いつもありがとうございます。現在JavaScriptが無効になっています。Yahoo!知恵袋のすべての機能を利用するためには、javaScriptの設定を有効にしてください。JavaScriptの設定を変更するには「JavaScriptの設定方法」をご覧ください。いつもありがとうございます。今回は制限酵素が2種の場合の質問なのですが・・・・...シェアツイートはてブ知恵コレiru********さん2011/6/2914:24:45いつもありがとうございます。今回は制限酵素が2種の場合の質問なのですが・・・・。下記URLのベクターでクローニングします。そのときに選ぶ制限酵素はSal1とBamH1と習いました。CDS領域が197から775で、197はatgcagではじまります。そこで数点質問なのですが1この塩基配列の認識部位のない制限酵素に上記2つの制限酵素がはいっており、さらに、MCS部位にこの二つの制限酵素がありましたので、この二つの酵素を用いるという考え方でよろしいのでしょうか?2この場合先ほど質問した1種類の制限酵素BamH1だけではだめなのでしょうか?3クローニングの仕方ですが、まずPCRで複製をするところで、197の前にaaaとSal1のGTCGACをプライマーとしてつけて、aaagtcgacatgcag・・・を5’プライマーとし、3’プライマーとして、BamH1のGGATTCのあとにaaaをつけて複製ということでした。そのあとどこをどうやって、このベクターの中に挿入するのでしょうか?ベクターのSal1とBamH1の間を切り捨ててひっつけるということでしょうか?わかりにくくて申し訳ございません。お手数おかけして申し訳ございませんが、ご教授願えたら幸いですhttp://www.clontech.com/images/pt/PT3974-5.pdf#search='pmCherry'補足早速のご回答ありがとうございます、今から本を取り出してしばらく考えてみます、いろいろご丁寧にありがとうございました。違反報告ベストアンサーに選ばれた回答https://detail.chiebukuro.yahoo.co.jp/qa/question_detail/q1265513002aka********さん2011/6/3003:41:03A1その理解でよいかと。他に同じ条件を満たす酵素があるなら、色々な組み合わせを考えても良いと思います。ligationが増えるかと思います。発現vectorに入れる場合ですと、意図した向きに入るかどうかという面倒がさらに待ってます。A3定性的には、その理解で良いかと。SalIで消化しておきましょう。入念にいきたいのなら、ゲルに流して切り出しまでしておくと、insert+のplasmidが取れやすいでしょう。具体的に「ひっつける」のはligationのkitなどでやるのが簡便かと。軽視する方もおられるようですが、vector:insertの比に留意されることをお勧めします。0違反報告この回答は投票によってベストアンサーに選ばれました!シェアツイートはてブ知恵コレベストアンサー以外の回答1〜1件/1件中https://detail.chiebukuro.yahoo.co.jp/qa/question_detail/q1265513002uni********さん編集あり2011/6/3008:17:29不明な点は、またどうぞ。頼る必要がないだけの知識をおつけになる事をお勧めします。やり直すと言う事なのですね。それから2の回答にもなるのですが、1種類で切断してクローニングすると、「向き」が限定できないのです(理由はお分かりだと思います)。集団の、理論的には半分は、目的遺伝子を発現しない向きに挿入されます。1前回も書きましたが、習ったと言われる制限酵素を選択しなければ「ならない」理由はありません。合わせられればどういう組み合わせでも選択できます。あなたの先生がそれを例として勝手に選んだだけです。他にも組み合わせは考えられますので、ご自分で考えてみて下さい。2BamH1だけでもいいですが、向きが限定したかったのでしょう。それなら2種類を選択します(当然、突出末端が違うものを選択します)。突出と平滑の組み合わせは避けた方がよいです。突出なので全く問題ありません)。入れる必要があります。