鋳型として逆転写酵素を用いて合成する。cDNA)を合成させる。RNA鎖部分をRNaseHで除去したのちに、適当なプライマーを使うか最初に合成したDNA鎖の末端部分の折り返しを利用し、除去したmRNAに相当する側のDNA鎖を合成させて二本鎖のcDNAを得る。このcDNA分子を適当なベクターに組み込んで宿主細胞内で増殖させたもの。この一連の過程をcDNAクローニングとよび、できたクローンのセットをcDNAライブラリとよぶ。DNA一般には、ある一本鎖核酸に対して、AとT、GとCが対応し、2本鎖構造をとるDNA。Acid相補的DNAともいう。遺伝子はアデニン(A)、グアニン(G)、シトシン(C)、チミン(T)の4つの塩基が連なったDNAからできているが、この中で遺伝子として働くのはごく一部(約5%)である。タンパク質合成においてDNAの遺伝子として働く部分(情報)だけを写し取ったmRNAが現れ、この情報をもとにタンパク質が作られる。mRNAの情報があれば人工的にタンパク質合成ができる可能性があるが、実験上このmRNAは不安定で取り扱いにくい。そのためmRNAに逆転写酵素を加えることにより、相補的な一本鎖DNAを作り出すことができた。この人工的に作られたDNAをcDNAとよぶ。