上昇率:40°C/分。最終温度:240°C。最終時間:7.25分間。蒸発している水浴中、窒素下で55°Cで標準を乾燥する。2.772ml、DMP=2,2-ジメトキシプロパン2ml)添加する。チューブを85°Cに加熱する。清潔な16x125mmガラスチューブ中で〜5mgのアラビドプシス種子を秤量し、正確な質量を記録する。標準と共に種子の入ったチューブに添加し、85°Cで15分間インキュベーションする。バイアルを〜50°Cに冷却し、その後種子をミニグラインダー中ガラス製乳棒で粉砕する。試料をチューブに戻し、少なくとも1時間窒素下85°Cでインキュベーションする。バイアルを氷上で冷却する。0.5ml、その後ヘキサン中の17:0標準250μl(0.1335mg/mlメチルエステルストック液)を添加する。激しく攪拌し、1000gで5分間遠心する。insert)(0.5ml)を伴う1.5mlバイアルへ移す。5μlをGCへ注入する。蒸発している水浴中、窒素下で55°Cで標準を乾燥する。2.772ml、DMP=2,2-ジメトキシプロパン2ml)を添加する。チューブを85°Cに加熱する。清潔なチューブ中で1個のカノーラ種子を秤量し、正確な質量を記録する。リパーゼを破壊するために、種子材料を温メタノール性H2SO4と共に、標準の入ったチューブに添加し、85°Cで15分間インキュベーションする。バイアルを〜50°Cに冷却し、その後種子をガラス製乳棒で粉砕する。少なくとも1時間N2下85°Cでインキュベーションする。バイアルを氷上で冷却する。0.5ml、その後ヘキサン中の17:0標準250μl(0.1335mg/mlメチルエステルストック液)を添加する。激しく攪拌し、1000gで5分間遠心する。パスツールピペットで、100〜200μlを、コニカルインサート(0.5ml)を伴う1.5mlバイアルへ移す。5μlをGCへ注入する。最初の結果は、図1に図示し、これは飽和脂肪酸の60%よりも大きい減少が達成されたことを示している。16:0(4.4%)よりもより多くの16:1(例えば5.9%)が達成された。約18個の追加の形質転換体に由来するT2種子を分析した。このデータ(表8および図2参照)は、最大60〜70%の「飽和体」の減少を示している。これは、示された最初のデータ(図1参照)よりも、更に強力な飽和脂肪酸の減少である。T2世代は、依然分離されることに注目することは大事であり;従って次の世代でより良い成績の(performing)系統が期待される。この点は、形質が固定されおよび系統が導入遺伝子についてホモ接合体であるまで、T1、T2、T3、および本明細書の別所に記された他の最初の世代(カノーラ系統を含む)全てについてあてはまる。(形質が固定される安定した系統および植物が作出され、および次の実施例で説明される。【0134】(表8)値は、単独の試料調製物およびGC試行に由来する(平均ではない)。TF-21は、野生型(非形質転換)植物として挙動し;恐らく説明は、遺伝子サイレンシングまたは非トランスジェニック回避(グルフォシネート系除草剤による不適切な選択)を含む。「?」は、GCクロマトグラムのピークの正体は疑問があるか、または不明であることを示す。実施例7−Westarデータ実施例5Cに説明されたものに類似したプロトコールを、周知の「Westar」カノーラ由来のカノーラ系統に適用した。図3に図示したように、示された飽和脂肪は、43%よりも多く減少され、24:0が含まれた場合には、50%の減少が実現された。710」市販の精選カノーラ由来のカノーラ系統に適用した。総飽和体は、本明細書に説明し、以下に特定した方法を用い計算した。総飽和は、16:0+18:0+20:0+22:0+24:0脂肪酸の和に由来する。単独の種子中の一部の注目すべき飽和体レベルは、表9に示した。油プロファイルは、mol%値として表されている。mol%値は、各特定の脂肪酸の式量を計算に組込んでいる。これは、その脂肪酸種の式量で除算された、所定の脂肪酸種の質量(ピーク面積、または%脂肪酸の直接計算に使用される同じ値)を使用する。710生殖質値は、同じFAME分析の試行から得た。植物は、Convironsグロースチャンバーにおいて生育し、そのため実際のmol%値は、圃場で生育した種子とは異なる。一般に、トランスジェニック植物は、16:0、18:0および20:0の減少、ならびに16:1の増加を示す。710の平均1.4%(上限2.08%、下限0.81%)から、選択トランスジェニック材料の0.1%平均(上限0.6%、下限0%)までに収まる。16:0レベルは、平均4.6%(上限5.12%〜下限4%)から、3.0%(上限3.41%〜下限2.63%)に収まる。710の0.5%平均から、選択されたトランスジェニックの0%まで下落する。710において検出不能であり、トランスジェニックにおいて平均2.3%(上限2.71%〜下限1.72%)まで増加する。