6/μL)D:ヘマトクリット(%)。E:PBS又はCLEU処置マウスにおける骨髄赤芽球サブセットIIから選別した有核細胞のMay-Giemsa染色画像(写真)(2日目)。F:図3Aに示すRNAシークエンシングデータの主要成分(PC)分析結果。含む遺伝子束を誘発することを示す実験結果である。A-C:CLEU処置によって有意に誘発された遺伝子についてのDAVID6.8.を用いる遺伝子オントロジー(GO)分析。A:DNA/核関連GOターム。B:クロマチン関連GOターム。C:RNA関連GOターム。D:示されたサンプル中の個々の遺伝子のRNAシークエンシング結果。各サンプル中の各遺伝子発現は、8サンプル中の各遺伝子のFPKM平均によって標準化した。E:PBS又はCLEU処理された骨髄の示された赤芽球サブセット中の個々の遺伝子のRNA発現レベル(2日目)。発現レベルを、Actbによって標準化した。箱ひげ図に示されている各点は、個々のマウスサンプルを示す。***P<0.001として示す。含む遺伝子束を誘発することを示す実験結果である。A:示されたサンプル中の示された遺伝子のRNAシークエンシング結果。各サンプル中の各遺伝子発現は、8サンプル中の各遺伝子のFPKM平均によって標準化した。B:RNAシークエンシング.発現レベルの確認のためにRT-PCRによって分析した示された遺伝子のRNA発現レベルを、Actbによって標準化した。箱ひげ図に示されている各点は、個々のマウスサンプルを示す。アスタリスクは、P<0.001として示す。C:示されたサンプル中のAlas2のRNAシークエンシング結果。各サンプル中の各遺伝子発現は、8サンプル中の各遺伝子のFPKM平均によって標準化した。図9は、ヒストンメチルトランスフェラーゼは、CLEU処置によりダウンレギュレートされたことを示す実験結果である。示されたサンプル中の示された遺伝子のRNAシークエンシング結果。各サンプル中の各遺伝子発現は、8サンプル中の各遺伝子のFPKM平均によって標準化した。図10は、PF9366による赤芽球成熟の促進を示す実験結果である。A及びB:フローサイトメトリーによって分析した各サブセットにおける骨髄赤芽球(2日目)。フローサイトメトリー分析の代表的な結果をAに示した。示されたサブセットの細胞数の累積結果をBに示した。C:赤芽球成熟指数を示す。*P<0.05として示す。図11は、メチオニンサイクルを示す模式図である。図12は、AKBAによる赤芽球成熟の促進を示す実験結果である。フローサイトメトリーによって分析した各サブセットにおける骨髄赤芽球(2日目)。フローサイトメトリー分析の代表的な結果を左図に示した。示されたサブセットの細胞数の累積結果を右図に示した。[0010]以下、本発明について説明する。[0011]本明細書中で使用する主な略号は以下のとおりである。67416-61-9)[0012](造血促進剤)本発明の一態様は、S-アデノシルメチオニン合成酵素阻害物質を含む、造血促進剤に関する。上述のとおり、本発明の造血促進剤は、S-アデノシルメチオニン合成酵素阻害物質による、造血促進作用を発揮するものである。[0013]本明細書における「S-アデノシルメチオニン合成酵素」とは、メチオニンとATPを基質としたS-アデノシルメチオニンの生合成を触媒する酵素であれば、特に限定されない。「S-アデノシルメチオニン合成酵素」は、一般には、「アデノシルメチオニン合成酵素」又は「メチオニンアデノシルトランスフェラーゼ」と称されることもあるが、本明細書中、いずれも同義である。[0014]S-アデノシルメチオニン合成酵素として、具体的には、例えば、MATI/III(活性サブユニットであるMAT1Aから構成される。一般的には、「MAT1A」と称されることもあるが、本明細書中、いずれも同義である)、MATII(活性サブユニットであるMAT2Aと調節サブユニットであるMAT2Bから構成される。一般的には、「MAT2A」、「MAT2」と称されることもあるが、本明細書中、いずれも同義である)等が挙げられる。S-アデノシルメチオニン合成酵素として、好ましくは、MAT2Aである。[0015]また、本明細書における「メチオニン」とは、特に記載した場合を除き、L-メチオニンをいう。哺乳動物においてS-アデノシルメチオニン合成酵素を阻害する作用を有するものであれば、特に限定されない。)