q24時間も、胃潰瘍の発症を予防するために子馬に投与した。q24時間の追加治療は改善には関係しなかった。3日目には、子馬は、頭蓋及び近位脊髄のコンピュータ断層撮影のために通常の麻酔を受けたが、普通であった。脳脊髄液試料を腰仙間隙から得たが、細胞学的評価は通常であり、通常のタンパク質濃度を有していた。入院して4日目には、子馬は右側に頭を傾けたが、入院して5日目には平静を維持した。5日目には硫酸マグネシウム療法を中止したが、残りの治療計画は変更しなかった。6日目には、子馬は2回、短い一般的発作を起こした。IVでコントロールした。発作の間、子馬は元気で熱がなく、そして授乳を受けた。入院して7日目には、子馬は熱が出て(40°C)、粘液膿性の鼻汁を排出し、聴診すると偶発的なカチカチという音及びゼーゼーという音が拡散する、進行性頻脈を発症していた。先の7日間、熱、及び咳がいくつかの他の雌馬、及び新生馬ケア・ユニット中の子馬で認められた。q8時間に変更し、子馬をポリイオン性液体で処理した。子馬は未だ授乳を受けていた。偶発的肺音が悪化した。この時点での胸部X線撮影は悪く、気管支間質性パターンを示した。q12時間及び酸素の鼻腔吸入を入院の9及び10日目に開始した。mmHg)及び低酸素飽和度(76%)を特定した。次に、子馬を機械的人工呼吸器に入れた。人工呼吸器の支援及び全身性非経口栄養を、動脈血ガス値が100%酸素で標準化する時期である48時間継続した。抗菌療法を以前のように継続した。人工呼吸器の支援を除いた13日目の負荷試験では、子馬は重度の呼吸困難及びチアノーゼを発症し、馬主の希望により安楽死させた。pneumoniae)及び大腸菌を増殖した。NJ)及びインフルエンザウイルスの存在を試験するための鼻汁試料からのウイルス単離を行った。mlのウイルス輸送培地に置いた。鼻汁スワブ試料を入院8日目に回収した。ウイルス単離及びウイルス配列解析を含んだ。巨視的な死後の検査は、重度の拡散性の間質性肺炎、及び下垂体の周囲の脳の腹側尾表面上の硬膜下血腫と同定した。他の器官では敗血症又は病原体の証拠はなかた。軽い単核浸潤は下気道を覆い、場合により鬱血及び滲出に関連する肺胞破壊領域を覆った。脳組織の評価は、心室系の軽い拡張と共に、拡散性の大脳、特に小脳の白質液胞形成を示した。複数の分画について、ミエリンの存在についてクレシルバイオレット染色を行った。同時に行った、年齢が一致する染色済の対照由来の組織と比べると、脳及び脊髄のミエリンを示す以外は小さかった。中枢神経系における追加の病理組織学的異常は、小脳内に分子層が明らかに存在しなかった。DNAのリアルタイムPCR試験は陰性であった。鼻汁中のインフルエンザウイルスの存在は最初に、陽性Directigen試験によって確認した。1995及びChambers他,1994)。鼻スワブ輸送培地試料も、ニワトリ幼虫形成卵の尿膜空洞、及び24ウェル細胞培養プレート内で増殖するMadin-Darbyイヌ腎(MDCK)に接種した。インフルエンザウイルスの増殖に一致する細胞病原性効果を接種MDCK細胞で観察し、ニワトリの赤血球の血球凝集を引き起こした薬剤を接種卵から単離した(Palmar他,1975)。Kawaoka博士より頂戴した)、陽性(ブタインフルエンザウイルス接種)及び陰性(モック接種)対照細胞と共に、接種細胞の免疫細胞化学染色(Landolt他,2003)によって確認した。DC)を使用した系統発生解析によって、東アメリカ系H3ウマインフルエンザウイルスに由来することが判った。非構造的タンパク質遺伝子(配列決定された544ヌクレオチド)及びNP遺伝子(配列決定された885ヌクレオチド)のヌクレオチド配列部分に関する同様の解析により、東アメリカ系ウマインフルエンザウイルスであるとの当該ウイルスの同定を確認した。ここで、このウイルスは、A/Equine/Wisconsin/1-03と同定された。図1は、当該ウイルスの各遺伝子のコード領域の配列を提供する。