710試料と重複した。これらの結果は、以下のようにまとめられる。710」市販の精選カノーラに由来する追加のカノーラ系統に適用した。以下に示したように、総飽和体および脂肪酸の個々の種類の質量%を、本明細書に考察された方法を用いて計算した。図4A-Cおよび5A-Cは、各々、事象36-11.19および218-11.30からの代表的結果を示し、これは本発明の実践により得ることができる減少した飽和脂肪レベルを明らかにしている。本発明に従い更なる操作を行うことにより、ここに例示された飽和脂肪レベルは、更に低下することができる。このデータは全て、示されたように自殖したトランスジェニックカノーラ植物から得た。【0143】まとめると、事象36-11.19に関して、温室生育した植物からのT2ハーフ種子分析は、総飽和体を2.57%と低くした。温室生育した植物からのT3全種子に関する総飽和体は、3.66%と低かった。結果は、図4Aに図示している(数値データは、図4Bおよび4Cである)。事象218-11.30温室生育した植物に関して、T2ハーフ種子分析は、総飽和体が2.71%と低いことを明らかにした。T3全種子は、3.37%と低い総飽和体を有した。結果は、図5Aに図示している(数値データは、図5Bおよび5Cである)。参考のために、NATREONは、圃場条件下で、平均して総飽和体6.5%を有した。本発明の更なる改善することにより(自殖、他の優れた系統との交雑、デサチュラーゼ遺伝子コピー数の増加[追加の形質転換、更なる育種交雑などによる]、デサチュラーゼ発現時期の変化、および変異などの追加ラウンド)、総飽和脂肪レベルの更に大きいレベルの減少が実現され得る。実施例9に示されたデータは、本発明の様々な局面を例示するために、様々な計算において使用することができる。総飽和脂肪の%減少は、所定の植物の総飽和体の、対照系統の総飽和体による最初の除算、それに続く100%からの減算により計算することができる。本発明によりもたらされるこのような低下の例は、以下に例示される。結果は、最も近い自然数(非小数)に丸めた概数であることができる。【0146】(表11)【0147】グラフ、図、表または本明細書に考察された他のものに示された数値は全て、本発明の境界および限界を規定するためのエンドポイントとして使用することができる。同様に、先に示されたものおよびより詳細に以下に考察されるもののような、これらの数値を使用する計算は、本発明の境界および限界を規定するために使用することができる。表12-14は、事象218-11.30、36-11.19、および69-11.19を伴う系統に関する、更なる代表的結果および計算を示している。実施例11−更なるカノーラデータの分析−詳細な脂肪酸プロファイル再度、図4A-Cおよび5A-Cは、事象218-11.30および36-11.19を有する様々な植物の脂肪酸プロファイルを示す代表的結果を示している。一般に、これらの結果は、16:0および18:0レベルが大きく低下されるのみではなく(対応する不飽和体レベルの結果としての増加を伴う)、20:0、22:0、および24:0レベルも有利かつ驚くべきかつ予想外のことに、低下したことを示している。場合によっては、18:2および18:3レベルも低下することができ、これは改良された油の酸化安定性を増強する。先に示唆された比のいずれか(例えば16:0-16:1、18:0-18:1、および例えば18:0-[20:0+22:0+24:0])を使用し、本発明を実践する上での有利な結果を規定することができる。総C20:0+C22:0+C24:0の合計した減少率も、驚くべきことに本発明により実現された。従って本発明は、本明細書に例示されたような、有利かつ改善された脂肪酸プロファイルを有する植物を提供する。本発明に従い更なる改良を作製することにより、より良い飽和体の減少、「無飽和」の増加、およびより良い比を実現することができる。以下の図5Cおよび図4Bのデータを使用し、様々な計算を、本発明の達成を例示するために使用することができる。図5Cおよび図4Bからの試料データは、下記表に示されている。各指定された脂肪酸の量は、各事象について、括弧内には関連する対照植物について記されている。【0153】(表15)【0154】218-11.30事象に注目すると、C20:0、C22:0、およびC24:0成分による飽和体への総寄与(contribution)は、対照において1.08%であるが、これらの成分は有利なことに本発明のカノーラ系統においては0.26%に減少している。このことは、これらの飽和体における1/4を超える減少を示している。同様に、各成分は、独立しているとみなすことができる。218-11.30事象に注目すると、C20:0成分は、対照/野生型において0.62%であるが、これは本発明の植物系統において約1/5.6に減少される(0.11%へ低下)。