一般的に、健康的な細胞外環境を確実にするための好ましい方法は、老廃物を除去し栄養素を補給するために毎日新鮮な培地を細胞に供給することです。最近になって、培地緩衝化の進歩により、培地交換を必要とせずに、細胞密度が高い場合でもpHを72時間まで安定に保つことが可能になりました。Plusは、pHが安定され、培地交換週2回でも高品質な細胞が得られる)分化能の維持ES/iPS細胞の大事な要素の一つである「多能性」が維持されている事が重要です。培地によっては一定の方向への分化がしにくくなったり、一定の方向への分化がしやすくなったりするとも言われています。目的にもよりますが、基本的にはすべての方向への分化能を有していることが重要と考えます。その為には定期的に分化能が維持できているかを確認する必要があります。)に分化する能力を機能的に検証する方法は、EB法とテラトーマ形成試験が良く使用されています。(ST-05230)は、開発されました。(T)、CXCR4、SOX17)の抗体は、下記のテーブルをご参照ください。未分化の維持ES/iPS細胞はその細胞が未分化であるという事です。未分化マーカーがしっかりと確認できるかは重要になります。ES/iPS細胞は維持培養をしていても多少の分化はすると言われています。そこで重要なのは分化してしまった(もしくはしそうな)細胞を継代の際に持ち込まないことです。ES/iPS細胞は、糖脂質抗原SSEA3およびSSEA4、ならびに糖タンパク質抗原TRA-1-60およびTRA-1-81などの特定の細胞表面マーカーによって特徴付けられます。4、SOX2、およびNANOGもES/iPS細胞によって高度に発現され、「多能性ネットワーク」における重要な要素です。それらは未分化状態の維持および多能性幹細胞の生成において役割を確立しています。高品質の培養では、これらの細胞表面マーカーと細胞内マーカーはほぼすべての細胞で均一に発現しているはずです。ES/iPS細胞の未分化性を確認するために、良く用いられる未分化マーカー(OCT4/3、TRA、SSEA)の抗体は、下記のテーブルをご参照ください。ES/iPS細胞培養の基底膜選択ES/iPS細胞のフィーダーフリー培養において、培地と同様に重要なのがその基底膜(マトリックス)です。ES/iPS細胞培養においては、Matrigelが世界的に最も使用されておりますが、それ以外にもLamininやVitronectinといったものも使用されています。ここでもそれぞれの特性を把握した上で目的に応じた基底膜の選択が必要になります。LamininやVitronectinはメーカーによって状態が異なるものが多く販売されておりますので、多少の注意が必要です。Lamininはほぼ全ての細胞を囲む糖たんぱくの基底膜です。Matrigelはマウス抽出物のため、臨床応用の際に課題が残る場合があります。Vitronectinはその代替品として多く利用されています。様々なものがありますが、製品のよってXeno-Freeの環境も実現可能ES/iPS細胞の継代培養のポイントクランプ継代とシングルセル継代がある。分化やゲノム編集などの際にはシングルセル化する事が要求されることが多いが、通常のメンテナンス及び継代においてはクランプ継代が安全と言われているので、使い分けが必要である。シングルセル継代」を参照してください。物理的剥離に大別されます。物理的剥離の場合には分化した部分などを自分の眼で見ながら除去できるといった利点がありますが、手間がかかるといったdisadvantageも存在します。ここでは、非酵素的な剥離法を推奨します。ES/iPS細胞凍結のポイント目的のES/iPS細胞を樹立した後に、なるべく少ない継代でその細胞を凍結しておく必要があります。凍結用培地も様々なものが発売されているが、保存用培地はクランプ(細胞魂)での保存に適したもの、またはシングルセルでの保存に適したものなどがあるので、そのあたりも注意すべきです。凍結保存は、樹立および増殖後の幹細胞培養サイクルにおいてhPSCの品質に影響を与える最も重要なステップの1つです。高い細胞生存率と機能を維持するために、動物成分不含有definedな条件で、ES/iPS細胞を効率的に凍結保存することを推奨します。