【0083】インフルエンザウイルスの存在は、子馬の肺及び他の組織でも評価した。68D2による免疫組織化学は、凍結及びホルマリン固定肺組織中に、拡散性で、幅広く分散した領域(主に、気道の周囲に存在する)のインフルエンザウイルスNP発現を示した。NP発現は、他の内臓又は中枢神経系では見られなかった。加えて、インフルエンザウイルスを、凍結肺組織試料からMDCK細胞から単離した(そして、免疫細胞化学及びHA遺伝子シークエンスによって確認した)。びARDSは、細菌感染及びウイルス感染を含む様々な可能性のある原因を有するより年上の子馬の死亡率の高い呼吸器疾患である(Lakritz,1993)。重度の頻呼吸によって特徴付けられる。Lakritz,1993)。体温調節コントロールによる強力な治療にもかかわらず、一般的に30%を越える死亡率を有する呼吸器疾患のカテゴリーに入る。1993)、新生馬におけるこの疾患の発現兆候についての文献にはほとんど情報がない。1つの報告は、A型ウマインフルエンザが単離された7日齢の子馬の気管支間質性肺炎を記載している(Britton他,2002);この子馬は本明細書に記載の子馬に似ている。【0085】この試験で詳述した子馬は、2-又は3-週間、発熱し、粘液膿性の鼻汁を出し及び咳をした様々な入院ウマの内の1頭であった。高度な危険性を有する新生馬を含む、他の疾患ウマの臨床的兆候は、熱及び食欲不振の軽い全身的症状を除いて、一般的に上気道に限定される。この子馬の重度の肺不全の原因は不明である。治療は、強力な免疫抑制剤であるドキサメタソン及び診断法のための一般的麻酔を含み、これらのいずれも子馬に肺炎を発症しやすくした。呼吸器疾患の発症及び進行に対する子馬の神経的疾患の影響も、不明である。ミエリン減少及び小脳内の分子層の不在は、任意の特別な臨床的診断又は組織病理学的診断とは適合しない。子馬は呼吸の中枢制御を損なっていた。それは、呼吸の制御に関連する脳部位(橋及び延髄)は拡散性空砲形成を示し、ミエリン染色を減少したからである。その結果生じる任意の換気障害は、入院後数日までに換気機能の正常化を生じる最終事象であったかもしれない。脳の腹側尾部分で観察される限局性出血は軽く、おそらく、子馬が経験した発作の1つにおける損傷の結果であった。雌馬を、過去2年間、インフルエンザに対して半年度に殺傷産物でワクチン接種し、妊娠後期に追加ワクチン接種した。子馬では十分に受動伝達される事実を考慮すると、これらの抗体は明らかに子馬を十分に保護しなかった。子馬から得られた単離物の系統発生解析は、それをH3N8サブタイプとして特徴付け、妊娠後期の雌馬をワクチン接種するために使用した市販の産物は、同一のサブタイプのインフルエンザウイルス株を含有していた。これは、受動伝達が、ある環境下での自然感染に対して保護することを保証できない、ことを示唆する。ワクチン効力のこのような欠如は、あるH3N8ウイルス株での自然感染から起こる臨床的呼吸器疾患に対して大人を保護するための、商業的に入手できるH7N7及びH3N8ウマインフルエンザウイルスワクチンの不具合について記載する、Mumford他(2003)の近年の研究と一致する。死亡時に所定の場所で抗菌剤投薬計画に耐性を示す2つの細菌種の気管を経た回収は、インフルエンザが死の唯一の原因であったという結論を混乱させる。死後検査は、肺血症について何ら巨視的又は組織病理学的証拠は同定されず、インフルエンザウイルスといくつかの細菌性病原体との相乗作用により、死亡率が増加する肺炎を引き起こす(McCullers他,2003;Simonsen,1999)。この子馬の呼吸器不全のインフルエンザウイルスから起こる強力な病原体寄与の証拠を提供する。3で感染させ、最高10時間までインキュベートした。Carolina/44173/00,A/Swine/Minnesota/593/99,A/Swine/Ontario/00130/97)及び2種のウマインフルエンザウイルス(A/Equine/Kentucky/81及びA/Equine/Kentucky/91)。