それ以外は図1と同じ実験条件である。プラトーに達した(図6)。溶液の一部に沈殿が生じた。上記の条件検討の結果、最適な条件を組み合わせて、下記のような組成で検査キットを構成した。溶解し、低温保存した。10倍希釈した(最終的に100倍希釈)。加えて調製し、低温室で保存した。「固定液」の原理と組成の決定メチレンブルー生成反応は強酸性下で進行するが、メチレンブルーの発色度はpHや還元により強く影響を受ける。鮮明な発色を得るために、発色剤を添加した後、酸化剤およびpH緩衝剤を添加することが効果的であった。具体的には、酸化剤として過マンガン酸カリウム、pH緩衝剤として塩化アンモニウムおよびリン酸2水素カリウムからなる組成液(pH4.2)を濾紙に添加した。用いることによって、酸化剤とpH緩衝剤は、濾紙の中を速やかに展開・拡散させることができた。その際、「固定液」の滴下位置が重要であった。濾紙の中央付近に吸着させたサンプルに発色剤を同じく中央付近に滴下し、ついで「固定液」を濾紙の中央に当該「固定液」を滴下することによって、濾紙の持つクロマトグラフィー効果によって、余分となった発色剤および夾雑物質が濾紙の中央から周辺へと移動して、一方、反応後に生じたメチレンブルー色素は中央に残ったままとなった。発色剤の色である赤褐色は、周辺部分へと移動し、反応で生ずるメチレンブルーの色が、鮮明な青となって中央部に残り、反応結果を明確に判定することができるようになった。「固定液」は下記のように各溶液を混合して調製し、室温で保存した。塩化アンモニウム(関東化学;特級)溶液:3.3ml尚、(2)〜(4)の調製は次のようにした。