sequence)の分野では、データ解析以前に、サンプルのとりかたやライブラリ調整の方針においてもお客様にとって判断に迷うことが多いと感じられます。原理と、実験の流れを教えていただきました。トレーニング用試薬(市販のChromiumにも同梱されている)を使用して、ライブラリ調整のwet操作を体験しました。手を動かす実験ならではの、気を遣いつつも急がねばならない緊迫感を味わいました。実験操作をしてみることで、ライブラリ調整のどこで失敗しがちなのか、影響がデータにどう表れるか、理解することができました。原理と、実験の流れを教えていただきました。細胞の生存率が80%以上、細胞懸濁液の中で細胞が一つひとつ単離されていると良いのだそうです。cDNA化までのスピードRNAは分解されやすいので、逆転写までの手際の良さも重要です。後半:ライブラリ調整の体験トレーニング試薬を使用して、ライブラリ調整のwet操作をしました。細胞懸濁液(というフリの液体)と試薬を、ライブラリ調整のためのチップに注いでいきます。マイクロピペットに触るのは中学生以来なのでそろそろと。機械のなかで、油滴の中に細胞が包まれた、シングルセルのドロップレットの入った液体(エマルジョン)がつくられます。この中で細胞+試薬からシングルセルのドロップレットを作製します。うまく調整できたのか...ドキドキしながら待つこと10分弱。ドロップレットの入った液体をそーっと取ります。(分離していなければOK)経験者はもちろん、ピペット操作の経験がほとんどない社員でも、無事きれいなエマルジョンを作製することができました!次は逆転写(RNAのcDNA化)を行います。ここまでの反応は、ドロップレットのなかでひと細胞ごとに行われます。トレーニングでは、ここまで作業させていただきました。以降はDNAの精製を経て、シーケンス用のアダプター付加などの行程が続きます。amelieffその他、高次解析のご相談も、お問い合わせくださいませ。RNA-seq解析で使用されるプロトコルのご紹介お久しぶりです。(1)memberid:amelieffid:Fuku-Iid:miwa-tid:hr-kid:fujinamisid:miya-yid:kubo-mid:ta-yid:yama_toid:yokokozuarchivesはてなブログをはじめよう!amelieffさんは、はてなブログを使っています。ブログを報告するスターをつけました引用をストックしましたストック一覧を見る閉じる引用するにはまずログインしてくださいログイン閉じる引用をストックできませんでした。再度お試しください閉じる限定公開記事のため引用できません。