においてS-アデノシルメチオニン合成酵素阻害作用を有する物質である。酵素阻害等であってよい。[0017]上述のとおり、S-アデノシルメチオニン合成酵素阻害効果と造血促進の関係に強い相関が確認されたため、S-アデノシルメチオニン合成酵素活性を指標として、種々のS-アデノシルメチオニン合成酵素阻害物質をスクリーニングし、同阻害物質を造血促進剤として適用することができる。S-アデノシルメチオニン合成酵素阻害物質は、MAT阻害効果を有する限り、特定の化合物には限定されず、低分子化合物、ペプチド、抗体、核酸(アンチセンスオリゴヌクレオチド、siRNAを含む)、エキス等であってもよい。S-アデノシルメチオニン合成酵素阻害物質は、S-アデノシルメチオニン合成酵素阻害物質として知られる公知化合物でもよいし、スクリーニングすることにより得られる化合物でもよい。具体的には、限定されないが、例えば、シクロロイシン及びその誘導体、4H-s-トリアゾロ[4,3-a][1,4]ベンゾジアゼピン誘導体、3-アセチル-11-ケト-β-ボスウェリック酸及びその誘導体、又はそれらの塩等が挙げられる。S-アデノシルメチオニン合成酵素阻害物質は、市販のものでもよく、通常の有機合成手法により合成されたものでもよい。S-アデノシルメチオニン合成酵素阻害物質は、一種を用いてもよく、二種以上を組み合わせて用いてもよい。[0018]シクロロイシンの誘導体としては、シクロロイシンから化学的に誘導される反応性誘導体であって、人体内においてシクロロイシンと同様の作用効果を示す化合物をいう。限定されないが、N-Boc-L-バリン、3-アミノプロピオン酸、3-(カルボキシメチル)-2-(2-ペンテニル)シクロペンタノン、D-プロリン、その他の非天然アミノ酸等が挙げられる。人体に対する副作用がないか又はほとんど認められない薬学的に非毒性の化合物が好ましい。誘導体は、シクロロイシンのプロドラッグを含むこともできる。4H-s-トリアゾロ[4,3-a][1,4]ベンゾジアゼピン誘導体としては、限定されないが、PF9366(2-(7-Chloro-5-phenyl-[1,2,4]triazolo[4,3-a]quinolin-1-yl)-N,N-dimethylethan-1-amine)(非特許文献3、4)等が挙げられる。2017;17(8):1153-1167等の文献に開示された化合物が挙げられる。Chem,2014,57:6083-6091に記載された2',6'-ジハロスチリルアニリン、ピリジン、またはピリミジン化合物、WO2012103457に記載された化合物などであってもよい。アミノ酸塩等が挙げられる。[0021]S-アデノシルメチオニン合成酵素阻害作用の測定は、公知の方法に基づいて行うことができる。インビトロの酵素活性測定系において、測定することができる。具体的には、S-アデノシルメチオニン合成酵素(以下、MAT2Aを例として説明する)がATP及びメチオニンからS-アデノシルメチオニンを合成するという反応(図11)を用いてMAT2A阻害活性を測定することができる。限定されないが、例えば、MAT2Aの酵素活性を上記反応後に残存するATP濃度のルシフェラーゼアッセイ系等の測定系により評価し、測定対象物質の阻害活性を測定する。阻害物質としてのポジティブコントロールは、例えばシクロロイシンを用いることができる。50が10mM以下、1mM以下、100μM以下又は10μM以下である物質を好ましく用いることができる。)の分化誘導を惹起することにより、S-アデノシルメチオニン合成酵素阻害物質の投与前に対し、投与後に生じる造血細胞数の増加、造血細胞数の増加に対応する数値の向上等が認められることを意味する。用いて測定することができる。造血促進作用を有するとは、限定されないが、コントロール(造血促進剤の不存在)に対して造血細胞数が、例えば1.2~50倍、好ましくは1.2~5倍、より好ましくは1.2~1.5倍増加することであり得る。[0024](医薬、飲食品)本発明のさらなる一態様は、本発明の造血促進剤を含む、貧血の予防又は治療のための医薬に関する。上述のとおり、本発明の造血促進剤は、造血前駆細胞からの造血細胞の分化誘導による造血促進作用を有するため、失血、造血機能の低下等に起因する疾患の予防又は治療のための医薬として好適に用いることができる。