本発明は、IGF−I:FN、IGF−II:FN、EGF:FN、bFGF:FN、KGF:FN、またはIGF−I:IGFBP:FN複合体などの増殖因子とフィブロネクチンとを含む複合体のアゴニストまたはアンタゴニストを同定、スクリーニング、設計またはそうでなければ作出するための、本発明の単離されたタンパク質複合体(合成キメラタンパク質を含む)の使用を意図する。このような薬剤は「ミメティック(mimetic)」であり得る。「ミメティック」とは、本明細書において、タンパク質またはペプチドの特定の機能的領域を模倣するように設計された分子を指して用いられ、その範囲内に、当技術分野で十分に理解されている「アゴニスト」、「類似体」および「アンタゴニスト」という用語を含む。FN受容体の結合を模倣するアゴニストが作出される。このような分子は、創傷治癒および皮膚再生などに必要とされるような細胞遊走の刺激剤としての有用性を持ち得る。インテグリン受容体の結合を防止または阻害するアンタゴニストが作出される。このような分子は細胞遊走および/または細胞増殖の阻害剤として(それにより有用な抗腫瘍薬となる)、また、異常な細胞増殖から起こる乾癬および肥厚性瘢痕形成などの皮膚障害の処置において有用性を持ち得る。上記ミメティック、アゴニスト、アンタゴニスト、および類似体は、所望の生物活性および半減期を備えたペプチド、ポリペプチドまたはその他の有機分子、好ましくは、小有機分子であり得る。【0142】コンピュータによる構造データベース検索は、ミメティックを同定するための手順としての利用が増えてきている。原則としてミメティックを同定するのに好適といえるデータベース検索法は、国際公開第94/18232号(HIV抗原ミメティックの作出を対象とする)、米国特許第5,752,019号および同第97/41526号(EPOミメティックの同定を対象とする)に見出せる。他の方法には、分子の相互作用を同定する様々な生物物理学的技術が含まれる。これらは、例えばIGF−I:FN、IGF−II:FN、EGF:FN、bFGF:FN、KGF:FN、またはIGF−IGFBP−FN複合体の形成に影響を及ぼすかどうかに従って候補分子をスクリーニングすることを考慮したものである。1997)の第20章に示されている。当業者は以下の非限定例を参照すれば、本発明をより容易に理解し、実施することができる。(実施例)実施例1IGF−I、IGFBPおよびFNは細胞遊走を刺激するIGFBP−3または−5の存在下、予め結合させたFN(1μg/mL)および漸増濃度のIGF−Iで被覆したトランスウェル(Transwell)(登録商標)にMCF−10A細胞を播種した。これらの細胞を5時間遊走させた。その後、各処理に応答して膜を通り抜ける細胞の数を、FN単独(SFM)で遊走した細胞に対するパーセンテージとして表した。3回の実験(各反復実験において4ウェルで処理を試験した)からMCF−10データをプールし、図2に示す。エラーバーはSEMを示す。IGF−I:FN、IGF−I:IGFBP−3:FNおよびIGF−I:IGFBP−5:FNは、FN単独の対照ウェルよりも有意に高い遊走を刺激することができた(応答はFN対照ウェルの、それぞれ153.7+/−7.3%、192.5+/−6.8%および187.5+/−6.5%)(p<0.05)。IGF−I:IGFBP−3:FNおよびIGF−I:IGFBP−5:FN処置に対するMCF7−10A細胞の応答は、FNとIGFBPまたはIGF−Iのいずれか一方とのみを含む場合に得られた応答よりも有意に高かった(p<0.05)。このデータは、トリマーIGF−I:IGFBP−3/5:FN複合体が存在する場合に最大応答が生じることを示す。活性化することを示唆する。実施例2合成キメラフィブロネクチン:増殖因子タンパク質ここでは、FN:増殖因子(例えば、IGF−I、IGF−II、EGF、bFGFおよびKGF)キメラの形態の本発明の合成キメラタンパク質の例を示す。合成キメラタンパク質は、増殖因子と融合したあらゆる全長または末端切断型FN(アミノ酸残基の修飾を含むまたは含まない)を含む。