¥8,200試験成績書SDSダウンロードご購入方法お問い合わせ性質タンパク質のチオール基修飾は、代表的な翻訳後修飾の一つであり、生体内のレドックス変化に応答して生じる。チオール基の翻訳後修飾によるタンパク質の機能制御を理解するためには、個々のチオール基の酸化還元状態を検出することが必要不可欠となる。チオール基の酸化還元状態を検出する手法の一つに、チオール基と反応する高分子マレイミド試薬を用いてゲル電気泳動によるゲルシフトアッセイ法が利用されているが、この手法を用いることでタンパク質中のフリーのチオール基数を可視化することができる。kDa増加したバンドとして分離・検出される。従来よりPEG鎖の片方の末端にマレイミド基を有するPEG-マレイミド試薬が、上記のゲルシフトアッセイ法に用いられているが、ウエスタンブロットを行う際、PEG鎖が結合したタンパク質は結合していないタンパク質と比べて、ゲルからメンブレンへの転写効率が低くなる、また、抗体認識能が低くなる、という課題がある。Cleavable)部位を導入した試薬で、電気泳動後のゲルにUV光を照射するとPEG鎖がラベル化されたタンパク質からPEG鎖が切り離される。これによって、このタンパク質はウエスタンブロットの操作においてPEG鎖の影響を受けることなく解析することができる。mg小分け品であることから、細胞や植物など試料に応じて試薬の使用量を設定することができる。技術情報PEG-PCMalの構造PEG-PCMalによるチオールの修飾および分離・転写イメージPEG鎖の片方にマレイミド基を有するPEG-PCMal(上図)は、タンパク質中のチオール基と結合する。PEG-PCMalでラベル化したタンパク質を電気泳動した後、ゲルにUV光を照射するとPEG鎖がタンパク質からPEG鎖が切り離され、ウエスタンブロットの転写効率を損なわず解析することができる(下図)。kDa増加したバンドとして分離される。マウス肝臓に含まれるチオレドキシン検出マウス肝臓に含まれるチオレドキシンを検出するため、組織を凍結粉砕しPEG-PCMalを用いてSH基にラベル化した。4に相当するバンドを検出された。detectionHeLa細胞に細胞溶解液で調製したPEG-PCMal溶液を加えて、細胞中のタンパク質をラベル化した。ラベル化後のサンプルをゲル電気泳動した後、ゲルにUV光を照射して、ウエスタンブロット解析を行なった。シロイヌナズナの葉に含まれる光応答性タンパク質(ATP合成酵素γサブユニット)のレドックス状態の解析シロイヌナズナの葉を用いてPEG-PCMalで試料中のタンパク質をラベル化して後処理をした後、電気泳動を行った。電気泳動後のゲルに光切断のためUV光を照射してウエスタンブロットにより解析した。acid)[写真左]と比較して、PEG-PCMalで標識したタンパク質はバンドシフトが大きく、より分離されることを確認した[写真右]。SB12)染色試薬:CBBラベル化されたタンパク質の電気泳動のバンドが、チオール数に応じてより高分子側にシフトすることが確認された。表示する種々の試料中に含まれるタンパク質のチオール解析に適用される。汎用されているPEG-Maleimideを用いた参考文献を各試料ごとに示した。2017.よくある質問QPEG-PCMalの光安定性を教えて下さい。A光による分解が起こります。蛍光灯下で遮光しない状態(アルミラミジップからPEG-PCMalの入ったチューブを取り出した状態)では数時間(5時間程度)安定ですが、使用しない時はアルミラミジップに入れて保管してください。Solutionとした場合の安定性を教えて下さい。室温で2週間程度安定ですが、遮光なしの状態では数時間経過すると徐々に劣化します。DMSO溶液を-20°C(冷凍)で保存した場合は、約1ヶ月間安定です。Qラベル化から電気泳動の工程は遮光して行う必要はありますか?APEG-PCMalは、アルミラミジップから取り出した後も蛍光灯下で数時間安定なため、ラベル化から電気泳動の工程で遮光をする必要はありません。使用しなかった試薬を保存する場合は、速やかにアルミラミジップに戻して保存してください。直射日光等の強い光が当たる場所での使用は避けて下さい。Q検出可能なタンパク質中のチオール数の目安はありますか。encephalopathy)に適用した実績があります(写真右)。写真中)の測定例は以下の通りです。タンパク質中に10個以上のチオールが存在する場合、電気泳動のバンドが複雑になることで解析が困難になる可能性があるため、タンパク質中のチオール数として1~9個の範囲を目安に使用することをお勧めします。SB12)染色試薬:CBBQ検出実績のあるサンプルを教えて下さい。SH基数5)の精製タンパク質の検出実績があります。細胞(HeLa)や植物(シロイヌナズナ)中のタンパク質を解析した実績もあります。Q切断に使用可能な機器情報はありますか?A弊社で光切断実績のある機器は下記の2種類です。実際の光切断は画像を参考ください。nmの光照射(ハンディUVランプまたはクリーンベンチの殺菌灯など)では、十分な光切断ができません。ゲルが作業中に乾燥しないようガラス板に挟んだ状態で光切断を行ってください。光源と直接接触させて切断操作を行ってください。:本品は、微黄色~淡黄褐色粉末又は固体である。Center皆さまの実験を失敗させないために技術的なお困りごとや、ご相談・ご要望などお気軽にご相談ください。当社は、皆さまの実験が早く成功できるよう技術者が一緒に考える体制を整えております。9:00-17:00(土・日・祝日を除く)※フリーコールがつながらない場合はこちらをご利用ください。