細胞にTNFαを添加し、該細胞におけるTNFα活性を測定することを特徴とする方法。前記TNFα活性が細胞死誘導活性である、請求項1に記載の方法。細胞に医薬候補物質およびTNFαを添加し、該細胞におけるTNFα活性を測定することにより、TNFα活性を阻害する物質を選択することを特徴とする、TNFα活性阻害能を有する医薬のスクリーニング方法。細胞を含む、TNFα活性測定用キット。α:腫瘍壊死因子α)は、元々は、腫瘍部位に出血性壊死を誘導する因子として発見されたサイトカインであるが、近年ではマクロファージなどの細胞から主に産生され、炎症を通した生体防御機構に広く関わるサイトカインとして理解されている。TNFαの過剰な産生や、不適切な場所や時間での産生、TNFαネットワークの破綻などが、組織障害を引き起こしたり、種々の病気の原因や増悪をもたらしたりすることが知られている。そのひとつの典型的な例が、慢性関節リウマチである。TNFαは、神経変性疾患、エイズ、劇症肝炎などにおけるアポトーシスに関与していることも報告されている。【0003】TNFαが関与する疾患を治療するための医薬としては、抗TNFα抗体、可溶性TNFα受容体などのタンパク質医薬が知られている。TNFα活性阻害作用を有する低分子化合物などの非タンパク質医薬は未だ開発されていない。TNFα活性阻害剤の開発やTNFαシグナルのメカニズムの解明のためには、TNFα活性をインビトロで高感度で検出可能な系が必要である。これまで、TNFαの活性測定は、L929細胞(非特許文献1)などの細胞を用いて行われてきたが、その感度は十分ではなかった。細胞はネコ腎線維芽腫由来の細胞である。この細胞は、ウイルスの評価などに使用された報告はあるが(非特許文献2または3)、TNFα活性の測定に用いられた報告はなかった。本発明は、新規なTNFα活性測定方法及びTNFα活性測定キットを提供することを課題とする。本発明はまた、TNFα活性阻害能を有する医薬のスクリーニング方法を提供することを課題とする。本発明者は上記課題を解決すべく鋭意検討を行った。細胞を用いることにより、TNFα活性を高感度で測定できることを見出して本発明を完成するに至った。【0007】すなわち、本発明は以下の通りである。細胞にTNFαを添加し、該細胞におけるTNFα活性を測定することを特徴とする方法。(2)前記TNFα活性が細胞死誘導活性である、(1)の方法。細胞に医薬候補物質を添加し、該細胞におけるTNFα活性を測定することにより、TNFα活性を阻害する物質を選択することを特徴とする、TNFα活性阻害能を有する医薬のスクリーニング方法。細胞を含む、TNFα活性測定用キット。本発明によれば、高感度かつ短時間でTNFαの活性を測定することができる。TNFα活性阻害能を有する医薬を効率よくスクリーニングすることができる。以下に本方法を詳しく説明する。細胞においてTNFα活性を測定する。Nov;147(1):223-226)、所有する研究機関のいずれかより入手することができる。国立感染研究所から入手することができる。細胞は外来遺伝子が導入されたものであってもよい。【0011】TNFα活性とは、TNFαによる細胞死誘導活性やアポトーシス誘導活性などが挙げられる。細胞死誘導活性は、顕微鏡による観察やMTTアッセイなどの通常の細胞死測定試薬を用いた測定方法によって測定することができる。TNFαによるアポトーシスの誘導は、以下のようなメカニズムが知られている。domain)が結合する。TRADDから2種類の経路でアポトーシスが誘導される。domain)→カスパーゼ2へとアポトーシスのシグナルが伝達される経路である。したがって、TNFαによるアポトーシス誘導活性を測定する場合は、これらのカスパーゼの活性化の有無を調べてもよい。カスパーゼ活性は、それぞれのカスパーゼの基質を用いて基質分解活性を測定することにより調べることができる。Plate(クローンテック社から入手可)などを用いて測定してもよい。アポトーシスによりゲノムDNAの断片化が見られるため、電気泳動などによりDNA断片化の有無を調べてもよい。本発明のTNFα活性の測定方法は、TNFαシグナルの研究において使用することができる。評価対象物質がTNFα活性に対して影響を与えるかどうか、すなわち、TNFα活性を阻害または活性化するかどうかについて調べるために使用することもできる。細胞を含むキットである。細胞に加えて、TNFα、さらには、細胞死測定試薬やアポトーシス検出用試薬などを含むものであってもよい。細胞に医薬候補物質を添加し、該細胞におけるTNFα活性を測定することにより、TNFα活性を阻害する物質を選択することを特徴とする、TNFα活性阻害能を有する医薬のスクリーニング方法である。ペプチド、高分子などのいずれであってもよく、またそれらを含むライブラリーであってもよい。本発明のスクリーニング方法によって得られるTNFα活性阻害能を有する医薬は、抗炎症剤、抗リウマチ剤、抗癌剤などとして用いることができる。以下に実施例を示し、本発明をさらに具体的に説明する。本発明は下記実施例に限定されるものではない。Collection)より入手した。(8C)細胞、L929細胞は、いずれもEMEM+10%FCS培地にて、37°C、5%CO2条件で培養した。ReagentのMTS試薬を用いて行った。(8C)細胞を96穴シャーレに2×104細胞/ウェルでseedした。UK)を含む試料50μlを各ウェルに加えた。8時間または16時間、インキュベートした後、MTS試薬を20μl/ウェルで加えてさらに2時間インキュベートした。その後、マイクロプレートリーダーにて540nmの吸光度を測定した。測定値に基いて、生細胞数を算出した。8時間培養及び16時間培養のいずれにおいても、TNFαの濃度依存的な生細胞の減少が見られた。(8C)を用いることによってTNFαによる細胞死誘導活性が感度よく短時間で検出できることがわかった。(8C)細胞においてTNFα(図2(B)に示す各濃度)を添加したときの生細胞の割合を、トリパンブルー染色によって測定した。対照として、L929細胞を用いて同様の測定を行った(図2(A))。図2の縦軸は、生細胞率(%)を示す。L929細胞では、1000pg/ml以下の濃度のTNFα添加では細胞死がほとんど見られず、10000pg/mlで24時間または36時間インキュベートしてはじめて有意な細胞死が検出できた。(8C)細胞では、10pg/mlという少量のTNFα添加でも36時間のインキュベートにより有意な生細胞数の減少が検出され、100pg/mlでは24、36時間のインキュベートにより有意な生細胞数の減少が検出され、1000pg/mlでは12時間のインキュベートでも有意な生細胞数の減少が検出され、36時間のインキュベートによってほとんどの細胞が死滅した。(8C)細胞を用いることにより、従来のL929細胞細胞を用いる場合に比べて、はるかに高感度且つ短時間でTNFα活性を検出できることがわかった。(8C)細胞におけるTNFαによる細胞死誘導活性を示す図。縦軸はMTS試薬を用いて測定した生細胞数(540nmの吸光度)を、横軸は添加したTNFαの濃度(pg/ml)を示す。【図2】TNFαによる細胞死誘導活性を示す図。(8C)細胞における測定結果を示す。縦軸はトリパンブルー染色により測定した生細胞数の割合(%)を、横軸は添加したTNFαの濃度(pg/ml)を示す。