tests)の価格もお得なセット販売です。Kit-WSTは、細胞から培地中に放出された乳酸脱水素酵素(LDH)活性を測定することにより細胞傷害を測定するキットである。LDHは細胞質に存在する酵素で、通常は細胞質に留まっているが、細胞膜が傷害を受けると培地中に放出される。放出されたLDHは安定なので、死細胞または細胞膜に傷害を受けた細胞数を測る指標として広く測定されている。LDHは、NAD(ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド)を補酵素として乳酸の脱水素化を触媒し、ピルビン酸とNADHを生成する。生じたNADHは、電子メディエーターを介してテトラゾリウム塩(無色)をホルマザン(橙色)に還元する。生成したホルマザンの量は、放出されたLDH活性に比例するため、傷害を受けた細胞数の指標となる。本キットは、生細胞と反応せず、かつ、細胞にダメージを与えないため、生細胞と死細胞が混在する細胞培養液中に直接試薬を加えても細胞傷害を測定することが可能である(ホモジニアスアッセイ)。一般的に用いられる細胞培養液を取り出してLDH活性を測定する方法も可能である(ノンホモジニアスアッセイ)。安定性の高い試薬を用いているため、調製した溶液は長期間保存でき、用時調製する必要がない。そのため、多検体アッセイから、少ない検体数の測定にも対応することができる。細胞培養液に直接試薬を添加するホモジニアスアッセイと、細胞培養液の上清を使うノンホモジニアスアッセイのいずれの方法でも測定が可能である。実験状況に応じて測定方法を選択することができる。Solutionは、簡単な操作で調製することができ、6ヶ月間冷蔵で保存することができる。Solutionが安定なため、試薬の無駄を減らすことができる。Kit-WSTを用いて測定した。Kit-WSTを用いた細胞膜損傷による遊離LDHを指標とした方法では各々の指標が異なるため、細胞毒性が現れる薬剤濃度に違いがあることが確認された。)抗体濃度に依存して吸光度が増加していることから、細胞への抗CD20抗体の結合により補体系が活性化され、細胞傷害が起こったことが確認された。(NADP+/NADPHやGSSG/GSH等)を測定するケースが増えています。nm程度の違いは問題ありません。nmのフィルターは弊社でも使用実績があり、使用可能です。nmと比較し高くなります。Kit-8では、測定原理が異なるために必ずしも相関性は得られません。Kit-8など数種の指標で測定いただくことをお勧めします。Kit-8:細胞内の代謝活性(デヒドロゲナーゼ)を測定(代謝活性が指標)QLD50値が過去の測定値と大きく異なります。なにか対処法はありますか?A・細胞の状態によって、被験物質による影響の受け方が変わりLD50値に影響します。ご使用になる細胞は、継代条件や継代回数をコントロールし、可能な限り同じ状態の細胞をお使い下さい。・被験物質の希釈系列を調製する際の希釈倍率を狭くすることで、より信頼性の高いLD50値を導き出すことができます。下記の要領で、使用する被験物質濃度を設定されることをおすすめします。被検物質が利用できる最高濃度を基準に10倍希釈を繰り返し、5-6桁程度の広い検体濃度域で毒性試験を実施する。1の結果から、その被検物質の濃度が現れる濃度の予測最高濃度(100%致死を生じる最低濃度)を基準に2倍希釈を繰り返し、2-3桁をカバーする濃度域で毒性試験をする。2の手順を繰り返し、最終的に細胞毒性が20-80%の間に少なくとも検体濃度が3点以上プロットできる濃度域を設定する。LDH3等の活性の測り分けはできません。QLDHはどの程度安定ですか?A以下のような報告例があります。培地中でのLDH活性の低下は1日で5%以下(文献1)、また、冷蔵保存では約1週間は安定と報告されています(文献2)。安定性は評価条件等により変化する可能性があります。ご理解の上、下記論文をご参考ください。Kit-WSTにLDH標準品は入っていますか?A細胞毒性試験用のため、LDH標準品は同梱しておりません。LDH活性も測定する場合は、別途、お買い求めください。solution添加後、3時間以内に測定してください。その場合は、プレートを遮光してください。Qウェル間でバラツキが多いのですが何が原因でしょうか?A以下の要因が考えられますので、ご確認ください。1培地の表面に気泡が発生している。以下の方法で気泡を除去してください。・シリンジや注射針の先端で、気泡を除去してください。1分間遠心してください。2インキュベーション中に培地の水分が蒸発して試薬濃度が変化している。マイクロプレートの一番外側のウェルは、インキュベーション中の水分蒸発が起こりやすいため、長時間インキュベーションする場合は、一番外側のウェルは測定には利用せず、培地のみを入れて使用してください。3試薬を添加する際に、最初と最後に添加するウェルの時間差が大きい。Solutionについては、マルチチャンネルピペットのご使用をお勧めします。4添加した試薬がよく混合されていない。Solutionを添加した際、プレートミキサーで混合するか、または、プレートの側面を指で軽く叩いて添加した試薬と培地を混和してください。Bufferは添加量が少なく、高コントロールの値に影響を与えるため、ご注意ください。プレートを叩く際は、ウェル中の培地が漏れ出さない程度にしてください。5使用する(マルチチャンネル)ピペットの秤量が正確ではない。ピペットの秤量が正確か確認してください。Qバックグラウンドが高くなりました。原因や対策を教えてください。A以下の原因が考えられます。1培地中の血清に含まれるLDHはバックグラウンドを上げます。無血清培地または血清量を5%以下となるように調製した培地をご使用下さい。2被検物質や培地中に強い還元性を持つ物質が含まれていると、色素WSTが誤発色してバックグラウンドを上げます。試薬ブランクを測定して確認してください。(なお、一般的なDMEM、RPMI、F-12等の培地には、通常、還元物質は含まれていません)Q細胞数最適化時の高コントロールと低コントロールの吸光度の差が小さいA1バックグラウンドが高いために低コントロールの吸光度が高くなっている可能性があります。以下を確認してください。・培地中の血清に含まれるLDHはバックグラウンドを上げます。無血清培地または血清量を5%以下となるように調製した培地をご使用下さい。・被検物質や培地中に強い還元性を持つ物質が含まれていると、色素WSTが誤発色してバックグラウンドを上げます。試薬ブランクを測定して確認してください。2高コントロールに生細胞が残っている可能性があります。シンボルマークSDSダウンロード関連製品この製品に関連する研究では、下記の関連製品も使われています。Center皆さまの実験を失敗させないために技術的なお困りごとや、ご相談・ご要望などお気軽にご相談ください。当社は、皆さまの実験が早く成功できるよう技術者が一緒に考える体制を整えております。9:00-17:00(土・日・祝日を除く)※フリーコールがつながらない場合はこちらをご利用ください。