば、各々の場合において式(I)の化合物の一定量を含有する、カプセル、カシェ剤、トローチ剤又は錠剤のような分離された単位で存在することができ、粉剤又は顆粒剤として、水性又は非水性の溶液又は懸濁液として、又は水中油又は油中水エマルジョンとして、分離された単位で存在することができる。挙げたように、これらの組成物は、活性化合物と(1つ又はそれ以上の付加的成分からなり得る)賦形剤が接触されるステップを包含するいかなる好適な薬学的方法によっても製造することができる。一般的に、組成物は、活性化合物を液体及び/又は微細に分割した固体の賦形剤と均一及び均質に混合し、その後、必要により生成物を成形することにより、製造される。して、例えば、錠剤は、化合物の粉末又は顆粒を加圧又は成型によって、もし適切ならば、1つ又はそれ以上の追加の成分と共に、製造することができる。希釈剤及び/又は1つの(多くの)界面活性/分散剤と混合して、好適な装置で錠剤化することによって製造することができる。ぬらし、好適な機械で成型することによって製造することができる。経口(舌下)投与に好適な医薬組成物は、式Iの化合物と香味料、通常ショ糖及びアラビアゴム又はトラガカントゴムを含有するトローチ錠、及びゼラチン及びグリセリン又はショ糖及びアラビアゴムのような不活性基剤中に化合物を含んだ芳香錠を包含する。好ましくは、意図した被投与者の血液と好ましくは等張である、式Iの化合物の滅菌水性製剤を包含する。これらの製剤は、投与は注射として皮下、筋肉内又は経皮で行うことができるが、好ましくは、静注で投与される。これらの製剤は、好ましくは、化合物を水と混合し、得られた溶液を滅菌し、血液と等張にすることによって製造することができる。本発明の注射できる組成物は、一般的に、活性化合物を0.1から5質量%含有している。直腸投与に好適な医薬組成物は、好ましくは、個々の投与量の座薬として存在する。それらは、式(I)の化合物を1又はそれ以上の通常の固体賦形剤、例えば、カカオバターと混合し、得られた混合物を成形することによって製造することができる。皮膚に局所適用する好適な医薬組成物は、好ましくは、軟膏、クリーム、ローション、ペースト、スプレー、エーロゾル又はオイルとして存在する。使用することのできる賦形剤は、ワセリン、ラノリン、ポリエチレングリコール、アルコール及びこれらの物質の2つ又はそれ以上の組合せである。活性化合物は、一般的に、組成物の0.1から15質量%の濃度、例えば、0.5から2質量%の濃度で存在する。経皮投与も、又、可能である。経皮投与用に好適な医薬組成物は、患者の表皮と長期間密接に接触するのに適している個々のパッチとして存在することができる。そのようなパッチは、場合によっては緩衝性水性溶液中の活性化合物を、接着剤中に溶解及び/又は分散させて、又はポリマー中に分散させて、好適に含有している。適切な活性化合物濃度は、約1%から35%、好ましくは約3%から15%である。記載されているように、エレクトロトランスポート又はイオントフォレーゼによって放出することができる。【図1】(G)PI−PLC阻害剤の構造及び合成を示す。【図2】GPI−2350の力価を示す。B.cereus、ラット血清及びT.brucei由来の精製(G)PI−PLC/D、並びに単離したラット脂肪細胞由来の総原形質膜(PM)及びhc/lcDIGをGPI−2350の濃度を増加しながらインキュベートし(10分間、30°C)、次いでTX−114分配によってAChE及びaPの両親媒性から親水性への変換につきアッセイした(材料と方法を参照)。脂肪分解活性は、GPI−2350の非存在下における対照反応(100%と設定)の%を計算した。少なくとも4回の独立したインキュベーションを行い、AChE及びap活性を各3回測定して、平均+SDを得た。【図3】GPI−2350の選択性を示す。記載したように異なる由来の種々の(部分的に)精製した又は組換えリパーゼ(HSL、ホルモン感受性リパーゼ;PL、膵リパーゼ;LPL、リポプロテインリパーゼ;PC−PLC、ホスファチジルコリン特異的ホスホリパーゼC;PI−PLC、ホスファチジルイノシトール特異的ホスホリパーゼC;PLD、ホスホリパーゼD;PLA2、ホスホリパーゼA2;GPI−PLC、グリコシルホスファチジルイノシトール特異的PLC/D及びAChE(アセチルコリンエステラーゼ))、及び単離したラット脂肪細胞由来の総原形質膜(PM)及びhc/lcDIGを標準的なアッセイプロトコールに従ってGPI−2350(50μM)の非存在下又は存在下でアッセイした(材料と方法を参照)。