¥82,000¥65,6002019/11/25~2020/03/31※色文字での表示は、キャンペーン価格およびそのキャンペーン期間です。Gesiclesは、エキソソーム様小胞を利用してCreリコンビナーゼを直接、哺乳類細胞に導入する製品である。プラスミドベクターやウイルスベクターなどの核酸を用いることなく、迅速、簡便にCreリコンビナーゼを導入できる。細胞内にCreリコンビナーゼ遺伝子を導入しないため、Creリコンビナーゼの発現が持続する心配がなく、目的以外の予期せぬ組換えを防ぐことができる。高活性のCreリコンビナーゼを確実、効率的に導入(図1参照)Creリコンビナーゼ酵素タンパク質を直接導入するため、転写や翻訳の時間は必要なく、細胞に加えるだけで、すぐに高い酵素活性が得られる。細胞内にCreリコンビナーゼ遺伝子が存在しないため、細胞内でCreリコンビナーゼが発現し続けて予期せぬ組換えを起こす危険性がない。Recombinaseは、バクテリオファージP1由来の部位特異的組換えを触媒する酵素で、loxPサイトと呼ばれる34塩基の配列を認識して2か所のloxPサイト間で組換えを起こす。ゲノム上、あるいはプラスミド上でタンデムに並んだ2か所のloxPサイトに挟まれた配列を抜き去って欠失変異を起こしたり、loxPサイトを1か所含むプラスミドを用いてゲノムDNA上のloxPサイトに部位特異的にプラスミド配列を挿入するなど、遺伝子のノックインやノックアウトに広く利用されている。Gesiclesは、その内部に高濃度のCreリコンビナーゼ酵素タンパク質を包含したエキソソーム様小胞である。293T細胞の細胞膜上にグリコプロテインが生成すると細胞内からエキソソーム様小胞の形成が誘導され、Gesiclesが放出される。iDimerize技術によりCreリコンビナーゼは赤色蛍光タンパク質CherryPickerと結合し、Gesicle内に包含される。細胞からGesiclesを取り出し、哺乳類の培養細胞に加えると、Gesiclesは細胞膜と融合し、Creリコンビナーゼを細胞内に放出する。Creリコンビナーゼは核移行シグナルを持っているため核に輸送され、細胞ゲノム上でloxPサイト間の組換えを起こすことが可能となる。Creリコンビナーゼの細胞への導入をmCherryの蛍光によりモニターすることも可能である。Gesiclesの原理と細胞への導入例LacZ遺伝子上流にloxPで挟まれたストップコドンカセットを持つレポーター細胞株は、Creリコンビナーゼで処理し、ストップコドンカセットを除くとLacZ遺伝子が発現する(図1上段)。Gesiclesの効果を調べた。631780)を用いて染色した。Gesiclesで処理した細胞は、濃い青色に染色され、高いCreリコンビナーゼ活性が示された(図1下段中)。Gesiclesの導入により、赤色の蛍光が示された(図1下段右)。Gesiclesとプラスミドでの遺伝子導入の比較LacZ遺伝子上流にloxPで挟まれたストップコドンカセットを持つレポーター細胞株は、Creリコンビナーゼで処理し、ストップコドンカセットを除くとLacZ遺伝子が発現する。Gesiclesの効果を比較した。Gesiclesで3時間処理した後、培地交換した。631780)によりLacZ遺伝子の発現を検出した。Gesicles(図2下段右)は、短時間の処理でより効率良くストップコドンの除去が行えた。cDNAとEF1αプロモーターが分断されおり、Creリコンビナーゼによってストップコドンカセットが取り除かれると、ZsGreen1が高発現する(図3上段)。実験に使用した全ての細胞は、pLVX-LoxP-ZsGreen1を導入し、puromycinで選択した安定発現株である。Gesiclesを加えて、32°Cで30分間1,000×gで遠心後、37°Cで3時間培養した。Iの発現解析を行った(下段表)。H9268)この製品を見た人は、こんな製品も見ています。取扱い製品はすべて研究用として販売しております。ヒト、動物への医療、臨床診断用には使用しないようご注意ください。して使用しないでください。ための改変、商用製品の製造に使用することは禁止されています。タカラバイオ製品に関連するライセンス・パテントについては、ライセンスマークをクリックして内容をご確認ください。他メーカーの製品に関するライセンス・パテントについては、各メーカーのウェブサイトまたはメーカー発行のカタログ等でご確認ください。ウェブサイトに掲載している会社名および商品名などは、各社の商号、または登録済みもしくは未登録の商標であり、これらは各所有者に帰属します。