生化学的な修飾には、非共有結合的に連結した多量体構造(例えばウイルスのヌクレオカプシド)が解離するような条件(例えば、反応性の側鎖の基を活性化するための酸化的条件)が必要である。加えてそのような条件は問題となっている蛋白質分子の立体構造も変化させる可能性があり、その結果としてその免疫原性に、そして最終的にはワクチンの効力に影響を与える。架橋の手段は調製に必要とされる工程の数と、抗原の損失の両者を増加させる。このワクチンにおいて、ウイロソーム膜とウイルス粒子の間の静電相互作用に起因し、インフルエンザのウイロソームを調製した後にのみ、抗原は外部表層と連結している。Berna)、及び他の包膜ウイルス由来(例えばセンダイウイルス)のウイロソ−ム様構造について、多くの特許が出願され、特許が付与されてきた。これらの方法は、ウイルスの包膜を可溶化し、ウイルスゲノムを含んでいるヌクレオカプシドを除去し、続いて「空の」ウイルスの包膜を再構築することを備える。付加的な抗原は、それらをウイロソーム膜の中に固定するために、既成のウイロソーム(エパキサール(Epaxal:登録商標))に付着されているか、あるいは脂質分子と架橋されている。【0039】ウイルス感染に対するワクチン接種の上記に述べた制限を鑑みて、本発明の基礎となる技術上の課題は、ウイルス感染の予防、軽減、又は治療のために、被験者にワクチンを接種するための改良された手段と方法を提供することである。前記の技術的な課題の解決は、特許請求の範囲中に特性が示された態様を提供することによって達成される。従って、本発明は(a)少なくとも1つの脂質、及び包膜ウイルスの包膜蛋白質を備えるウイロソーム膜と、(b)ウイロソームの内側及び外側に位置し、前記包膜蛋白質に付着した前記包膜ウイルスのヌクレオカプシド粒子を備えるウイロソームを提供する。「ウイロソーム」という言葉はウイルス様粒子(VLP)の特定の形態を定義する。ウイロソームはウイルス粒子由来の半合成複合体であり、インビトロの方法で生成される。これらは本質的に再構成されたウイルス被覆であるが、ウイルスのヌクレオカプシドが任意の化合物で置換されている。)を標的細胞の内側に送達する。使用することが出来る。【0043】VLPとは、形態と粒度に関して親ウイルスと類似している、又は見分けがつかない粒子構造であるが、感染し宿主細胞中で複製する能力を欠いている。VLPはウイルス蛋白質(真正、又は改変されたその変異体)から構成される多量体構造である。それに加え、VLPは核酸や脂質を含んでも含まなくてもよく、脂質膜構造を含んでも含まなくてもよい。1つのウイルス(HBV)に由来する2つの典型的で、かつ大幅に異なるVLPの例は、HBsとHBc粒子である。本発明の文脈中において「ウイロソーム膜」という言葉は、人工的に再構成され脂質2重膜とそれに組込まれたウイルス包膜蛋白質から構成される球形の膜構造を定義する。本発明の文脈中において「包膜蛋白質」という言葉は、元来の形態においてウイルス脂質膜と直接相互作用する、包膜ウイルスによってコードされる蛋白質を意味することを意図している。本発明に従って、広範囲の脂質を前記ウイロソーム膜は備えることが出来る。脂質の集団は中性又は荷電したリン脂質、ステロイド由来の脂質、中性又は荷電した合成脂質を備える。調製物に加えられる精製した脂質に加え、例えばインフルエンザウイルスや他の任意の包含された包膜ウイルスに由来する脂質、又は調合物に含まれるVLP(例えばHBs粒子等)を囲む脂質に由来する脂質といった、ウイルス成分に含まれる脂質も同様に最終的な調製物に含めることが出来る。これらのウイルス由来の脂質は不均一であり、ウイルス産生細胞又は組換え発現細胞の脂質組成を反映している。調合物の複雑性を最小限にするため、好適な調合物はリン脂質のみを基にしている。添付した実施例に記述しているHBウイロソームに使用されているリン脂質は、通常GMPグレードであり、登録されたワクチンであるインフレキサール(Inflexal:登録商標)とエパキサール(Epaxal:登録商標)に使用されている材料と同一であることが好適である。本発明の文脈中において「包膜ウイルス」という言葉は成熟したビリオン構造において宿主細胞由来の脂質膜を含むウイルスを定義する。包膜ウイルスの分類は表1に列記してある。本発明の文脈中において「ヌクレオカプシド粒子」という言葉はウイルスカプシド蛋白質で構成される粒子構造を意味することを意図している。この粒子構造は、(1つまたは多数の組換えウイルスカプシド蛋白質で構成される)VLP、又は親ウイルスから精製されたヌクレオカプシド複合体とすることが出来る。ヌクレオカプシド粒子が核酸を含むか否かは粒子の形成と関係がない。本発明のウイロソーム(キメラのウイルス様粒子)は1つの粒子中で物理的に結合した上記の性質を持つ分子を備える。本発明のウイロソーム中の包膜蛋白質は、対応するヌクレオカプシド粒子と相互作用する側をウイロソームの内側に向ける本来の方向で、又は対応するヌクレオカプシド粒子との相互作用する側をウイロソームの外側に向ける人工的な方向で、ウイロソームの表面に組込むことが出来る。そのようなウイロソームの一例を図1に描写している。この新しいクラスのウイロソームの構造は、上記の個々の成分の粒状の構造、又は元来のウイルスと全く異なる。この型の粒子は天然には存在せず、最先端においても今のところ人工的に生成される構造として記述も提案もされていない。