少なくとも3回独立してインキュベーションを行い、各2回測定して、平均+SDを得た。【図4】インスリン/グリメピリド誘導GPI−PLCによるGPIタンパク質の切断に対するGPI−2350の効果を示す。パネルA及びB.hcDIGを、未処理ラット脂肪細胞から調製し、次いで、記載したようにして、GPI−2350の非存在下又は存在下でインキュベートし(5分間、37°C)(パネルA、50μM;パネルB、濃度を増加させる)、続いてインスリン(10μM)又はグリメピリド(20μM)の無し又は有りで処理した(120分間、30°C)。単離したラット脂肪細胞を、記載したようにしてインスリン(10μM)又はグリメピリド(20μM)の非存在下又は存在下でインキュベートした(15分間、37°C)。hcDIGを調製し、次いでGPI−2350とインキュベート(120分間、30°C)した(パネルC、50μM;パネルD、濃度を増加させる)。単離したラット脂肪細胞を、記載したようにして、GPI−2350の非存在下又は存在下(パネルE及びG、50μM;パネルF、濃度を増加させる)でインキュベートし(5分間、37°C)、次いでインスリン(10nM)又はグリメピリド(20μM)の無し又は有りで処理した(90分間、37°C)。hcDIGを調製した。hcDIGのGPI−PLC活性を、外因基質として5’−Nucを用い、その親水性型への変換として測定した。hcDIGのTX−114枯渇相で回収したタンパク質を、親水性5’−NucおよびaPにつき免疫ブロット処理し、又はフォトアフィニティ標識によって親水性Gce1を分析した。3回の独立した細胞インキュベーションを行い、それぞれ活性測定及びゲル・ランを2回(代表例1つを示す)行って、平均+SEを得た。【図5】DIG内のシグナル伝達タンパク質のグリメピリド誘発再分配に対するGPI−2350の効果を示す。単離したラット脂肪細胞を、記載したようにして、GPI−2350の非存在下又は存在下(最終濃度、50μM)で処理し(5分間、37°C)、次いでグリメピリド(50μM)の非存在下又は存在下でインキュベートした(120分間、37°C)。hcDIG及びlcDIGを調製し、それぞれ免疫ブロット法及びフォトアフィニティ標識によって、pp59Lyn、5’−Nuc、カベオリン1、インスリン受容体βサブユニット(IRβ)、グルコーストランスポーター4(Glut4)、及びGce1の存在についてアッセイした(ゲルの添付書類を参照)。hc/lcDIGと共に回収したpp59Lyn、Gce1及び5’−Nucの量は、GPI−2350の非存在下(100と設定)における対照反応(基本)と比較して示した。少なくとも3回の独立した細胞インキュベーションを行い、それぞれゲル・ラン2回(代表例1つを示す)を行って、平均+SDを得た。【図6】カベオリン由来のシグナル伝達タンパク質のグリメピリド/インスリン誘発解離に対するGPI−2350の効果を示す。単離したラット脂肪細胞を、GPI−2350(左パネル、50μM;右パネル、濃度増加)の無し又は有りで処理し(5分間、37°C)、次いでインスリン(10nM)又はグリメピリド(20μM)の非存在又は存在下でインキュベート(120分間、37°C)した。hcDIGを脂肪細胞から調製し、可溶化した。可溶化hcDIGから調製したカベオリン1免疫沈降物を、それぞれ免疫ブロット法及びフォトアフィニティ標識によってpp59Lyn及びGce1の存在につきアッセイした。pp59Lyn及びGce1の量は、相同免疫ブロット法(ゲルの添付書類を参照)によって免疫沈降カベオリン1の回収につき補正した後に、対照反応において(パネルA、基本を100に設定)、又はインスリン又はグリメピリド促進状態において(パネルB、100に設定)GPI−2350の非存在と比較して示した。少なくとも4回の独立した細胞インキュベーションを行い、それぞれにつきゲル・ランを2回(代表例1つを示す)行って、平均+SDを得た。