Abstract本研究では、グリア細胞を標的とした新しい見地からパーキンソン病の新たな治療法の開発に迫ることを目的としている。当該年度は、視床下核のアストロサイトと神経細胞活動の関係解明を目指した。transactivator(tTA)をノックインしたマウスと、Tet-onシステムによりチャネルロドプシン(Ch2)を発現するマウスを導入した。この2系統の交配により、青光刺激によりドパミン神経が活動しYFPを発現するマウスを作成した。このマウスと既に系統維持している、転写因子Olig2プロモータ下にGFPを発現するマウス(Oligo2-CreER/ROSA26-loxP-stop-loxP-GAP43EGFP)との交配を行っている。発現グリア前駆細胞の分化系譜をGFPにより追うことができる。現在、4系統TGマウスの作成を行っている。パーキンソン病モデルを作成すれば視床下核の神経活動亢進モデルにもなる。ドパミン神経毒である6OHDA片側投与によるパーキンソン病モデルマウスの作成も可能となっている。解析をスタートさせ、その裏付けを行っている。tetO-C128S)と、転写因子Olig2プロモータ下にGFPを発するダブルTGマウス(Oligo2-CreER/ROSA26-loxP-stop-loxP-GAP43EGFP)との交配を行い、4系統のTGマウスを作製している。解析に充分量のレポーター蛋白(GFP,YFP)を発現させるために、ROSA26-loxP-stop-loxP-GAP43EGFP、tetO-C128Sのローカスはホモ化する必要性があることが分かった。Activity1.前述した4系統TGマウスが完成すれば、青色プローブを線条体部にインジェクションし、光刺激によりドパミン神経活動を亢進させる。活動亢進した細胞はYFPでマーキングされている。発現グリア前駆細胞にGFPを発現させる。神経活動後の経時的なGFP発現細胞の解析により、グリア前駆細胞の分化系譜をGFPにより追うことができる。神経活動とグリア(おもにアストロサイト)への分化誘導の関連性を明らかにする。2.青色刺激とは別に、ドパミン神経毒である6OHDA片側投与によるパーキンソン病モデルマウスをOligo2-CreER/ROSA26-loxP-stop-loxP-GAP43EGFPマウスで作成する。パーキンソン病モデルでは視床下核の神経活動が亢進している。グルタミン酸作動性神経でも神経活動とアストロサイトの分化は関連するのか、明らかにする。3.アストロサイト毒のインジェクションによりアストロサイトの枯渇に成功した。このことが神経細胞活動にどう影響するのか、電気生理的な解析を行う。Funding1.TGマウスの飼育、系統維持にかかる費用が継続的に必要である。生理学研究所)への出張を必要とする。ため、抗体等の試薬が必要である。