造血機能低下の改善のために(上記疾患の予防を含む)、日常的に摂取される飲食品、研究目的のための試薬等として好適に用いることができる。[0025]ここで、S-アデノシルメチオニン合成酵素阻害物質は、後記実施例に示すとおり、従来の造血促進剤であるエリスロポエチン製剤とは全く作用機序の異なる新たな造血促進剤となりうると考えられる。血液疾患による難治性貧血は多くがエリスロポエチン製剤不応性であり、S-アデノシルメチオニン合成酵素阻害により赤血球造血を促す本知見は、輸血依存に伴う合併症や社会的コストの大幅な削減につながる事が期待される。[0027]本発明における医薬は、公知の製剤学的方法により、様々な医薬製剤の形態に製剤化することができる。投与形態に好適な製剤に製剤化して使用することができる。と適宜組み合わせることができる。[0028]また、本発明における飲食品は、公知の飲食品の製造方法により、様々な飲食品の形態に製造することができる。本発明の医薬及び飲食品においては、貧血の予防や治療に用いられる公知の医薬成分を併用してもよい。公知の他の薬学的有効成分をも含有させることができる。飲食品は、ヒトを含む哺乳動物を対象として使用することができるが、ヒト以外の動物としては特に制限はなく、種々の家畜、家禽、ペット、実験用動物などを対象とすることができる。種類(医薬、飲食品等)等に応じて、適宜選択される。飲食品の投与量又は摂取量は、限定されないが、造血促進剤量として、例えば0.01mg/kg体重~1000mg/kg体重である。飲食品を、対象に投与又は摂取させることを含む、対象における造血促進方法に関する。飲食品を、対象に投与又は摂取させることを含む、対象における貧血の予防又は治療方法に関する。[0032](製造方法)本発明のさらなる一形態は、造血前駆細胞を、本発明の造血促進剤存在下で培養する工程を含む、造血細胞の製造方法に関する。同方法は、換言すれば、造血前駆細胞を、本発明の造血促進剤存在下で培養する工程を含む、造血細胞の分化誘導方法である。造血前駆細胞としては、動物由来のものに限られず、iPS細胞等から分化誘導させて得られたもの等も用いることができる。ある培養方法であれば、特に制限されず、常法の細胞の培養方法により、行うことができる。F-12、IMDM等が挙げられる。培養液には通常の細胞培養で使用される添加剤等を、本発明の効果を妨げない限り、特に限定されず使用することができる。血清や、血清代替品を使用することが好ましい。添加剤としてさらに、2-メルカプトエタノール、ピルビン酸ナトリウム、アミノ酸、抗生物質、N-アセチルシステイン等が挙げられる。本発明の造血促進剤を添加する。応じて適宜変更でき、限定されないが、通常1~10000μg/mL、好ましくは1~5000ng/mL程度である。[0036]培養に使用するインキュベーターは、一般に動物細胞培養に使用されるものであればよい。培養条件は、例えば37°C~39°C、5%炭酸ガス95%空気の気相で、高湿度条件等が挙げられ、このような条件を設定可能なインキュベーターを使用する。[0037]培養期間中、2~4日に一度、培養液の一部を新鮮なものに交換することが好ましい。培養期間は、使用する動物種及び採取した細胞の状態等により変更可能であるが、一般的に数日から1週間程度である。[0038]培養中あるいは培養後に、造血細胞が分化誘導されていることを、血算測定、フローサイトメトリー等により確認することも好ましい。造血細胞の分化誘導の程度に応じて培養期間を変えることも可能である。[0039](スクリーニング方法)本発明の更なる一形態は、S-アデノシルメチオニン合成酵素阻害剤の候補物質の存在下又は非存在下でS-アデノシルメチオニン合成酵素活性を測定する工程、及び、酵素阻害剤の候補物質の存在下のS-アデノシルメチオニン合成酵素活性の測定値が、非存在下の測定値よりも低い候補物質を選択する工程、を含む、S-アデノシルメチオニン合成酵素阻害剤のスクリーニング方法に関する。[0040]また、本発明の更なる一形態は、造血促進剤の候補物質の存在下又は非存在下でS-アデノシルメチオニン合成酵素活性を測定する工程、及び、造血促進剤の候補物質の存在下のS-アデノシルメチオニン合成酵素活性の測定値が、非存在下の測定値よりも低い候補物質を選択する工程、を含む、造血促進剤のスクリーニング方法に関する。