iPS細胞の培養iPS細胞の培養フィーダーフリー培養フィーダー細胞を用いずにiPS細胞を培養する方法です。iPS細胞は当初はオンフィーダー培養(マウス細胞上での培養)で培養されていましたが、再生医療に用いるためにはフィーダー細胞やその他の動物由来成分を使用しないことが望ましいため、徐々にフィーダーフリー培養が主流になりつつあります。ここでStemFit®AK02N培地、iMatrix-511を用いてフィーダーフリーで培養し凍結保存する方法をご紹介します。cm2となるように添加します。iMatrix-511はプレートへの接着性が高いため、iMatrix-511添加後に素早く混ぜます。Tube等でまとめて作製することもできます。乾燥しないように注意します。μMとなるよう添加します。Y-27632の添加忘れや培地の取り違えを防ぐため、添加後にはチューブに(+Y-27632)などと記載し、培養記録簿にもチェックします。継代予定の細胞を観察し、分化細胞(iPS細胞ではなくなったと判断した細胞)を顕微鏡観察下で油性マーカーによるマーキングを行います。アスピレータ―の先端にフィルター無しチップをつけ、マーキングした箇所を吸引除去します。wellを反転させ、細胞が乾燥しないようにします。行いコロニー全体が白くなっていることを確認します。TrypLE処理は4分以内に留め、PBS洗浄後はY-27632添加培地を入れ、剥離します。継代時の培地にはY-27632が含まれているため、継代翌日の培地交換は、22時間~26時間の範囲での実施を推奨します。培地交換が早すぎると、培地交換後の生存率が低下し、培地交換が遅すぎるとiPS細胞の形態が変化します。※本内容は皆様が実験・研究をされる際の参考として掲載しているものです。結果を保証するものではありません。凍結予定の細胞を観察し、分化細胞(iPS細胞ではなくなったと判断した細胞)を顕微鏡観察下で油性マーカーによるマーキングを行います。アスピレータ―の先端にフィルター無しチップをつけ、マーキングした箇所を吸引除去します。wellを反転させ、細胞が乾燥しないようにします。行いコロニー全体が白くなっていることを確認します。TrypLE処理は4分以内に留め、PBS洗浄後はY27632添加培地を入れ、剥離します。TrypLE処理、PBSで洗浄後に、Y27632添加培地を入れた状態でCO2インキュベータへ入れておき、まとめて剥離します。(STEM-CELLBANKER)へ懸濁します。移し、-80°Cフリーザーへ格納します。凍結液への懸濁から-80°Cへの格納までの操作を30分以内に行います。※本内容は皆様が実験・研究をされる際の参考として掲載しているものです。結果を保証するものではありません。オンフィーダー培養フィーダー細胞(マウス線維芽細胞)を用いてiPS細胞を培養する方法です。マイトマイシン処理などを行い分裂を出来なくしたフィーダー細胞をディッシュに撒いておき、その上にiPS細胞をのせ培養する方法です。事業企画担当者や経営者向けのiPS細胞培養体験研修を行っており、ご好評いただいています。