C22:0成分は、約1/2.7に減少され:d-9デサチュラーゼ植物系統においては0.12%であり、これはデサチュラーゼ遺伝子を欠いている対照系統の0.32%よりも低い。C24:0は、0.14%から0.03%へと約1/4.7に減少される。事象36(または36-11.19)に関して、ふたつの系統が、C20:0、C22:0、およびC24:0含量を、各々0.32、0.15、および0.04、ならびに0.30、0.14、および0.07を有する。各々0.64、0.42、および0.21を有する対照と比べ、これらの系統は、約半分のC20:0、および少なくとも約1/3のC22:0およびC24:0の減少を有する。先に言及された第一の系統は実際に、C24:0の1/5を超える減少を示している。【0156】これらの好ましい脂肪酸成分のいずれかについて、本発明の他の系統のいずれかについて、非常に多くの同様の計算を行うことができることは、直ぐに明らかになると思われる。これらの例示は、限定として構築されるものではなく、そのような新規の低下および比は、本発明を定義するために使用することができる。実施例12−次世代の更なるハーフ種子データ更なるハーフ種子FAME分析を、表16に示す。この図は、T3世代における2.64%、およびT4世代における2.66%と低い総飽和を示している。表17は、各系統に存在するD-9デサチュラーゼ遺伝子のコピー数を示している(表16の試料IDおよび表17のID行を参照のこと)。コピー数の作用は、実施例14および19においてより詳細に考察されている。実施例13−実施例12のハーフ種子データの更なる分析、ならびに脂肪酸シフト、不飽和体増加、および飽和体減少を示す更なるデータT3圃場試験からのハーフ種子データを、脂肪酸含量の「総飽和体」データに対する様々な比較を図示するために、プロットした。図6Aおよび6Bは、ヌル(非機能的挿入断片を伴う事象)および野生型対照(形質転換していない系統)と比べ、トランスジェニック事象におけるC16:0の減少およびC16:1の増加を明らかに示している。図6Cおよび6Dは、ヌルおよび野生型対照と比べ、トランスジェニック事象におけるC18:0の減少およびC18:1の増加を明らかに示している。図6Eおよび6Fは、ヌルおよび野生型対照と比べ、トランスジェニック事象におけるC20:0およびC22:0の各々減少を明らかに示している。同様の結果が、実施例4の考察で得られたデータを用い、棒グラフにおいても示されている。図6Gおよび6Hは、ヌルおよび野生型対照と比べ、トランスジェニック事象におけるC16:0のシフトおよび減少、ならびにC16:1のシフトおよび増加を明らかに示している。図6Iおよび6Jは、ヌルおよび野生型対照と比べ、トランスジェニック事象におけるC18:0のシフトおよび減少、ならびにC18:1のシフトおよび増加を明らかに示している。図6Kおよび6Lは、C18:2およびC18:3について同様の棒グラフを示している。710系統と比べ、総飽和体の非常に驚くべき減少を明らかに図示している。図6Nは、1000個の種子の分布を示している。温室の増加および圃場試験からの結果は、総飽和体の減少とアスペルギルスΔ9デサチュラーゼコピー数の間に相関があることを示唆している。個々の種子の質量を得、プラスチック製母プレート上に配置する。1/8"ボールを加える。FAEE)と共にヘプタン400μLを添加し、その後ナトリウムメトキシド(0.5N)100μLを添加する。キャップを、ストリップキャップに嵌め、5分間Genoにより粉砕する(1x500回)。ストリップキャップを再配置する。プレートの蓋をゴム製マット上に置く(余分のシーリング)。蓋を、黒色絶縁(electrical)テープで巻き、母プレートの底を外し、バイアルを露出する。プレートを、ボルテックス/ヒーター上に15分間、37°C/60rpmで配置する(ボルテックスの孔には、砂が詰められている)。プレートをx3500rpmで2分間遠心する。底蓋を戻し、蓋/ストリップキャップを取り外す。上層350μlを、Hamiltonを用いて、娘プレートへ移す。その後抽出プレートへ、ヘプタン400μLを、ISおよび代理物と共に添加する。工程5から10を更に2回繰り返す(合計3回移す)。最後に移した後、抽出プレートをHamilton上に維持する。抽出物50μlを、C11と共にヘプタン450μlを含有するアルミニウムブロック中に搭載されたガラスインサートに移す。捕捉配列96試料を、ライナー上での構造(build)が最小になるように、フロントカラムおよびバックカラム間で分離する。試料の一覧を、注入される試料の種類に応じて、5種の注入法と共に作製している。最初の注入された5試料は常に以下である。標準3各リストは、16試料の3事象を含む(48試料)。標準は、以下のように分布したFAME合計25ppmを含む。