植物から栄養を奪い、多くの場合植物の物理的支持構造物を破壊する。イモムシは果物、組織ならびに貯蔵された穀物および小麦粉を食し、売物のこれらの商品を破壊するかそれらの価値を激減させる。期を含めた、鱗翅目害虫の様々なライフステージを指す。部分の末端を過ぎたある場所で、タンパク質は異種プロトキシン配列への移行を有する。Bt毒素のN末端の殺虫活性毒素部分は、「コア」毒素と呼ばれる。コア毒素セグメントから異種プロトキシンセグメントへの移行は、ほぼ毒素/プロトキシン接合部に存在してもよいし、その代わり元のプロトキシンの部分(コア毒素部分を過ぎて延びる)を保持して異種プロトキシン部分への移行が下流に存在してもよい。0034例えば、本発明の1つのキメラ毒素は、Cry1Daの完全なコア毒素部分(アミノ酸1〜601)および/または異種プロトキシン(アミノ酸602からC末端)である。好ましい一実施形態では、プロトキシンを含むキメラ毒素の部分は、Cry1Abタンパク質毒素に由来する。好ましい実施形態では、プロトキシンを含むキメラ毒素の部分は、Cry1Abタンパク質毒素に由来する。0035Bt毒素は、Cry1Beなどの特定のクラス内でさえ、長さおよびコア毒素部分からプロトキシン部分への移行の正確な位置が多少異なることを、当分野の技術者は認識する。一般的に、Cry1Be毒素は、長さが約1150から約1200アミノ酸である。コア毒素部分からプロトキシン部分への移行は、代表的に完全長毒素の約50%から約60%の間に存在する。本発明のキメラ毒素は、このN末端コア毒素部分の全長を含む。したがって、キメラ毒素は、Cry1Beタンパク質の完全長の少なくとも約50%を含む。これは、一般的に少なくとも約590アミノ酸である。プロトキシン部分に関して、Cry1Abプロトキシン部分の全長は、コア毒素部分の末端から分子のC末端まで伸びる。0036遺伝子および毒素。融合タンパク質も含まれる。変異体」または「変形形態」という用語は、同じ毒素をコードするか、殺虫活性を有する同等毒素をコードするヌクレオチド配列を指す。標的有害生物に対して特許請求する毒素と同じか事実上同じである生物的活性を有する毒素を指す。807-813、により、境界は約95%(Cry1DaおよびCry1Be)、78%(Cry1DおよびCry1B)および45%(Cry1)の配列同一性を表す。これらのカットオフは、コア毒素だけに適用することもできる。0038活性毒素をコードする遺伝子は、いくつかの手段を通して同定し、得ることができることは、当分野の技術者に明らかとなるはずである。本明細書で例示される具体的な遺伝子または遺伝子部分は、培養株保管所に寄託されている分離株から得ることができる。これらの遺伝子、またはその部分もしくは変異体は、合成的に、例えば遺伝子合成装置を用いて構築することもできる。遺伝子の変形形態は、点突然変異を作製する標準技術を用いて、容易に構築することができる。これらの遺伝子の断片は、市販のエキソヌクレアーゼまたはエンドヌクレアーゼを標準手順に従って用いることによって作製することができる。活性断片をコードする遺伝子は、様々な制限酵素を用いて得ることもできる。これらのタンパク質毒素の活性断片を直接的に得るために、プロテアーゼを用いることができる。0039例示される毒素の殺虫活性を保持する断片および同等物は、本発明の範囲内である。遺伝子コードの冗長性のため、様々な異なるDNA配列が本明細書で開示されるアミノ酸配列をコードすることができる。同じか事実上同じである毒素をコードするこれらの代替DNA配列を作製することは、当業者の技量の範囲内である。これらの変異体DNA配列は、本発明の範囲内である。本明細書で用いるように、「事実上同じ」配列への言及は、殺虫活性に実質的な影響を及ぼさないアミノ酸の置換、欠失、付加または挿入を有する配列を指す。殺虫活性を保持するタンパク質をコードする遺伝子の断片も、この定義に含まれる。0040本発明により有用な毒素をコードする遺伝子および遺伝子部分を同定するためのさらなる方法は、オリゴヌクレオチドプローブを用いることによるものである。これらのプローブは、検出可能なヌクレオチド配列である。能であってもよいし、国際出願公開第93/16094号に記載されているように本来的に蛍光性にしてもよい。当技術分野で周知であるように、プローブ分子および核酸試料が2つの分子間で強力な結合を形成することによってハイブリダイズする場合、プローブおよび試料は実質的な相同性を有すると合理的に仮定することができる。170に記載されているような、当分野で周知の技術によってストリンジェント条件の下で行われる。塩濃度および温度の組合せの一部の例は、以下の通りである(ストリンジェンシーが上がる順序で):室温で2×SSPEまたはSSC;42°Cで1×SSPEまたはSSC;42°Cで0.1×SSPEまたはSSC;65°Cで0.1×SSPEまたはSSC。プローブの検出は、ハイブリダイゼーションが起こったかどうかを既知の方法で判定するための手段を提供する。析は、本発明の毒素コード遺伝子を同定するための迅速な方法を提供する。本発明によるプローブとして用いられるヌクレオチドセグメントは、DNA合成装置および標準手順を用いて合成することができる。本発明の遺伝子を増幅するPCRプライマーとして、これらのヌクレオチド配列を用いることもできる。特定の毒素が、本明細書で具体的に例示されている。これらの毒素は本発明の毒素の例示にすぎないので、本発明が例示毒素と同じか類似した殺虫活性を有する変異体または同等毒素(および同等毒素をコードするヌクレオチド配列)を含むことは容易に明らかなはずである。