上述のとおり、S-アデノシルメチオニン合成酵素阻害効果と造血促進の関係に強い相関が得られたことが確認されたため、S-アデノシルメチオニン合成酵素活性を指標として、造血促進剤をスクリーニングすることができる。「S-アデノシルメチオニン合成酵素阻害剤(又は造血促進剤)の候補物質の存在下又は非存在下でS-アデノシルメチオニン合成酵素活性を測定する工程」は、S-アデノシルメチオニン合成酵素阻害剤(又は造血促進剤)の候補物質の存在下又は非存在下でS-アデノシルメチオニン合成酵素を発現させた後、S-アデノシルメチオニン合成酵素発現量やS-アデノシルメチオニン合成酵素活性を測定する態様であってもよい。[0041]ここで、「S-アデノシルメチオニン合成酵素阻害剤(又は造血促進剤)の候補物質の存在下のS-アデノシルメチオニン合成酵素活性の測定値が、非存在下の測定値よりも低い」とは、限定されないが、例えば、S-アデノシルメチオニン合成酵素阻害剤(又は造血促進剤)の候補物質の存在下のS-アデノシルメチオニン合成酵素活性の測定値が、非存在下の測定値の50%以下、40%以下、30%以下、20%以下又は10%以下であってよい。[0042]S-アデノシルメチオニン合成酵素活性を測定する方法としては、例えば、インビトロの酵素活性測定系において、測定することができる。具体的には、S-アデノシルメチオニン合成酵素(以下、MAT2Aを例として説明する)がATP及びメチオニンからS-アデノシルメチオニンを合成するという反応(図11)を用いてMAT2A阻害物質を同定することができる。限定されないが、例えば、造血促進剤の候補物質添加後のマウスリコンビナントMAT2Aの酵素活性を上記反応後に残存するATP濃度のルシフェラーゼアッセイ系等の測定系により評価し、候補物質の阻害活性を評価する。本方法でMAT2A阻害作用を有する化合物をハイスループットスクリーニング系で同定することができる。[0043]MAT2Aはメチオニン及びATPよりS-アデノシルメチオニンを合成するため、その阻害効果は試験管内のATP残存量をATP依存性酵素であるルシフェラーゼ活性により測定する事で評価可能である。plateでのハイスループットスクリーニングは広く行われているため、スクリーニング系は迅速に確立可能であると考えられる。阻害物質としてのポジティブコントロールは、例えばシクロロイシン、PF9366、3-アセチル-11-ケト-β-ボスウェリック酸を用いることができる。スクリーニングによって得られた造血促進剤について、造血促進活性及び安全性を確認することも好ましい。造血促進活性の測定方法としては、例えば、上述の造血促進効果の測定方法を適用することができる。[0044](評価方法)本発明の更なる一形態は、造血促進剤の評価物質の存在下でS-アデノシルメチオニン合成酵素活性を測定する工程、及び、造血促進剤の評価物質の存在下のS-アデノシルメチオニン合成酵素活性の測定値を指標として、造血促進効果を評価する工程、を含む、造血促進剤の評価方法に関する。上述のとおり、S-アデノシルメチオニン合成酵素阻害効果と造血促進の関係に強い相関が得られることが確認されたため、S-アデノシルメチオニン合成酵素阻害活性を指標として、造血促進剤の評価物質の造血促進効果の有無、又は程度を評価することが可能である。[0045]S-アデノシルメチオニン合成酵素活性の測定方法としては、本発明のスクリーニング方法において、上記した方法を適用することができる。阻害物質としてのポジティブコントロールは、例えばシクロロイシン、PF9366、3-アセチル-11-ケト-β-ボスウェリック酸を用いることができる。[0046]以下、実施例により、本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はその要旨を超えない限り、これらの実施例に限定されるものではない。Inc.から購入した。8~14週齢のマウスを分析した。CLEU処置(50mg/身体)のために、シクロロイシン(CLEU)(Sigma)をPBS(50mg/ml)で希釈してCLEU溶液を調製した後、1mlのCLEU溶液を腹腔内投与した。PBS溶液を腹腔内投与した。LC-662)を用いて計数した。