G及びH:フローサイトメトリーによって分析した各サブセットにおける骨髄赤芽球(2日目)。フローサイトメトリー分析の代表的な結果をGに示した。示されたサブセットの細胞数の累積結果をHに示した。I:PBS又はCLEU処置マウスにおける骨髄の赤芽球成熟指数(EMI=III+IV/I+II)(2日目)。J:PBS又はCLEU処置マウスにおける骨髄のヘマトキシリン及びエオシン染色画像(写真)(2日目)。K:PBS又はCLEU処置マウスからの末梢血塗抹標本のMay-Giemsa染色画像(写真)(2日目)。L:ELISAによって分析した血清エリスロポエチン値。箱ひげ図に示されている各点は、個々のマウスサンプルを示す。アスタリスクは、*P<0.05、**P<0.01、及び***P<0.001として示す。図3は、CLEU処置は、骨髄赤芽球サブセットIIにおいてヘモグロビン関連遺伝子発現を強く誘発することを示す実験結果である。A:マウスにおけるPBS又はCLEU処置を受けた骨髄赤芽球サブセットIIのRNAシークエンシング分析結果(2日目)(CLEU;n=4、PBS;n=4)。(少なくとも2つの条件のうちの1つにおいて)FPKM>10及びCV<0.5で発現量の変動を認めた遺伝子(log2FC<0.5又はlog2FC>0.5、P<0.05)のみを点で表した。B:CLEU処置によって有意に誘発された遺伝子についてのDAVID6.8.を用いる遺伝子オントロジー(GO)分析。C:RNAシークエンシング発現レベルの確認のためにRT-PCRによって分析した示された遺伝子のRNA発現レベルを、Actbによって標準化した。D:PBS又はCLEU処置を用いて示された骨髄の赤芽球サブセットにおける示された遺伝子のRNA発現レベル(2日目)。発現レベルをActbによって標準化した。箱ひげ図に示されている各点は、個々のマウスサンプルを示す。***P<0.001として示す。図4は、エピジェネティックな脱メチル化は、赤芽球の最終成熟を誘発することを示す実験結果である。A:マウスにおけるCLEU又はPBS処置を受けた骨髄赤芽球サブセットIIのWGBS(全ゲノムバイサルファイトシークエンシング)結果(2日目)(CLEU;n=2、PBS;n=2)。B:発現された全ての遺伝子についての発現対プロモーターCpGメチル化の差異(FPKM>10及びCV<0.5の少なくとも1つの条件のうちの1つ)。相関(Cor)は-0.08であった。C:有意に発現が誘導された遺伝子についての発現対プロモーターCpGメチル化の差異。相関(Cor)は-0.11であった。D:マウスにおけるCLEU又はPBS処置を受けた骨髄赤芽球サブセットIIのウェスタンブロット(WB)結果を示す画像(写真)(2日目)。+臍帯血細胞のインビトロ赤血球分化。E:代表的なフローサイトメトリー分析の結果。F:示された細胞集団の累積結果。箱ひげ図に示されている各点は、技術的反復を示す。アスタリスクは、P<0.001として示す。図5は、SAM関連代謝物の存在量は、骨髄赤芽球の分化及び成熟中に変化しないことを示す実験結果である。A及びB:骨髄から選別された各サブセット細胞における示された代謝物の存在量は、マススペクトロメトリーを用いて分析された。A:シスタチオニン、B:ホモシステインである。箱ひげ図に示されている各点は、個々のマウスサンプルを示す。図6は、CLEU又はPBSで処置したマウスにおける完全な血球数を示す実験結果である。A~D:CLEU又はPBSで処置したマウスにおける完全な末梢血球数(CBC)(1日目~6日目)。