この粒子構造は、分離された成分から完全に人工的に再組立させた最初の包膜ウイルス様粒子を表している。当技術分野で公知であり本明細書において上記で説明しているウイロソームは、細胞に基づいたシステムで産生する。そのような細胞を基にしたシステムでは、全ての成分を同じ細胞内で同時に産生しなければならず、発現システムの選択を大幅に制限し、収量と大量生産性に関しての妥協を強いることとなる。制御の難しい生物学的発現システムと代謝過程が、例えば成分間の比率といった、結果として生じるウイルス様粒子の組成を決定する。有用な標本を得るために、細胞システムで産生されたウイルス様粒子は、粒子構造や組成に影響を与えずに、次に抽出し精製しなければならない。対照的に、また本明細書において下記で述べるように、本発明のウイロソームの人工的な調製物の組成は、加える材料と選択する生物学的変数によって制御することが出来る。過程の単純性はその安定性を保証する。結果として生じる調合液は更なる精製を必要としない。純度に関して最適なシステムを選択することが出来る。)と、それ自身は膜に結合しない蛋白質との相互作用を利用している。宿主細胞中での天然の複製過程における大半の包膜ウイルスの組立においてこの相互作用は必要であり有効であるが、薬学的産物の人工的調製過程においてこの性質を使用することは新しい。驚くべきことに、全く違う条件下ではあるが、細胞内のウイルスの組立は本当に人工的に模倣することが出来る。【0053】ウイロソームは少なくとも1つの脂質が少なくとも1つのリン脂質を備えるウイロソームであることが好適である。前記のリン脂質がフォスファチジルコリン、フォスファチジルエタノールアミン、フォスファチジルセリンを備えると更に好適である。本発明で同様に想定するのは、更に好適な実施例において、前記の包膜蛋白質が第1と第2の包膜ウイルスの包膜蛋白質でありヌクレオカプシド粒子が前記の第2の包膜ウイルスのヌクレオカプシド粒子であるウイロソームであることである。前記の第1の包膜ウイルスは任意の包膜ウイルスから選択することが出来る。本発明に特に好適なのはインフルエンザウイルスである。本発明の更に好適な実施例においては前記の第1の包膜ウイルスの包膜蛋白質はヘマグルチニン(HA)及び/又はノイラミニダーゼ(NA)である。467-479)と同様に、不活化されたインフルエンザウイルス(例えばシンガポールA型)から精製することが出来る。インフルエンザ由来の蛋白質又は前記の第1の包膜ウイルスの蛋白質を、構造的や機械的というよりは機能的な理由で含めることが出来るが、これは本発明のウイロソームはインフルエンザ蛋白質又は前記の第1の包膜ウイルスの蛋白質が無くても同様に調製することが出来るためである。本発明のウイロソームの、ウイロソーム様担体の免疫学的性質を強化するために、インフルエンザ成分を含めることが出来る。同様に本発明に従って、前記の第2の包膜ウイルスは、(好適である)B型肝炎ウイルス(HBV)、C型肝炎ウイルス(HCV)、任意の他のフラビウイルス、及びヒト免疫不全ウイルス(HIV)から成る包膜ウイルスの一群から選択すると好適である。本発明の更に好適な実施例においては、ヌクレオカプシド粒子はHBc蛋白質を備える。【0060】HBc粒子は、全長のアミノ酸配列又は短縮型を含む形で、大腸菌で産生することが出来る。全長の産物と、短縮した144個のアミノ酸の構築物をHBウイロソームに調製することに成功している。代わりに、HBウイロソームに更に短い(非特異的な)HBV核を組込むことも考えられる。対応する技術は当技術分野で公知であり、付属の例で説明している。前記の第2の包膜ウイルスの包膜蛋白質がHBs蛋白質であると、同様に好適である。【0062】HBs粒子はS蛋白質単独、又はプレSとSの結合蛋白質を含むことが出来る。前記の粒子の産生の方法は当技術分野に公知である。粒子は例えば酵母又は哺乳類細胞で産生することが出来る。本発明のウイロソームを備えるワクチンにおけるプレSドメインの存在は、より広範でより効果的な免疫反応に寄与する可能性が高いが、調合過程に何の影響も与えない。HBウイロソームはいずれの供給源からのHBsも産生することが出来る。1つのHBウイロソーム中において、異なる供給源からの異なるHBs型、又は異なる血清型を組み合わせることさえも、本明細書で説明している方法を用いて行われてきた。本発明は上記の好適な実施例においてインフルエンザウイロソームの分類に当てはまる。同じウイルスのヌクレオカプシド蛋白質(HBc)をウイロソーム構造に繋げるために替わりに使用する、全く関係のないウイルス(HBV)の包膜蛋白質(HBsAg)を組込むことは、全く新しい。本発明の代替的な実施例は本発明のウイロソームを備えるワクチンに関連している。本発明の文脈において「ワクチン」という言葉は、ウイルス病の予防のために対象者に投与される予防的組成物を定義するものと理解される。代わりに、もしくはそれに加え、この言葉はウイルス病の緩和又は治療のために対象者に投与される薬学的組成物を意味することを意図する。「薬学的組成物」という言葉は患者、好ましくは人間の患者への投与のための組成物に関連している。組織への直接注入のための組成物を備える。前記組成物が輸液もしくは注射によって患者に投与されることは特に想定される。皮内注射等の、異なる経路によって影響される。本発明のワクチン/組成物は更に薬学的に適切な補形薬を備えることが出来る。