動物実験委員会により承認を受けた。[0048](フローサイトメトリー及び細胞選別)通常の方法で、BM細胞及び脾臓細胞を採取し、特異的な抗体の組み合わせで染色して、赤芽球及び成熟細胞を同定した。抗体、及びストレプトアビジン-ペリジニンクロロフィルタンパク質-シアニン5.5で視覚化。本研究で用いた抗体は以下の通りであった:抗CD3e(145-2C11),抗CD4(GK1.5又はRM4.5),抗CD8a(53-6.7),抗Gr-1(RB6-8C5),抗B220(RA3-6B2),抗Ter-119(TER-119),抗CD71(R17217又はC2)。DAPI(Sigma)染色を行って、分析のために死細胞を除外した。AriaII(BD)を用いて製造業者のプロトコールに従って行い、得られたデータをFlowJoソフトウェア(TreeStar)を用いて分析した。[0049](RNAシークエンシングデータサンプリング及び分析)全RNAを、RNeasyキット(Qiagen)を用いて骨髄サブセットII赤芽球の選別サンプルから単離した(PBS;n=4、CLEU;n=4)。Kit(Illumina)を使用して製造業者の指示書に従って、ライブラリー調製のための投与量として使用した。v2(Illumina)を用いて行った。bowtie2バージョン2.2.5及びtophatバージョン2.1.0を使用することにより、シークエンシングされたリードを参照マウスゲノム(mm9)にマッピングし、次いで、cufflinksバージョン2.2.1を使用して、転写物の量を推定した。遺伝子の発現レベルを、百万のマッピングされたリード当たりの転写物のキロベース当たりの断片(FPKM)の平均値によって標準化した。2FC>0.5、条件間でP<0.05)のみをさらなる分析に使用した。6.8ウェブツールを使用した。[0050](全ゲノムバイサルファイトシークエンシング(WGBS)データのサンプリング及び分析)フェノール/クロロホルム抽出法を用いて、骨髄サブセットII赤芽球の選別サンプルからDNAを単離した(PBS;n=2、CLEU;n=2)。DNAクオリティコントロール、バイサルファイト変換、ライブラリー調製、ハイスループットシークエンシング、及びデータマッピングを、Macrogen,Incで実施した。Methylationライブラリー調製ガイド)に従いライブラリー調製に使用し、次いでハイスループットシークエンシングをHiseqX(Illumina)によって行った。シークエンシング後、生の配列リードをクオリティに基づいてフィルタリングし、アダプター配列をトリミングする。残ったリードを、SOAP(ショートオリゴアライメントプログラム)に基づくBSMAPを用いて参照ゲノム(mm9)にマッピングする。SAMBAMBAバージョン0.5.9を使用してインデックス及びPCR複製物を除去して、修飾したリードだけを選別する。全ての単一シトシンのメチル化率を、BSMAPバージョン2.87を用いるマッピング結果から計算する。>=5のリードを有するシトシン位置のみを、さらなる分析に使用した。+臍帯血細胞を、関東甲信越ブロック血液センター(日本,東京)から入手した。研究のための臍帯血サンプルの使用は、東北大学の倫理委員会によって承認された。この方法の技術的詳細は以前に記載されている。5/ml)を分化培地で7日間培養した。CLEU処置では、濃度は2.5mg/mlであった。XFヒト(MACS)であった。SFEM(STEMCELL)であった。[0052]本発明者等は、以下のように考えた。エピジェネティックな修飾は、血球の発生において中心的な役割を果たす。赤芽球の成熟は、赤芽球が核の凝集及び除核を含む著しい形態変化を経る動的過程である。これまでに、赤芽球の成熟の間、全体的なDNA脱メチル化及び翻訳後のヒストン修飾が起こっていることが明らかになり、適切なエピジェネティックな修飾が赤芽球成熟に不可欠である。DNA及びヒストンのメチル化のためには、有力なメチル供与体としてS-アデノシルメチオニン(SAM)が必要である。したがって、メチオニン及びATPからSAMを触媒するSAM及びメチオニンアデノシルトランスフェラーゼ(MAT)は、赤芽球の成熟に重要な役割を果たす。この過程におけるこれらの因子の機能についてはほとんど知られていない。