免疫細胞化学及びフローサイトメトリー分析のために、実験の最後には、細胞をホルマリンで固定した。TCID50/ml)まで増殖した。TCID50/ml)又は(A/Equine/Kentucky/91に関しては)全く、ウイルス増殖が観察できなかった。TCID50/ml)で増殖した。この結果は、試験した全てのA型インフルエンザウイルスがイヌの一次気道上皮細胞に感染することができる、ことを証明した。ウイルスの感染性及び複製性は、系統依存性が強かった。【0089】Dubovi他(2004)は、フロリダの競争用ケネルのグレイハウンド犬の咳及び発熱によって特徴付けられる、重度の呼吸器疾患の再発性発症を報告した。(HRT-18)における、ウイルス単離試験に供した(Dubovi他,2004)。MDCK細胞の細胞病理学は、犬の1頭由来の肺ホモジネートの第一通過に注目し、トリプシンなしで培養した細胞の次の通過に関する細胞病理学の喪失は、培養上清中の赤血球凝集活性の存在と合わせて、インフルエンザウイルスの存在を示唆した(Dubovi他,2004)。このウイルスは、マトリックスイ遺伝子に特異的なプライマーを用いるPCRにより、インフルエンザウイルスと最初に同定した。イヌインフルエンザイウイルスはA/Canine/Florida/43/04株と指定された。2004発症中、競争用グレイハウンドにおいて、致死性の出血性肺炎の原因となる因果関係薬剤である可能性が最も高く、及びこれは、イヌの呼吸器疾患に関連するウマインフルエンザウイルスの最初の報告である、と結論した(Dubovi他(2004)。イヌ単離物のHAタンパク質は、A/Equine/Wisconsin/1/03株とは6アミノ酸が相違する。全ての刊行物、特許及び特許出願は、本明細書に参考として援用されている。先の明細書では、本発明をその好ましいある実施態様と関連付けて記載し、多くの詳細を例証のために記載してきたが、本発明が追加の実施態様を許容し、本明細書に記載のある詳細が本発明の基本的原則を逸脱することなく、かなり変動することができる、ことは当業者であれば明らかであろう。配列番号1を有するHA、又は位置78のバリンもしくは位置159のアルギニンを有さない配列番号1と実質的に同一のアミノ酸配列を有するHAを含む、単離H3ウマインフルエンザウイルス。以下の少なくとも1つを含む、請求項1記載の単離ウマインフルエンザウイルス:配列番号2又は配列番号2と実質的に同一のアミノ酸配列を有するNA、配列番号3又は配列番号3と実質的に同一のアミノ酸配列を有するPB1、配列番号4又は配列番号4と実質的に同一のアミノ酸配列を有するPB2、配列番号5又は配列番号5と実質的に同一のアミノ酸配列を有するPA、配列番号6又は配列番号6と実質的に同一のアミノ酸配列を有するNP、配列番号7又は配列番号7と実質的に同一のアミノ酸配列を有するM1、配列番号17又は配列番号17と実質的に同一のアミノ酸配列を有するM2、配列番号8又は配列番号8と実質的に同一のアミノ酸配列を有するNS1、及び/又は配列番号18又は配列番号18と実質的に同一のアミノ酸配列を有するNS2。配列番号1〜8、17又は18の少なくとも1つをコードする核酸配列に対応するネガティブ鎖核酸を含む、請求項1記載の単離ウマインフルエンザウイルス。配列番号1を有するHA及び配列番号2を有するNAを有する、請求項1記載の単離ウマインフルエンザウイルス。