Abstract生物時計の中で約24時間周期の概日リズムを発振する概日時計は、脳内の時計ニューロンが構成するペースメーカーによって形成される。本研究では、生物時計の分子機構解明を目的として、昆虫生物時計で重要な働きをもつと考えられる神経ペプチド・PDFに対する核内受容体探索を実施する。本年度は、フタホシコオロギの大量飼育を実施するのに並行して、予備的にショウジョウバエについても検討した。[^3H]Nle^<15>-PDFをトレーサーとして用いてショウジョウバエ頭部にホモジネートに対する飽和結合試験を行なったところ、明らかな特異的結合が観測された。スキャッチャード解析の結果、[^3H]Nle^<15>-PDFの受容体に対する解離定数K_Dは35.6nMと見積もられた。この結果より、昆虫脳膜画分にPDF受容体が存在することが初めて明らかにされた。コオロギPERIODについては全構造の解析に成功し、PDFの機能的共役分子である可能性の高いTIMELESSについても構造解析がほぼ完成した。タンパク質発現のため、まず、ショウジョウバエにおいてCLOCKとCYCLE(1-434)の発現に取組んだ。大腸菌で発現し、これを精製して単品を得たが、時計タンパク質が発現によって単離、精製されたのはこれが初めての例である。表面プラズモン共鳴解析によってCYCLE、CLOCK(1-434)がヘテロダイマーを形成することが確認された。興味深いことに、CYCLEがホモダイマーを形成することが示された。PDFはいずれのタンパク質とも相互作用しないことが判明し、これらは共役分子でないことが確認された。