同等毒素は、例示される毒素とのアミノ酸相同性を有する。このアミノ酸相同性は、一般的に75%を超え、好ましくは90%を超え、最も好ましくは95%を超える。性を担う3次元構造の決定に関与する毒素の重要領域で最も高くなる。この点に関しては、それらの置換が活性に重要でない領域にあるか、分子の3次元構造に影響を及ぼさない保存的アミノ酸置換であるならば、特定のアミノ酸置換が許容でき、期待できる。1つのクラスのアミノ酸が同じ種類の別のアミノ酸で置換される保存的置換は、その置換が化合物の生物的活性を実質的に変更しない限り本発明の範囲内である。下記は、各クラスに属するアミノ酸の例のリストである。0042場合によって、非保存的置換を加えることもできる。素の生物的活性をあまり損なってはならないということである。0043組換え体宿主。本発明の毒素をコードする遺伝子は、多種類の微生物または植物宿主に導入することができる。毒素遺伝子の発現は、直接または間接的に、殺虫剤の細胞内での生成および維持をもたらす。本発明の両毒素を発現するBt株を作製するために、接合移入および組換え移入を用いることができる。他の宿主生物体を毒素遺伝子の一方または両方で形質転換し、次に相乗効果を達成するために用いることもできる。適する微生物宿主、例えばシュードモナス(Pseudomonas)で、微生物を有害生物の位置へ施用することができ、そこでそれらは増殖して摂取される。この結果が有害生物の防除である。毒素遺伝子を受け入れる微生物は、毒素の活性を長引かせ、細胞を安定させる条件の下で処理することができる。毒性活性を保持する処理細胞は、次に標的有害生物の環境に施用することができる。態で環境へ施用される場合、特定の宿主微生物が用いられることが必須である。対象の1つまたは複数の作物の「植物圏」(葉面、葉圏、根圏および/または根面)を占めることが知られている微生物宿主が選択される。虫剤を発現する遺伝子の安定した維持および発現を提供するように、および、望ましくは環境中での分解および不活性化からの殺虫剤の向上した保護を提供するように選択される。根を囲む土)に生息することが知られている。属(Rhizobium)、ロドシュードモナス属(Rhodopseudomonas)、メチロフィリウス(Methylophilius)、アグロバクテナム属(Agrobactenum)、アセトバクター属(Acetobacter)、ラクトバシラス属(Lactobacillus)、アルトロバクター属(Arthrobacter)、アゾトバクター属(Azotobacter)、ロイコノストック属(Leuconostoc)およびアルカリゲネス属(Alcaligenes);真菌類、特に酵母、例えばサッカロミセス属(Saccharomyces)、クリプトコックス属(Cryptococcus)、クルイベロミセス属(Kluyveromyces)、スポロボロミセス属(Sporobolomyces)、ロドトルラ属(Rhodotorula)およびオーレオバシジウム属(Aureobasidium)などの微生物である。pollulans)などの植物圏酵母種である。色の着いた微生物が、特に興味深い。子を微生物宿主に導入するために、多種類の方法を利用できる。これらの方法は当業者に周知であり、例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第5,135,867号に記載されている。thuringiensis)または組換え体の細胞は、毒素活性を長引かせ、細胞を安定させるために処理することができる。形成される殺虫剤マイクロカプセルは、安定化された細胞構造の中にBt毒素(複数可)を含み、このマイクロカプセルが標的有害生物の環境へ施用されるときに毒素を保護する。乳動物などの高等生物体に有毒である物質を生成しない細胞に限定される。物質が不安定であるか、哺乳動物宿主への毒性のいかなる可能性も避けるために施用量が十分に低い場合、高等生物体にとって有毒である物質を生成する生物体が用いられてもよい。宿主としては、原核生物および真菌類などの下等真核生物が特に興味深い。0048処理時、細胞は通常、胞子の形態ではなくそのままの状態であり実質的に増殖形であるが、一部の例では胞子を利用してもよい。的または物理的な手段により、または化学的および/または物理的な手段の組合せによることができる。化学試薬の例は、ハロゲン化剤、特に原子番号17〜80のハロゲン原子である。詳しくは、穏和な条件の下で、かつ所望の結果を達成するのに十分な時間、ヨウ素を用いることができる。1967を参照);または細胞が宿主環境に施用されるときに細胞内で生成される毒素の活性を保存し、長引かせる物理的(熱)および化学的作用因子の組合せによる処理が含まれる。UV照射、凍結乾燥などである。許第4,695,455号および4,695,462号で開示され、それらは参照により本明細書に組み込まれる。0050細胞は、環境条件への抵抗性を増強する強化された構造安定性を一般に有する。殺虫剤がプロ型である場合、細胞処理の方法は、標的有害生物の病原体による殺虫剤のプロ型から成熟型へのプロセッシングを妨げないように選択されるべきである。ホルムアルデヒドはタンパク質を架橋し、ポリペプチド殺虫剤のプロ型のプロセッシングを妨げることができる。処理の方法は、毒素の生物学的利用能または生物活性の少なくとも実質的な部分を保持するべきである。殺虫剤の安定性および補助的遺伝子能力の存在が含まれる。果;殺滅の容易さおよび毒素を害さずに固着させること;などが含まれる。