Achievements研究代表者は、これまで一貫してウサギやイヌなどの中型-大型動物による独自の遺伝性網膜疾患モデルの作出・発見に従事してきた。イヌモデル(cCSNBイヌ)の原因遺伝子を突き止めて確認し、英文論文として投稿した(現在国際誌にて査読中)。この遺伝子は、当初予想した通り現在ヒトで確認されているcCSNBの原因遺伝子として知られている5つの遺伝子の1つであり、我々のcCSNBイヌがまさにヒトのcCSNBのモデルそのものであることが判明した。この遺伝子は比較的短い遺伝子であり、アデノ随伴ウイルスベクターに搭載することが可能であった。今年度は、この遺伝子を共同研究者である岩手大学理工学部の冨田浩史教授との共同研究により、プラスミドより光感受性遺伝子(ChR2)を切り出したベクターへサブクローニングし、発現用プラスミドを用いて非増殖性アデノ随伴ウイルスを作製することができた。ベクターを3種類の濃度で調整し、これを冷凍保存して硝子体注射による遺伝子治療に用いるための準備が整った。おいてイヌ(ビーグル犬)による遺伝子組み替え実験の十分な準備を行った。動物実験施設内にイヌ(ビーグル犬)の遺伝子導入実験およびERGによる機能評価と行動実験が可能な十分な広さのP2A特定飼育区域を確保し、ここに電気生理学的および行動実験の機器を搬入した。正常なビーグル犬において硝子体注射とERG記録、および暗所における行動実験を繰り返し行った。これにより、2019年度に本格的に硝子体注射による遺伝子導入実験を行うことができる環境が整った。planned.Reasonイヌのような大型動物実験を用いた遺伝子導入実験では、特に実験環境の確保と整備が重要である。おいて遺伝子組み替え実験の十分な準備を行うことができた。おいては、十分な広さのP2A特定飼育区域を確保し、ここに電気生理学的および行動実験の機器を搬入した。その後、正常なビーグル犬において硝子体注入とERG記録、および暗所における行動実験を繰り返し行うことができた。これにより、2019年度に本格的に硝子体注射による遺伝子導入実験を行うことができる十分な環境が整った。一方で、共同研究者である岩手大学理工学部の冨田浩史教授は、本研究で硝子体注射するためのアデノ随伴ウイルス(3種類の濃度)を作成することに成功し、冷凍保存によりいつでも三重大学に譲渡することができる状態を整えている。Activity2019年度は、岩手大学から三重大学へウイルスを譲渡し、生後1-2年の成人イヌおよび生後1-3か月の幼児イヌに対し硝子体内へ遺伝子組換えアデノ随伴ウイルスを投与する。ベクターの注射は網膜下注射よりもまずは硝子体内注射で行い、3種類の濃度の注射液を準備する。