FNおよび増殖因子は種々のペプチドリンカーと融合されていてもされていなくてもよい。結合することができるIGF−I、IGF−II、EGF、bFGFもしくはKGFタンパク質のドメインと結合している一連のキメラ発現構築物を設計する。Ser)4(配列番号10)リンカーなどのリンカーを介して、IGF−I、IGF−II、EGF、bFGFまたはKGF配列に連結される。III型ドメイン10[リンカー]増殖因子(IGF−I、IGF−II、EGF、bFGFまたはKGF)が挙げられる。frugiperda)での発現のためにコドンを至適化することができる。次に、そのコード配列を、キメラの精製を助けるためにポリヒスチジン親和性タグを組み込んだ発現ベクター(例えば、pIB/V5−His発現ベクター(Invitrogen))にクローニングすることができる。PCRによって挿入することができる。リンカー配列のC末端へのAsnの付加を用いれば、Asn−Glyモチーフ(ここで、Glyは増殖因子タンパク質の最初のアミノ酸である)を作出することができる。このモチーフは、ヒドロキシルアミンにより誘導される、これらのキメラからの増殖因子タンパク質の切断を可能とする。結合することができるIGF−I、IGF−II、EGF、bFGFもしくはKGFタンパク質のドメインに連結された種々の長さのFNタンパク質をコードする。全ての構築物のDNA配列を確認して、目的DNA配列の忠実度が維持されていることを確かめることができる。【0150】このpIB/V5−Hisベクター中のクローンを用いてSf9昆虫細胞をトランスフェクションすることができ、免疫ブロット法により評価すると、馴化培地中に一時的に発現された分泌タンパク質が検出される。簡単に述べると、サンプルを還元条件下、SDS−PAGEで分析し、セミドライ転写法を用いてタンパク質をニトロセルロース膜に転写する。この膜をポリクローナル抗FN抗体で調べた後、増強化学発光を用いて標的タンパク質種を可視化する。【0151】キメラタンパク質の精製は、製造者の説明書に従って行うNi−NTAスーパーフローアガロース(QIAGEN、オーストラリア)アフィニティークロマトグラフィーに基づく。精製プロセス中、SDS−PAGE、およびポリクローナル抗FN抗体(Calbiochem)を用いたウエスタンブロット解析によってキメラタンパク質をモニタリングする。細胞の遊走および/または増殖に対する合成キメラタンパク質の効果を調べるためには、MCF−10A細胞、MCF−7細胞、ならびに単離されたヒト上皮細胞、ケラチノサイトおよび線維芽細胞などの細胞を使用することができる。細胞遊走はトランスウェル(Transwell)(登録商標)遊走アッセイを用いて評価することができ、細胞増殖は当業者に周知の細胞増殖アッセイを用いて測定することができる。本明細書を通じ、その目的は、いずれか1つの実施形態または特定の特徴の集合体に本発明を限定することなく、本発明の好ましい実施形態を示すことであった。よって、当業者には、本開示に鑑みて、本発明の範囲から逸脱することなく、例示された特定の実施形態に種々の改変および変更を行うことができることが理解されるであろう。本明細書に参照されているコンピュータプログラム、アルゴリズム、特許および科学文献は全て、参照により本明細書に組み入れる。請求項1〜13のいずれか一項に記載の単離されたタンパク質複合体をコードする、単離された核酸。細胞の遊走および増殖のうち少なくともいずれか一方を促進する方法であって、請求項1〜13のいずれか一項に記載の単離されたタンパク質複合体を、細胞により発現された増殖因子受容体およびインテグリン受容体の双方と結合させることにより、前記細胞の遊走および増殖のうち少なくともいずれか一方を誘導し、増大させ、または他の態様で促進するステップを含む方法。situで細胞の遊走および増殖のうち少なくともいずれか一方を促進するために動物に投与される、請求項21に記載の方法。situでの創傷治癒を助長するための、請求項21に記載の方法。前記動物がヒトである、請求項22または23に記載の方法。vitroで1つ以上の細胞または組織に投与される、請求項21に記載の方法。ekouhou.net。