坐剤は直腸内投与される。皮膚外用剤は、患部に塗布、貼付又はスプレーされる。よって異なり、一概には決定できないが、経口投与の場合には、例えば1日あたり1μg~10g、例えば1日あたり0.01~2000mgの有効成分を投与すればよい。注射剤の場合には、例えば1日あたり0.1μg~1g、例えば1日あたり0.001~200mgの有効成分を投与すればよい。坐剤の場合には、例えば1日あたり1μg~10g、例えば1日あたり0.01~2000mgの有効成分を投与すればよい。皮膚外用剤の場合には、例えば1日あたり1μg~10g、例えば1日あたり0.01~2000mgの有効成分を投与すればよい。lactate(プレニルアミン乳酸)、Bromperidol(ブロムペリドール)、Convolamine(コンボルバミン)、Miglustat(ミグルスタット)、及び前記一般式(1)~(5)で表される化合物からなる群から選ばれる化合物、その薬学的に許容される塩、又はそれらの溶媒和物を提供する。lactate(プレニルアミン乳酸)、Bromperidol(ブロムペリドール)、Convolamine(コンボルバミン)、Miglustat(ミグルスタット)、及び前記一般式(1)~(5)で表される化合物からなる群から選ばれる化合物、その薬学的に許容される塩、又はそれらの溶媒和物の有効量を、予防又は治療を必要とする患者に投与することを含む、GM1ガングリオシドーシスの予防又は治療方法を提供する。lactate(プレニルアミン乳酸)、Bromperidol(ブロムペリドール)、Convolamine(コンボルバミン)、Miglustat(ミグルスタット)、及び前記一般式(1)~(5)で表される化合物からなる群から選ばれる化合物、その薬学的に許容される塩、又はそれらの溶媒和物の使用を提供する。[0084]以下、実験例により本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの例によって限定されるものではない。樹立]倫理委員会に承認されたプロトコールにより、インフォームドコンセントの下、GM1ガングリオシドーシス患者及び健常者の皮膚生検の外植片から線維芽細胞を樹立した。患者及び健常者からの皮膚試料を細かく刻み、10%ウシ胎児血清(FBS)を添加したDMEM培地で培養した。線維芽細胞が出現したことを確認した後、初期化遺伝子を導入するために線維芽細胞を増殖させた。(2009)に記載される方法により、樹立したヒト由来線維芽細胞からiPS細胞を樹立した。infection)3にて、細胞に感染させた。(2009)に記載される方法に従い作製した。5個の細胞をMMC処理したMEFフィーダー細胞上に播種した。翌日、ヒトiPS細胞培地に置き換え、感染30日後まで培養を継続し、コロニーを回収した。(bFGF,和光,日本)を添加したDMEM/F12(シグマ)を含有するヒトiPS培地を用いて、マイトマイシンC(MMC)処理したMEFフィーダー細胞上で、ヒトiPS細胞を維持した。5個/ウェルの密度で播種し、ヒトiPS培地で培養した。Scientific)に入れ替えた。7)まで培養を行い、NSCを誘導した。Scientific)に細胞を懸濁後、Geltrexにてコーティングした100mm細胞培養用シャーレへ播種した。この時点の細胞をP0NSC(継代数ゼロのNSC)とし、以後、適宜この培地にてNSCを増やし、実験に使用した。BSA溶液にてブロッキングを行った。その後、FITC-CTB(GM1ガングリオシドを特異的に染色する試薬)と抗Nestin抗体(神経幹細胞に特異的に発現している分子:神経幹細胞のマーカー)を用いて、多重染色を行った。Nestin染色においては、健常者、GM患者、いずれのNSCにおいても強い染色が認められ、神経幹細胞への分化が確認された(図1,下段)。FITC-CTBにおいては,健常者ではほとんど染色が認められなかったが、GM1患者においては,強い染色が認められた(図1,上段)。GM1が蓄積していることが確認された。[0090][実験例3]<イメージングサイトメーターを用いた薬剤スクリーニングによる化合物の評価>以下の要領で、GM1ガングリオシドーシス治療剤のスクリーニングを行った。4/ウェルの密度で播種した。その後、既知薬剤ライブラリーの化合物を、各々のウェルに最終濃度5μMになるように添加し、72時間培養を行った。33342(細胞の核を染色する試薬)、CellMask(細胞膜を染色する試薬)を使い、蛍光染色した。プロトコールを用いて、細胞当たりのGM1ガングリオシド量を算出した。表1に検討を行った化合物の結果を示す。[0091][表1][0092]検討を行った化合物のうち、GM1抑制化合物としてヒットしたいくつかの化合物における薬剤処理後の神経幹細胞の染色像を、図2、図3に示す。ヒットした化合物においては,薬剤を添加していない例(図2b・下段,図3e・下段)と比較して、CTBの蛍光が低下しており、GM1の蓄積が抑制されていることが確認された(図2cならびにd,図3fからg、いずれも下段)。(6mg/kg)を、1日2回、腹腔内に投与した。陽性対象として、薬液にPBSを用い、同様の操作を行った。陰性対象として、薬液にPBS、マウスとしてβ-Gal(+/-)のものを用いて、同様の操作を行った。その後、マウス脳をOCTコンパウンドにて包埋し、5μmの厚さで切片を作製した。33342にて蛍光染色を行った。LC/MSにて解析し、脳内GM1を定量した。蛍光染色の結果を図4に示す。[0094]陰性対象では、CTBの蛍光がほとんど見られなかった(図4a・上段)。陽性対象では、CTBの蛍光が強く、GM1の蓄積が確認された(図4b・上段)。一方で、GM1抑制化合物による処理を行ったいずれにおいても、CTBの蛍光は強く抑制されており、GM1の蓄積が抑制されていることが確認された(図4c,d,いずれも上段)。GM1の定量結果を図5に示す。[0095]陰性対象と比較して、陽性対象では、GM1ガングリオシド量の増加が確認された。薬液処理したいずれにおいても、陽性対象と比べて、GM1ガングリオシド量が低下していることが確認された。[0096][実験例5]<GM1抑制化合物添加によるオートファジーへの影響>ガングリオシドの合成及び分解過程を図6に示す。GM1、GM2、GM3の各ガングリオシドは、単糖及びN-アセチルノイラミン酸の連続的付加により生成される。ガングリオシドの分解は、ライソゾーム中のグリコシダーゼが段階的に作用することにより行われる。図6における(1)~(7)は、各反応において作用する酵素を示している。β-GLUの発現が候補化合物による処理により増加することを示している。Amodiaquine又はThiethylperanzineを5μMになるようにそれぞれ添加し、72時間培養を行った。培養後、RNAを単離し、各酵素遺伝子の発現量の解析を行った。図7中、-は、無添加サンプルを示し、amoは、Amodiaquine添加サンプルを示し、thieは、Thiethylperanzine添加サンプルを示す。本結果により、GM1抑制化合物の作用により、ライソゾーム中におけるガングリオシドの分解を促進し、オートファジーを活性化させることが示唆された。[0097]本発明により、新たなGM1ガングリオシドーシス予防剤又は治療剤を提供することができる。ライセンスをご希望の方、特許の内容に興味を持たれた方は、下記「問合せ先」まで直接ご連絡ください。同じキーワードでJ-STORE内を検索することが出来ます。