【0167】(表18)【0168】14B:おおよそのコピー数に対する予備サザンブロット分析これらの目的に使用したDNA調製プロトコールは、以下に示した。DNA約6μgを、HindIIIで消化し、消化したDNAを、0.75%アガロースゲル上を流した。Inc.のキット)PCR産物からなった。洗浄は、2xSSC/0.1%SDSにより室温で5分間を2回、その後65°Cの0.1xSSC/0.1%SDSで2回行った。Inc.)の指示に従い可視化した。ハイブリダイズしているバンドを計測し、トランスジェニック試料は最初に、1〜3本のバンドを示した場合は、「単純」、または3本よりも多いバンドを示した場合は、「複雑」と説明した。下記定義を、表に適用した。「飽和体の減少の比」は一般に同じトランスジェニック事象の種子を使用したので、これを事象のランク付けのために使用した。この直接比較は、様々な時点で組織培養により生じた植物と成長した植物の間の変動を低下することを補助している。前記データは、みかけの遺伝子量作用を示し;導入遺伝子のより多いコピーは、より多くの有効な飽和脂肪酸減少を引き起こす傾向がある。先に示された57種の「非対照」植物が存在する。これらの57種の植物は、19種の植物の3群に分けることができる。植物の一番上のセット(飽和体の最良の減少および最低レベルの飽和体を示している)は、19種の「複雑」事象(デサチュラーゼ遺伝子の3個よりも多いコピー)の11種を有する。このセットは、「単純」または「恐らく単純」と特徴付けられた19事象のうちの8種を含んだ。19種の植物の中間のセットは、「複雑」事象を19種中わずかに6種有した(19種中13種の「単純」または「恐らく単純」事象)。19種の植物の第三のセット(飽和体の比較的最低の減少を示す)は、わずかに3種の複雑事象を含み、19事象中の16種は、「単純」または「恐らく単純」であった。従って、3個よりも多いデサチュラーゼコピーを有する細胞を伴う植物は、わずかに1個のこの遺伝子のコピーを有する細胞を伴う植物よりも、飽和体をより良く減少することを示しているように見える。実施例15−オレイン酸およびバクセン酸の分離バクセン酸は、Δ-11位に二重結合を伴うC18:1である。C16:1の伸長により形成される。本明細書において考察した他の分析法は、オレイン酸およびバクセン酸のピークを一緒に「オレイン酸」と記される単独の組成の割合とするので、その追跡は重要である。記されない限りは、これらふたつは分離されなかった。バクセン酸の貢献を減算することにより、オレイン酸の貢献割合が、好ましくかつ有利なことに(および驚くべきことに)、80%未満に維持されるが、依然総飽和体の減少(全体の「無飽和」または「低飽和」レベルに対し)は達成されることが、明らかにされる。以下のふたつの実施例において示したように、これを説明するために、2種類の分析を使用した。図7Aおよび7Bは、下記プロトコールを使用し得られたデータを図示している。個々の種子の質量を得、プラスチック製母プレート上に配置する。1/8"ボールを加える。FAEE)と共にヘプタン400μLを添加し、その後ナトリウムメトキシド(0.5N)100μLを添加する。キャップを、ストリップキャップに嵌め、5分間Genoにより粉砕する(1x500回)。ストリップキャップを再配置する。プレートの蓋をゴム製マット上に置く(余分のシーリング)。蓋を、黒色絶縁テープで巻き、母プレートの底を外し、バイアルを露出する。プレートを、ボルテックス/ヒーター上に15分間、37°C/60rpmで配置する(ボルテックスの孔には、砂が詰められている)。プレートをx3500rpmで2分間遠心する。底蓋を戻し、蓋/ストリップキャップを取り外す。上層350μlを、Hamiltonを用いて、娘プレートへ移す。その後抽出プレートへ、ヘプタン400μLを、ISおよび代理物と共に添加する。工程5から10を更に2回繰り返す(合計3回移す)。最後に移した後、抽出プレートをHamilton上に維持する。抽出物50μlを、C11と共にヘプタン450μlを含有するアルミニウムブロック中に搭載されたガラスインサートに移す。捕捉配列96試料を、ライナー上での構造が最小になるように、フロントカラムおよびバックカラム間で分離する。試料の一覧を、注入される試料の種類に応じて、5種の注入法と共に作製している。最初の注入された5試料は常に以下である。各リストは、8試料の6事象を含む(1種子=1試料)(48試料)。標準は、以下のように分布したFAME合計200ppmを含む。表21は、下記のプロトコールから得られたデータを示している。表21において、T4について、脂質割合(%)は低下されず;これは、トランスジェニック系統において40.8%で維持された(対照系統と同じ)。【0183】(表21)*:処理法により検出限界未満である場合、デフォルトは0であった。