mg/mlにPBS、pH7.5で希釈)を容積の1倍量流し込み、室温で30分間静置した。3)を容積の6倍量流し込み、室温で30分間静置し、抗体の吸着していないガラス表面をBSAによってブロッキングした。DTT)を容積の3倍量流した。cellに、容積の1.5倍量を流し込み、室温で15分間静置した。bufferを容積の3倍量流し込んだ。DTT)を容積の1.5倍量流し込んだ。CanonFD-M52)でビデオに録画した。μm以上の距離にわたって滑らかに動くアクチンフィラメントの移動を測定することによって算出した。corallina)のミオシンXIのモータードメインを用いた。vitro運動アッセイの概念図を図2に、結果を表1に示す。958-964に従った。様々なアクチン濃度においてミオシンが1秒間あたりにATPを加水分解して生じた無機リン酸の濃度をマラカイトグリーンにより測定した。Acid)で反応を停止させた。X-100]と混合し、30°Cの水槽中で25分間静置して発色させた。nmでの吸光度を測定し、その変化から反応液のリン酸化濃度の変化を計算し、ミオシンのアクチン活性化ATP加水分解活性を測定した。様々なアクチン濃度におけるATP加水分解反応を測定し、ミカエリス・メンテン式によりアクチン活性化ATP加水分解反応のVmaxを求めた。μm/秒)と比較して、約3倍速いことが明らかとなった。distachyon)のミオシンXI-Bのモータードメインの運動速度と比べて約8倍速いことが明らかになった(表1)。表1から、ATPase活性はミオシンの高速化にともなって正の相関性を有する(増加傾向にある)ことが明らかとなった。2.1を用いて、配列番号14、16、18、24、28~33で示されるミオシンモータードメインについて分子系統樹を作成した。その結果を図3に示す。2.1を用いてアライメント解析を行った。その結果を図4に示す。corallina)、はシャジクモ属の他のミオシンXI遺伝子とは異なる独立のグループに属することが明らかとなった。australis)からクローニングしたミオシンXI(3種類)は、ループ2領域がEEPKQGGKGGGKSSFSSIG(配列番号36)若しくはEEPKQGGGKGGSKSSFSSIG(配列番号37)又はこれらの配列の複数のアミノ酸、好ましくは1~6個のアミノ酸が、欠失、置換及び/又は付加されたアミノ酸配列を有する。distachyon)の表現型を検証した。対照として、ミナトカモジグサ(野生型)、及びベクターのみを導入したミナトカモジグサ(mock)を用いた。distachyon)の未熟胚から誘導したカルスにアグロバクテリウムを用いて導入し、形質転換されたトランスジェニック植物を、ハイグロマイシン耐性に基づいて選択した。638-649に基づいた。μg/mLのハイブロマイシン、0.2%のジェランガム)に得られた第1世代のT1種子を別々に播種し、その後、4°Cで3から5日間置いた。低温処理後、25°Cで3日間及び5日間、16時間/日の日照下で栽培した。[0148]次に、茎の伸長、葉の枚数及び穂の数を調べるために各植物を土壌(プロミックスBXマイコライズ)に移植し、25°Cで約80日間、20時間/日の日照下で栽培した。[0149]T0カルル選抜時にハイグロマイシンで選抜を行ったが、T1はハイグロマイシンによる成長阻害を考慮し、ハイグロマイシンの選抜は行なわず遺伝子導入されている植物体はリアルタイムPCRにより確認した。図5は、キメラミオシンXI遺伝子を導入したT1植物体の写真を示す。図6は、キメラミオシンXI遺伝子を導入した植物(T1)の成長終了後の乾燥重量を野生型の植物及びベクター遺伝子のみ導入された植物体の乾燥重量と比べたグラフである。乾燥重量は野生型の植物及びベクター遺伝子のみ導入された植物体よりも顕著に増えている。図7A~Cは、キメラミオシンXI遺伝子を導入した植物(T1)のの成長終了後のそれぞれ穂の数、茎の数、および葉の枚数を野生型の植物及びベクター遺伝子のみ導入された植物体の穂の数、茎の数、および葉の枚数と比べたグラフである。キメラミオシンXI遺伝子導入植物体では、穂の数、茎の数、および葉の枚数の増大が観察され、特に穂の数と葉の枚数の増加が顕著である。以上のように野生型の植物及びベクターのみが導入された植物よりも、キメラミオシンXI遺伝子が導入されている植物(T1)では成長が促進していることが示された。単子葉植物で成長促進及び大型化したため、単子葉植物と同様に、双子葉植物でも成長促進及び大型化できることが示唆された。配列解析の結果から、新高速型では、ループ2領域に共通配列を有することが明らかとなった。このループ2領域が植物の成長促進及び大型化に寄与していることが示された。thaliana)の表現型を検証した。対照として、シロイヌナズナ(野生型)を用いた。braunii)のミオシンXIのモータードメインに変更したキメラミオシンを作製した。配列番号38にシロイヌナズナのミオシンの核酸配列を示し、配列番号39にアミノ酸配列を示す。配列番号40は、作製したキメラミオシンの核酸配列を示し、配列番号41はそのアミノ酸配列を示す。構築したキメラ遺伝子を、シロイヌナズナのxi-2ノックアウト株にアグロバクテリウムを用いて導入し、形質転換されたトランスジェニック植物を、ハイグロマイシン耐性に基づいて選択した。以上の方法は、花序浸し法,モデル植物の実験プロトコール改訂3版,149-154に基づいた。μg/mLのハイブロマイシン、0.2%のジェランガム)に得られた第1世代のT1種子を別々に播種し、その後、4°Cで3から5日間置いた。その後、ホモ接合型の第3世代のT3種子を得て、低温処理後、25°Cで24日間、16時間/日の日照下で栽培した。生育24日目のT3種子由来の植物体を真上から写真撮影した。Jの解析機能(Measure)を用いて囲んだロゼット葉の面積(ピクセル単位)を定量した。その後スケールバーのピクセルあたりの面積によって実際の面積に換算し、直径を算出した。図8は、野生型シロイヌナズナ及びトランスジェニックシロイヌナズナの表現型を示す。J(NIH)の円形ツールでロゼット葉全体を囲んで、ロゼット葉の面積(ピクセル単位)を定量した様子を示す。図10は、ロゼット葉の面積(ピクセル単位)を定量しロゼット葉の直径を算出した結果を示す。図8及び10の結果から、トランスジェニックシロイヌナズナ(T3)は、野生型シロイヌナズナと比較して、大型化しており、地上部が約20%増大していた。本発明のキメラミオシンは、単子葉植物と同様に、双子葉植物でも成長促進及び大型化できることが示された。植物性の食物の増産、タバコ等の嗜好性植物等の増産、ケシ、イチイ又はトウシキミ等の医薬化合物又はその原料の抽出・単離用の原料植物の増産、バイオマス燃料の増産、及び国土の緑化や林業の促進等をもたらすことができる。)のご相談を承っております。お気軽にご連絡ください。同じキーワードでJ-STORE内を検索することが出来ます。