配列番号1と実質的に同一のアミノ酸配列を有するインフルエンザウイルスHA、配列番号2と実質的に同一のアミノ酸配列を有するインフルエンザウイルスNA、配列番号3と実質的に同一のアミノ酸配列を有するインフルエンザウイルスPB1、配列番号4と実質的に同一のアミノ酸配列を有するインフルエンザウイルスPB2、配列番号5と実質的に同一のアミノ酸配列を有するインフルエンザウイルスPA、配列番号6と実質的に同一のアミノ酸配列を有するインフルエンザウイルスNP、配列番号7と実質的に同一のアミノ酸配列を有するインフルエンザウイルスM1、配列番号17と実質的に同一のアミノ酸配列を有するインフルエンザウイルスM2、配列番号8と実質的に同一のアミノ酸配列を有するインフルエンザウイルスNS1、配列番号18と実質的に同一のアミノ酸配列を有するインフルエンザウイルスNS2の核酸部分、又は当該核酸部分の相補鎖を含む単離ポリヌクレオチドであって、HAの当該核酸部分が位置78のバリン又は位置159のアルギニンをコードしない、前記ポリヌクレオチド。前記核酸部分が、配列番号9〜16の1つと実質的に同一の核酸配列、又はその相補鎖を有する、請求項5記載の単離ポリヌクレオチド。作動可能に結合したプロモーター及び/又は転写終結配列を更に含む、請求項5記載の単離ポリヌクレオチド。前記核酸部分がセンス方向にある、請求項7記載のポリヌクレオチド。前記核酸部分がアンチセンス方向にある、請求項7記載のポリヌクレオチド。前記核酸部分の末端に5'及び3'インフルエンザウイルス配列を含む、請求項5記載のポリヌクレオチド。配列番号1〜8又は17〜18の1つと実質的に同一のアミノ酸配列を有する単離ポリペプチドであって、配列番号1と実質的に同一のアミノ酸配列を有する前記ポリペプチドが位置78のバリン又は位置159のアルギニンを有さない、前記ポリペプチド。各ベクターが異なった核酸部分を有する2以上のベクターを含む、請求項12記載の組成物。【請求項14】HA、NA、PB1、PB2、PA、NP、M又は場合によりM1及び/又はM2、及びNS又は場合によりNS1及び/又はNS2のためのベクターを含む、請求項12記載の組成物。【請求項15】HA、NA、PB1、PB2、PA、NP、M1、M2、NS1又はNS2の1つを除いて全部についての機能性インフルエンザウイルスタンパク質の読み取り枠を有するベクターを含む、請求項12記載の組成物。所定のDNAを含有するベクターを更に含む、請求項12記載の組成物。所定のDNAを含有する前記ベクターが、インフルエンザウイルスベクターである、請求項16記載の組成物。各ベクターが、インフルエンザウイルスベクターである、請求項14又は15の組成物。所定のDNAを含有するベクターを更に含む、請求項18記載の組成物。所定のDNAを含有する前記ベクターが、インフルエンザウイルスベクターである、請求項19記載の組成物。所定の前記DNAが、病原体の免疫原性ポリペプチドもしくはペプチド又は治療的ポリペプチドもしくはペプチドをコードする読み取り枠を含む、請求項16又は19記載の組成物。家禽又は哺乳動物細胞を請求項1のウイルスと接触させるステップを含む、インフルエンザウイルスの製造法。前記ウイルスを単離するステップを更に含む、請求項22記載の製造法。請求項23記載の方法によって得られる単離ウイルス。請求項1又は24記載のウイルスに感染した細胞。請求項1又は24記載のウイルスの有効量を哺乳動物に投与するステップを含む、インフルエンザに対して哺乳動物を免疫する方法。前記哺乳動物がイヌ又はウマである、請求項26記載の方法。【請求項28】インフルエンザ感染に対して予防的又は治療的反応を誘導するために十分な量で請求項1又は24記載のウイルスを含むワクチン。異なった単離インフルエンザウイルスを更に含む、請求項28記載のワクチン。前記単離ウマインフルエンザウイルスが弱毒化ウイルスである、請求項28記載のワクチン。前記単離ウマインフルエンザウイルスが組換えウイルスである、請求項28記載のワクチン。分子的手段により改変されている、請求項28記載のワクチン。【請求項33】アジュバントを更に含む、請求項28記載のワクチン。薬学的に許容される担体を更に含む、請求項28記載のワクチン。前記担体が、鼻腔内又は筋肉内投与に好適である、請求項34記載のワクチン。凍結乾燥形態である、請求項28記載のワクチン。前記細胞がイヌ細胞である、請求項39記載の方法。ekouhou.net。