【図7】シグナル伝達タンパク質のグリメピリド/インスリン誘導活性化に対するGPI−2350の効果を示す。単離したラット脂肪細胞を、GPI−2350(パネルA、50μM;パネルB、濃度を増加)の無し又は有りで処理(5分間、37°C)し、次いでインスリン(10nM)又はグリメピリド(20μM)の非存在下又は存在下でインキュベート(120分間、37°C)した。IRS−1及びpp59Lynは、脱脂した核の次にある下層(材料と方法を参照)から免疫沈降し、可溶化しhc/lcDIGとそれぞれ結合し、次いでホスホチロシンにつき免疫ブロット法にかけた。チロシンリン酸化IRS−1及びpp59Lynの量は、相同免疫ブロット法(ゲルの添付書類を参照)によって免疫沈降IRS−1及びpp59Lynの回収につき補正した後に、対照反応において(パネルA、基本を100に設定)、又はインスリン又はグリメピリド促進状態において(パネルB、それぞれの場合において100に設定)、GPI−2350の非存在のものと比較して示した。少なくとも4回の独立した細胞インキュベーションを行い、それぞれにつきゲル・ラン2回(代表例1つを示す)を行って、平均+SDを得た。【図8】グリメピリド/インスリン誘導代謝活性に対するGPI−2350の効果を示す。単離したラット脂肪細胞を、記載されたように、GPI−2350(パネルA、50μM;パネルB、濃度を増加;パネルC、5μM、50μM)の無し又は有りで処理(5分間、37°C)し、次いでインスリン(Ins、10nM)又はグリメピリド(Gli、20μM又は濃度を増加)の非存在下又は存在下でインキュベート(15分間、37°C)した。脂肪細胞を、グルコース輸送及びイソプロテレノール誘導脂肪分解についてアッセイした。活性は、対照反応において(パネルA、基本)、又はインスリン又はグリメピリド促進状態において(パネルB及びC、100に設定)、GPI−2350の非存在のものと比較して示した。少なくとも5回の独立した細胞インキュベーションを行い、それぞれについて活性測定を3回行って、平均+SDを得た。【図9】単離したラット脂肪細胞を0.5mM・NBD−FAで標識し(60分間、37°C)、洗滌し、次いでグリメピリド(パネルA、B)又はインスリン(パネルC、D)の濃度を増加して作用させる前に、GPI−2350の非存在下(パネルB、D)又は存在下(50μM;パネルA、C)でインキュベート(5分間、37°C)した。記載したようにして、イソプロテレノール(1μM)の無し又は有りで、更にインキュベーション(120分間、37°C)した後、総細胞懸濁液を、クロロホルム/ヘプタン/メタノール/0.1N・HCl(3/3/2/1、容積比)で抽出した。有機層を、マーカーとしてNBD−FAを同時に使用し、薄層クロマトグラフィー(ジエチルエーテル/石油エーテル/酢酸、78/22/1、容積比)及び蛍光イメージングにより分析した。2回の独立した標識化とインキュベーションを行った典型的な実験を示すが、同じような結果が繰り返された。TAG:トリアシルグリセロール。【図10】ラット脂肪細胞原形質膜の非DIG領域、hcDIG及びlcDIGの間のGPIタンパク質の再分配の機構についてのワーキングモデル、インスリン、グリメピリド及びGPI−PLC及び推定GPIタンパク質受容体、p115、を包含するコレステロール枯渇による制御、並びにカベオリン、pp125Fak及びpp59Lynを経由するIRS−1への代謝シグナリングの下流へのカップリングを示す。GPI−PLC及びp115の膜貫通領域(TM)を経由するhcDIGにおけるトポロジー、膜配向及び固定(anchorage)の型は、仮説に基づいたものである。DIGの細胞外小葉に面した活性部位及び結合部位のそれぞれは、大多数のGPIタンパク質の明らかにされた細胞表面位置を基にして強く示唆されているものである。カベオリンは、カルボキシル末端におけるフック様TMと3重のパルミトイル化の両者によってhcDIGの、アミノ末端おける2重アシル化によってpp59Lynの、原形質膜小葉中に埋め込まれている。Germany)の薬化学・合成部から入手した。23-39の記載に従って合成された。Germany)により提供された。Germany)から購入した。