したがって、これらの因子の機能を明らかにすべく、本発明者等は以下の実験を行った。[0053]<実施例1>骨髄(BM)における赤芽球成熟中のSAM関連代謝物の存在量の変化を調べた。質量分析により、メチオニン及び他の関連アミノ酸は特に差がなかったが、赤芽球成熟中にSAMの存在量は徐々に減少していたことが明らかになった(図1のA)。したがって、SAM合成は、赤芽球成熟中に減少すると考えられた(図1のB)。一貫して、肝臓以外の組織中のMATの主要アイソザイムであるMAT2A及びその補因子MAT2Bは、赤芽球成熟中に減少した(図1のC)。したがって、SAM合成は、赤芽球成熟中に負に調節される。[0054]<実施例2>次に、赤血球形成におけるSAMの重要性を明らかにするために、マウスをMAT阻害剤シクロロイシン(CLEU;50mg/身体)で処置した。CLEUは、赤芽球におけるSAMの存在量を実際に減少させることができた(図2のA)。白血球数及び血小板数には特に一貫した差はなかったが、驚いたことに、CLEU処置によるヘモグロビン値、赤血球、及びヘマトクリットの顕著な増加があった(図2のB、図6のA~D)。BM細胞数は有意に増加し、BMの色はCLEU処置により赤色になった(図2のC~D)。フローサイトメトリー分析により、この表現型の原因は、BM中の赤血球系細胞が特に増加したことであることが明らかになった(図2のE~F)。Ter119/CD71二重染色により、赤芽球がサブセットIIから増加し始め、赤芽球成熟がCLEU処置によって有意にアップレギュレートされることが明らかになった(図2のG~I)。BM及び末梢血の病理所見もこれらの知見を裏付ける(図2のJ~K)。興味深いことに、血清エリスロポエチン値は、CLEU処置によって有意にダウンレギュレートされ(図2のL)、これはネガティブフィードバックに起因する可能性がある。まとめると、CLEU処置は、BMにおける赤芽球成熟をエリスロポイエチン非依存的様式で有意に増加させ、SAM合成及びエリスロポエチンを減少させる。[0055]さらに、マウスにおけるMAT阻害剤PF9366(PF)投与の影響を検討した。PF9366を40μl/40ml(水)にして飲水ボトルに入れた(0h)。PBSに溶解して腹腔内投与する。2日目(48h)時点で解析した。赤芽球がサブセットIIIから増加し始め、赤芽球成熟がPF処置によって有意にアップレギュレートされることが明らかになった(図10のA~B)。赤芽球成熟指数においても有意差が認められた(図10のC)。[0056]<実施例3>CLEU処置により誘発される赤芽球成熟の機序を明らかにするために、BM赤芽球サブセットIIのRNAシークエンシング分析を行った。両方の条件からの有核細胞では特に形態学的相違がないが(図6のE)、著しい遺伝子発現の変化が起こり(図6のF)、興味深いことに、個別に制御される遺伝子のほとんどがダウンレギュレートされた(図3のA)。これらのダウンレギュレートされた遺伝子の遺伝子オントロジー解析により、DNA/核関連遺伝子及び/又はクロマチン関連遺伝子が有意に多く含まれていたことが明らかになり(図7のA~B)、これらの遺伝子変化は、赤血球芽が最終的な除核のための最終成熟中に経る動的クロマチンリモデリングに関与することが示唆される。RNA関連遺伝子もまた、これらのダウンレギュレートされた遺伝子に多く含まれ(図4のC)、RNAプロセシングが赤芽球成熟において重要な役割を果たすことが示唆される。Gata1、Tal1、及びKlf1などの赤血球形成に重要な転写因子も有意にダウンレギュレートされ(図7のD)、これは、最終的な赤芽球の成熟を支配する他の重要な因子が存在する可能性があることを示している。72個の遺伝子が、有意にアップレギュレートされた遺伝子として同定された(図8のA)。グロビン遺伝子は、CLEU処置した赤芽球において最も大量に発現された(図3のA)。なく、細胞外マトリックス及び免疫系関連遺伝子も有意に多く含まれていたことが明らかになり(図3のB)、これらの因子の寄与が有効な赤芽球成熟に必要であったことが示唆される。検証解析により、ヘモグロビン関連遺伝子だけでなく、CD163(ヘモグロビン-ハプトグロビン複合体の高親和性スカベンジャー受容体)及びApoeも有意にアップレギュレートされたことが確認された(図3のC)。赤血球形成におけるそれらの寄与的役割を示す以前の報告によると、赤芽球成熟中のヘムの適切な使用及び/又は脂質膜合成には、CD163及び/又はApoeのアップレギュレーションが不可欠である。造血幹/前駆細胞の分化における重要な転写因子として知られているMyb及びCited2の発現ならびにリンカーヒストン成分H1f0の発現も、CLEU処置によって有意にアップレギュレートされ(図8のB)、最終的な赤芽球の成熟における明らかにされていない機能を示唆する。興味深いことに、サブセットIIのヘモグロビン関連遺伝子発現は、サブセットIIIの発現と比較してもCLEU処置によって有意にアップレギュレートされ、これらの遺伝子には、PBSとCLEU処理の間の発現レベルの差が比較的小さいために上記で同定されたアップレギュレートされた遺伝子に含まれていないAlas2も含まれ(図8のC)、これらの遺伝子のアップレギュレーションが赤芽球成熟の自然経過よりも強力であることを示した。グロビン遺伝子の異常がサラセミアなどで赤芽球の成熟欠陥を引き起こすという事実を考慮すると、これらの遺伝子のアップレギュレーションは、他方で、最終的な赤芽球の成熟の原動力となり得る。[0057]<実施例4>上記で観察された全体的な転写変化は、細胞内SAM存在量の減少によって引き起こされるエピジェネティックな修飾変化に由来する可能性があるので(図2のA)、誘発された赤芽球成熟中のDNAメチル化変化を明らかにするために全ゲノムバイサルファイトシークエンシング(WGBS)を行った。CpGメチル化を減少させ(図4のA)、CpGメチル化の減少は高度にメチル化されたゲノム領域でより顕著であった(図4のA、赤色ボックス)。高度にメチル化されたゲノム領域は、以前に観察されたように、赤芽球の最終成熟中の脱メチル化に対してより感受性である可能性があった。DNAメチル化が遺伝子発現を抑制するという考えと一致して、RNA発現の差異は、遺伝子プロモーターCpGメチル化とわずかだが、負の相関があった(図4のB)。これらの相関は、β-グロビン遺伝子及びHmox1などの有意にアップレギュレートされた遺伝子においても観察された(図4のC)。典型的なヒストンメチル化マーカーであるH3K9のトリメチル化は、CLEU処置によって減少した(図4のD)。いくつかのヒストンメチルトランスフェラーゼ発現レベルもCLEU処置によって有意にダウンレギュレートされたことを考慮すると(図9)、SAMの減少及びヒストンメチルトランスフェラーゼの抑制もまた、全体的な転写変化に寄与した可能性があった。+細胞からの成熟も誘発することができた(図4のE~G)。この観察は、赤芽球の成熟に対するCLEUの直接的効果及びこの機序が、ヒト赤血球形成に適合し得ることを示す。[0059]<実施例6>マウスをMAT阻害剤3-アセチル-11-ケト-β-ボスウェリック酸(AKBA;2mg/身体)を0時間、24時間後に腹腔内投与し、48時間後に解析した。Ter119/CD71二重染色により、赤芽球成熟がAKBA処置によって有意にアップレギュレートされることが明らかになった(図12)。CLEU、PF-9366に加えてAKBAでも赤血球成熟が誘導され構造の異なる3剤で同様の結果を得たことからMAT2A阻害剤が赤血球造血を促進することが示唆された。[0060]まとめると、本研究では、赤芽球の最終成熟はエピジェネティックな修飾を伴う細胞内SAMレベルによって制御されることが明らかになった。この系を利用することにより、エリスロポエチン非依存的様式でCLEU等のS-アデノシルメチオニン合成酵素阻害物質の処置により赤血球形成を誘発することが可能である。これらの発見は、貧血疾患を克服するための赤血球形成に関する将来の研究のための新しい道を開く。[0061]以上のとおり、MAT2A阻害剤が従来の造血促進剤では治療が困難であった血液疾患に伴う貧血の新たな治療薬となりうる事が示された。安全性を検証することで、さらなる造血促進剤が得られる。[0062]本発明は医薬や飲食品等に有用な造血促進剤に関する。それに伴う鉄過剰症患者数の減少及び輸血医療に伴う社会的コストの削減につながると期待される。ライセンスをご希望の方、特許の内容に興味を持たれた方は、下記「問合せ先」までご連絡ください。同じキーワードでJ-STORE内を検索することが出来ます。